山藥中噻唑膦和阿維菌素的殘留檢測及膳食風險評估

王俊曉，安 莉，馬 歡，朱會麗，賀素霞，郭 鑫，吳緒金，李 萌*

（1.河南省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所/河南省糧食質量安全與檢測重點實驗室，鄭州 450002；2.河南中醫藥大學藥學院，鄭州 450046；3.黃河科技學院，鄭州 450063；4.河南省實驗中學，鄭州 450002）

噻唑膦（Fosthiazate）屬于有機磷類殺線蟲劑，作用機制為對線蟲體內乙酰膽堿酯酶的合成產生抑制作用，可用于防治根結線蟲等[1-2]；阿維菌素（Abamectin）屬于抗生素類殺蟲劑，作用方式為借助胃毒和觸殺作用對昆蟲進行殺滅，作用機制為對神經遞質γ-氨基丁酸產生抑制，進而激活氯化物通道，同樣可用于防治根結線蟲等[3-4]。

目前文獻主要報道了噻唑膦和阿維菌素對線蟲的防治效果[5-6]、劑型的制備[7]、毒力測定[8]、對植物活性成分的影響[9]，以及采用氣相色譜或液相色譜與質譜聯用等技術進行殘留檢測和膳食風險評估。例如，Lin等[10]將番茄和櫻桃番茄樣本經乙腈提取，N-丙基乙二胺固相吸附劑（PSA）和十八烷基硅烷鍵合相吸附劑（C18）凈化，采用高效液相色譜借助紫外檢測器檢測噻唑膦的殘留量。Wu等[11]將黃瓜樣本用乙腈提取，經過石墨化碳黑吸附劑（GCB）和PSA凈化，借助氣相色譜串聯質譜測定噻唑膦的殘留量。張玉婷等[12]采用乙腈-水（3∶2，V/V）對西瓜樣本進行提取，利用氣相色譜借助電子捕獲檢測器對噻唑膦殘留量進行檢測。羅雪婷等[13]將茶樹菇樣本經1%乙酸乙腈-水（8∶1，V/V）提取，采用超高效液相色譜串聯質譜對阿維菌素的殘留量進行檢測。陳曉蘭等[14]將羅漢果樣本用乙腈提取，土壤樣本用乙腈-水（2∶1，V/V）提取，PSA和C18凈化，采用超高效液相色譜對阿維菌素殘留量進行檢測。然而，關于噻唑膦和阿維菌素在山藥中的殘留檢測方法、最終殘留量和長期膳食風險評估均未見報道。本研究旨在建立山藥中噻唑膦和阿維菌素的檢測方法，并對噻唑膦和阿維菌素的最終殘留量進行長期膳食風險評估，為指導噻唑膦和阿維菌素在山藥上的合理使用提供基礎數據。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

供試試劑：10%噻唑膦微囊懸浮劑，鶴壁全豐生物科技有限公司；0.5%阿維菌素顆粒劑，汝陽自強生物科技有限公司；噻唑膦標準品（純度98.8%）、阿維菌素標準品（純度97.2%），德國Dr. Ehrenstorfer GmbH公司；甲酸（色譜純），CNW Technologies；乙腈（色譜純），默克股份兩合公司；氯化鈉（分析純），國藥集團化學試劑有限公司；N-丙基乙二胺固相吸附劑（PSA）、十八烷基硅烷鍵合相吸附劑（C18），天津博納艾杰爾科技有限公司。

供試儀器：LCMS-8050高效液相色譜-三重四極桿質譜聯用儀，日本島津儀器公司；TARGIN VX-Ⅲ多管渦旋振蕩器，北京踏錦科技有限公司；L-550臺式低速離心機，湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司；Milli-Q超純水，默克Millipore公司。

