國產與原研復方纈沙坦氨氯地平片質量對比研究

趙欣，倪薇，宋帆帆，黃雅菲

纈沙坦（valsartan）屬于血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（angiotensinⅡreceptor blockers，ARB）類抗高血壓類藥物［1］，氨氯地平（amlodipine）屬于鈣離子通道阻滯劑（calcium channel blocker，CCB）類抗高血壓類藥物［2］。復方纈沙坦氨氯地平片（商品名：倍博特）是諾華公司開發的全球第一個由血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑和鈣拮抗劑構成的單片復方制劑，主要用于治療原發性高血壓［3］。研究表明，本品對近90%高血壓病人達到良好的治療效果［4］。目前，國內已有多家藥品生產企業開發了復方纈沙坦氨氯地平片，其質量與原研制劑可能存在一定的差異性，進而會影響到臨床治療效果。為此，2020 年10 月至2022年2月本研究選擇了南京市溧水區人民醫院現有的國產與原研復方纈沙坦氨氯地平片，通過全面比較制劑的質量，評價二者質量的相似性程度。

1 材料與方法

1.1 儀器LC-20A 型高效液相色譜儀（日本島津公司）；MS204S 型萬分之一電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；S220 型pH 計（瑞士梅特勒-托利多公司）；Vision G2 Elite 8 型溶出試驗儀（美國漢森公司）；YD-35 型智能片劑硬度儀（天津市天大天發科技有限公司）；KB-1型口崩片崩解儀（天津市天大天發科技有限公司）。

1.2 材料纈沙坦（中國食品藥品檢定研究院，批號100651-202006，含量99.0%）；苯磺酸氨氯地平對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100374-202106，含量99.9%）；復方纈沙坦氨氯地平片（原研制劑，批號BVW83，規格纈沙坦80 毫克/片、氨氯地平5 毫克/片）；復方纈沙坦氨氯地平片（國產制劑，批號210421JB，規格含纈沙坦80 毫克/片、氨氯地平5 毫克/片）；甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸為分析純，純化水自制。

1.3 方法

1.3.1色譜條件優化

1.3.1.1檢測波長選擇 依次取纈沙坦對照品溶液和苯磺酸氨氯地平對照品溶液，進行全波長掃描，結果顯示，纈沙坦在273 nm 波長處有最大吸收，氨氯地平在237 nm 波長處有最大吸收，當檢測波長選擇為237 nm時，兩種藥物的檢測靈敏度良好。

1.3.1.2柱溫優化 分別考察了30 ℃、35 ℃和40 ℃，實驗發現，隨著柱溫升高，兩種藥物的保留時間均縮短，分離度也減小，綜合評估保留時間與分離度情況，確定柱溫為30 ℃。

1.3.1.3流速優化 分別考察了0.8、1.0 和1.2 mL/min，實驗發現，流速為1.2 mL/min時，兩種藥物的保留時間較短，分離度較小，而流速為1.0 mL/min 時，兩種藥物的分離度較好，確定流速為1.0 mL/min。

1.3.1.4色譜條件 色譜柱：Syncronis Hypersil BDS C8色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動相：乙腈-甲醇-水（磷酸調節pH 至2.8）為20∶33∶47（v/v/v）；流速：1 mL/min；檢測波長：237 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

1.3.2方法學考察

1.3.2.1對照品溶液配制 稱取纈沙坦對照品約80.0 mg 和苯磺酸氨氯地平對照品約7.0 mg（相當于氨氯地平5.0 mg），精密稱定，加入到同一個棕色量瓶（100 mL）中，再加入少量乙腈，超聲溶解，用流動相定容，搖勻，即得對照品儲備溶液（含纈沙坦800 mg/L、氨氯地平50 mg/L）。精密移取上述對照品儲備液2.5 mL 置于25 mL 棕色容量瓶中，用流動相定容，搖勻，即得纈沙坦與氨氯地平對照品溶液（每1 mL中含纈沙坦80 μg，氨氯地平5 μg）。

1.3.2.2供試品溶液配制 取復方纈沙坦氨氯地平片10片，精密稱定，用研缽研成粉末狀，精密稱定相當于1 片重量的藥物粉末（約相當于纈沙坦80 mg，氨氯地平5 mg）加入到100 mL 棕色量瓶中，再加少量乙腈，水浴超聲10 min，放冷至室溫，用流動相定容，搖勻，經0.22 μm 微孔濾膜過濾。精密移取續濾液2.5 mL置25 mL棕色量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

1.3.2.3輔料溶液配制 稱取除纈沙坦和氨氯地平以外的其他輔料壓制成只含有輔料的片劑。取上述片劑10片，用研缽研成粉末狀，精密稱取相當于1片重量的輔料粉末置100 mL容量瓶中，再加少量乙腈，水浴超聲10 min，放冷至室溫，用流動相定容，搖勻，經0.22 μm 微孔濾膜過濾。精密移取續濾液2.5 mL 置25 mL 棕色量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得輔料溶液。

1.3.2.4系統適用性試驗 取“對照品溶液”“供試品溶液”以及“輔料溶液”按照“1.3.1.4”項下的色譜條件進樣檢測，記錄色譜圖。結果顯示，纈沙坦和氨氯地平之間分離度良好（分離度R大于1.5），拖尾因子均在0.95~1.05，理論塔板數均大于8 000，輔料不干擾藥物測定。

1.3.2.5線性考察 稱取纈沙坦對照品約80.0 mg和苯磺酸氨氯地平對照品約7.0 mg（相當于氨氯地平5.0 mg），精密稱定，加入到同一個棕色量瓶（100 mL）中，再加入少量乙腈，超聲溶解，用流動相定容，搖勻，即得對照品儲備溶液（含纈沙坦800 mg/L，氨氯地平50 mg/L）。精密移取對照品儲備液，分別加入pH 1.2 鹽酸溶液、pH 4.5 醋酸鹽緩沖液、pH 6.8 磷酸鹽緩沖液三種介質溶液并定容，配制成含有纈沙坦濃度依次為4.0、8.0、20.0、40.0 和80.0 mg/L 對照品溶液，氨氯地平濃度依次為0.25、0.5、1.25、2.5 和5.0 mg/L 對照品溶液。按照“1.3.1.4”項下的色譜條件進樣檢測，記錄色譜圖，以峰面積（A）為縱坐標，以藥物濃度（C）為橫坐標進行線性回歸，繪制標準曲線，見表1。

表1 纈沙坦和氨氯地平在不同pH溶出介質中線性回歸方程

結果表明，在三種溶出介質中，纈沙坦濃度在4.0~80.0 mg/L 范圍內，氨氯地平濃度在0.25~5.0 mg/L 范圍內與峰面積均呈良好的線性關系，符合測定要求。

1.3.2.6精密度試驗 取“1.3.2.5”項下采用三種溶出介質配制的纈沙坦和氨氯地平對照品溶液（纈沙坦濃度均為20.0 mg/L，氨氯地平濃度均為1.25 mg/L），按照“1.3.1.4”項下的色譜條件均重復進樣6 針，分別記錄纈沙坦和氨氯地平的峰面積，計算各自的精密度（RSD）值。結果顯示，在pH 1.2鹽酸水溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液三種溶出介質中，纈沙坦的峰面積值的RSD（n=6）分別為0.6%、1.0%和1.0%，氨氯地平的峰面積值的RSD（n=6）分別為0.5%、1.0%和0.7%，RSD值均小于2%，說明精密度良好，符合測定要求［5］。

1.3.2.7濾膜吸附性考察 取復方纈沙坦氨氯地平片分別在3 種溶出介質中進行溶出度實驗，在每種溶出介質中分別在5、15和30 min取出溶出液，各兩份，一份經0.22 μm微孔濾膜過濾，另一份經4 000 r/min 離心10 min 處理，并用對應的溶出介質稀釋適當倍數，按“1.3.1.4”項下色譜條件進行檢測，分別記錄纈沙坦和氨氯地平的峰面積，考察濾膜對藥物的吸附性［6］。結果表明，在3 種溶出介質中，低、中、高3 種濃度的纈沙坦和氨氯地平溶液經濾膜過濾和離心處理，其峰面積幾乎無差異，本研究采用0.22 μm微孔濾膜過濾溶出介質。

2 結果

2.1 溶解度測定分別取過量的纈沙坦和苯磺酸氨氯地平原料藥混合物分別加入到pH 1.2 鹽酸溶液、pH 4.5 醋酸鹽緩沖液和pH 6.8 磷酸鹽緩沖液三種介質溶液中，恒溫水浴（37 ℃）振蕩器中振蕩72 h，離心，取上清液5 mL經0.22 μm濾膜過濾，用對應介質溶液稀釋一定倍數，按照“1.3.1.4”項下色譜條件進行檢測，分別記錄纈沙坦和氨氯地平的峰面積，并計算纈沙坦和氨氯地平在三種介質中的溶解度［7］，結果見表2。結果顯示，纈沙坦的溶解度呈pH依賴性［8］，在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶解度較高，而在pH 1.2 鹽酸溶液中的溶解度較低；氨氯地平的溶解度不具有pH依賴性。

表2 纈沙坦和氨氯地平在不同pH介質中37 ℃溶解度

2.2 質量對比研究

2.2.1硬度及崩解時限對比研究 分別取原研和國產復方纈沙坦氨氯地平片各10 片，通過硬度儀測定片劑硬度；另取上述兩種制劑各10 片，通過崩解儀測定片劑的崩解時限［9］，結果見表3。測定結果顯示，兩種復方纈沙坦氨氯地平片的硬度存在一定的差異，國產制劑硬度偏低，而崩解時限基本一致。