1.2 田間試驗

按照NY/T 788—2018《農作物中農藥殘留試驗準則》[15]的要求，于河南焦作、河北邢臺、山西忻州、遼寧遼陽、安徽亳州、福建福安6地進行田間試驗。按照農藥標簽規定設置噻唑膦和阿維菌素試驗有效劑量分別為3 000 g/hm2和375 g/hm2，于播種前施藥1次，在收獲期采集樣本。隨機采樣，每個小區采集2個平行樣品，每份樣品采集12個塊莖，用不銹鋼刀切碎樣品，并充分混勻，于-20℃儲藏。

1.3 提取及凈化

準確稱取10.00 g山藥樣品置于50 mL離心管中，加入提取溶劑（乙腈∶水=2∶1，V/V）30 mL，3 g氯化鈉，振蕩提取20 min后于4 000 r/min離心，取1.5 mL上清液裝入含有0.02 g PSA和0.03 g C18的2 mL離心管中，渦旋混勻2 min，于4 000 r/min離心5 min，取上清液過0.22 μm有機濾膜至進樣小瓶，待分析。

1.4 儀器條件

色譜條件。液相色譜柱：島津Shim-pack GISS C18（2.1 mm×100 mm，1.9 μm）；柱溫：40℃；流速：0.4 mL/min；進樣量：5 μL。洗脫程序：流動相A為0.2%甲酸水溶液，B為乙腈溶液。梯度洗脫程序為0～1 min，80%A；1～2 min，80%～20%A；2～5 min，20%A；5～6 min，20%～80%A；6～8 min，80%A。

質譜條件。掃描方式：電噴霧離子源ESI＋；碰撞氣（氬氣）：270 kPa；霧化氣流速：3.0 L/min；加熱氣流速：10 L/min；接口溫度：300℃；脫溶劑管溫度：250℃；加熱塊溫度：400℃；多反應監測模式（MRM）下監測離子和碰撞電壓見表1。

表2 山藥中噻唑膦和阿維菌素的添加回收率及相對標準偏差（n=5）

1.5 標準溶液配制

分別稱取噻唑膦標準品0.010 2 g和阿維菌素標準品0.010 2 g于10 mL容量瓶中，加入乙腈超聲至完全溶解，冷卻后定容成1 000 mg/L標準儲備液。分別用乙腈和山藥空白基質溶液進行稀釋，稀釋成0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5 mg/L的標準溶液，在1.4條件下進行檢測。

1.6 添加回收

分別在山藥空白對照樣品中添加噻唑膦和阿維菌素標準溶液，添加水平為0.01、0.1、1 mg/kg，混合均勻，靜置2 h，按照1.3的提取和凈化方法進行處理，在1.4條件下進行檢測，計算山藥中噻唑膦和阿維菌素的添加回收率和相對標準偏差。

1.7 數據處理

1.7.1 基質效應

基質效應。樣品的基質效應（ME）按式（1）計算。

式中：當ME＞0時，為基質增強效應，當ME＜0時，為基質減弱效應；-20%≤ME≤20%為弱基質效應；-50%≤ME＜-20%或20%＜ME≤50%為中等基質效應；ME＜-50%或ME＞50%為強基質效應。

1.7.2 慢性膳食風險評估

膳食風險評估。按照我國膳食結構的組成，根據試驗結果得到的殘留試驗中值與國家規定的最大殘留限量，采用公式（2）計算噻唑膦和阿維菌素的國家估算每日攝入量（NEDI），再依據2種藥劑的每日允許攝入量（ADI），按式（3）計算風險商（RQ）。

式中：STMRi為農藥在某種食品中的規范殘留中值，mg/kg；STMR-Pi為加工因子核正的規范殘留試驗中值，mg/kg；Fi為一般人群對該食品的消費量，kg；bw為中國人均體重，kg（一般以63 kg計）；ADI為農藥的每日允許攝入量mg/(kg bw)。