表3 國產和原研復方纈沙坦氨氯地平片硬度及崩解時限檢測結果（n=10）

2.2.2溶出度對比研究 依據《美國藥典》40 版關于復方纈沙坦氨氯地平片溶出度方法，選擇槳法，轉速為75 r/min，溶出介質為pH 6.8 磷酸鹽緩沖液，體積為1 000 mL，溫度為（37.0±0.5）℃。分別取國產與原研復方纈沙坦氨氯地平片各6片加入到溶出杯杯中，啟動攪拌槳，在30 min 時間點取溶出介質5 mL，經0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液稀釋一定倍數，按照“1.3.1.4”項下色譜條件進行檢測，分別記錄纈沙坦和氨氯地平的峰面積，并計算溶出度。要求纈沙坦和氨氯地平的溶出度均不低于標示量的80%。結果見表4。在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中，國產與原研復方纈沙坦氨氯地平片在30 min 內，纈沙坦和氨氯地平的溶出度均達到80%以上，且二者溶出度均值較為相似。

表4 國產與原研復方纈沙坦氨氯地平片的溶出度比較（n=6）

2.2.3溶出相似性比較 依據《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》要求，通過比較國產與原研復方纈沙坦氨氯地平片在三種（pH 1.2 鹽酸水溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液）溶出介質中的溶出曲線相似性，以評估國產與原研制劑的質量差異性［10-12］。選擇“2.2.2”項下所描述的測定復方纈沙坦氨氯地平片溶出度方法，介質體積均為1 000 mL，轉速為75 r/min，溫度為（37.0±0.5）℃。分別取國產與原研復方纈沙坦氨氯地平片各6 片加入到溶出杯杯中，啟動攪拌槳，分別在5、10、15、20 和30 min 時間點取溶出介質5 mL，經0.22μm 微孔濾膜過濾，取續濾液稀釋一定倍數，按照“1.3.1.4”項下色譜條件進行檢測，分別記錄纈沙坦和氨氯地平的峰面積，并計算兩種藥物的溶出度。將溶出度數據帶入到公式2］-0.5×100｝中計算相似因子（f2），比較國產與原研復方纈沙坦氨氯地平片在三種溶出介中的溶出曲線相似性［13］，其f2值在50~100 之間表明兩種制劑的溶出相似性較好，該值越大相似性越高；而f2值小于50 時，表明兩種制劑的溶出相似性較差，該值越小相似性越差，國產與原研制劑的溶出度相似性結果比較見表5，6。

表5 國產與原研制劑在不同溶出介質中纈沙坦的溶出曲線相似性比較

表6 國產與原研制劑在不同溶出介質中氨氯地平的溶出曲線相似性比較

由溶出曲線對比研究可知，國產與原研制劑中的纈沙坦在pH 1.2鹽酸溶液和pH 4.5醋酸鹽緩沖液中30 min 內不能完全溶出，而在pH 6.8 磷酸鹽緩沖液中可以完全溶出，這是由于纈沙坦在較低的pH條件下溶解度較低，達不到漏槽條件［14］；氨氯地平在三種溶出介質中30 min 內均可以達到90%以上。相似性比較結果顯示，國產與原研復方纈沙坦氨氯地平片在不同溶出介質中的f2值均大于80，說明兩種制劑的體外溶出相似性極高［15］。

3 討論

由于氨氯地平屬于生物藥劑學分類系統（bio?pharmaceutics classification system，BCS）Ⅰ類藥物，具有高溶解性和高滲透性，主要吸收部位在小腸，其口服生物利用度可達到近90%，吸收較好，不同廠家生產的制劑很容易達到生物等效［16］；而纈沙坦屬于BCSⅡ類弱酸性藥物［17］，其在酸性條件下藥物以分子形式存在，而在弱酸性或中性條件下以離子形式存在，由于纈沙坦的主要吸收部位在十二指腸和小腸上端［18］，在該體內環境中藥物部分是以離子形式存在，其口服生物利用度僅為25%左右，吸收較差［19］，不同廠家生產的制劑很難達到生物等效［20］。因此需要一種有效手段來評價不同廠家生產的復方纈沙坦氨氯地平片質量一致性。

為了同時測定溶出介質中纈沙坦和氨氯地平的含量，本研究首先采用文獻報道的HPLC 法進行方法學開發［21］，實驗過程中發現，采用該分析方法不能使氨氯地平和纈沙坦達到良好的分離，并且氨氯地平的峰型較差，影響其色譜峰的準確積分，因此本研究重新開發了能夠同時測定纈沙坦和氨氯地平含量的HPLC 法，經方法學驗證，該色譜條件能夠有效的分離纈沙坦和氨氯地平，專屬性強，且輔料不干擾測定，適用于復方纈沙坦氨氯地平片的藥物溶出度含量檢測。

本研究通過比較國產與原研復方纈沙坦氨氯地平片的在多介質條件中的藥物溶出曲線，結果顯示，國產與原研制劑在不同溶出介質中的f2值均大于80，說明兩種制劑的體外溶出相似性極高，很可能會達到生物等效。本研究也可以為其他廠家生產的復方纈沙坦氨氯地平片質量一致性評價提供參考。