當RQ≤100%時，表示其風險可以接受，RQ值越小，風險越小；當RQ＞100%時，表示有不可接受的慢性風險，RQ值越大，風險越大。

2 結果與分析

2.1 方法驗證

2.1.1 標準曲線

以基質標準溶液的質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制供試試劑標準曲線。標準溶液范圍為0.005～0.5 mg/L時，噻唑膦的標準曲線為y=17 200 560.3x-14 477.99，相關系數R2為1.000；阿維菌素的標準曲線為y=286 581x-147.28，相關系數R2為0.999 5。對比乙腈溶液和山藥空白基質溶液配制的標準曲線，噻唑膦在山藥中的基質效應為1.1%，為弱基質效應；而阿維菌素在山藥中的基質效應為45.9%，在20%～50%范圍內，為中等基質效應，因此采用山藥空白基質溶液配制標準曲線。

2.1.2 添加回收率

當添加水平在0.01、0.1、1 mg/kg時，噻唑膦和阿維菌素的平均回收率分別為87%～110%、80%～89%，相對標準偏差分別為0.6%～5.5%、1.0%～2.6%。2種藥劑在山藥中的最低檢測濃度均為0.01 mg/kg，添加回收率、相對標準偏差、最低檢測濃度均符合NY/T 788—2018《農作物中農藥殘留試驗準則》[15]規定。

2.2 最終殘留量

噻唑膦和阿維菌素施藥劑量分別為3 000 g/hm2和375 g/hm2，于播種前施藥1次，在收獲期采收，山藥中噻唑膦和阿維菌素的最終殘留量均為＜0.01 mg/kg。GB 2763—2021《食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量》[16]規定山藥中阿維菌素的最大殘留限量為0.02 mg/kg，因此本試驗山藥中阿維菌素的最終殘留量低于我國制定的限量標準。

2.3 慢性膳食攝入評估

我國規定阿維菌素的每日允許攝入量（ADI）為0.001 mg/kg bw，噻唑膦的ADI值為0.004 mg/kg bw，結合試驗所得的殘留試驗中值（STMR）0.01 mg/kg，根據1.7.2中公式進行計算，得到普通人群的慢性膳食攝入風險評估結果（表3、表4）。結果表明，噻唑膦和阿維菌素膳食風險均小于100%，說明噻唑膦和阿維菌素對一般消費人群的危害是可以接受的。

表3 噻唑膦膳食風險評估

表4 阿維菌素膳食風險評估

3 討論與結論

在農藥殘留檢測過程中，基質效應是影響定量準確性的關鍵因素[17]，基質中的干擾物會與待測物共同競爭色譜柱上的活性位點，影響待測物進入質譜檢測器中，改變定量結果的準確度[18]。本試驗噻唑膦為弱基質效應，而阿維菌素的基質效應均在20%～50%范圍內，屬于中等基質效應，在使用高效液相色譜-質譜分析山藥中噻唑膦和阿維菌素菌殘留量時，建議使用空白基質配制標準品溶液進行定量。

最終殘留試驗測定了山藥塊莖中噻唑膦和阿維菌素的殘留量。結果表明，在山藥塊莖中噻唑膦和阿維菌素的最終殘留量較低，均為＜0.01 mg/kg。分析原因可能是噻唑膦和阿維菌素的半衰期均小于30 d[19-20]，屬于易降解農藥；山藥的生長周期為210 d左右，噻唑膦和阿維菌素均是播種前施藥，農藥在山藥生長過程中可能被環境中的微生物分解，因而不易在山藥中富集。

為指導噻唑膦和阿維菌素在山藥上的合理使用，對其進行膳食風險評估。當噻唑膦施藥有效劑量為3 000 g/hm2，播種前藥土法施藥1次；阿維菌素施藥有效劑量為375 g/hm2，播種前溝施施藥1次，在收獲期采收山藥，噻唑膦和阿維菌素的普通人群國家估計每日攝入量分別是0.047、0.059 mg，分別占日允許攝入量的18.7%、93.4%，因此對一般消費人群是安全的。