飼糧添加蚯蚓液對高溫環境下肉雞生長性能、小腸抗氧化能力和屏障功能的影響

雷小文 顏語 吳麗娟 李秋粉 李建軍 鐘云平 黎觀紅

摘要：為探討飼糧中添加蚯蚓液對高溫環境下肉雞生長性能和腸道屏障功能的影響，選取21日齡健康狀況良好、體質量相近的817肉公雞288羽，隨機分成4個處理組，每個處理組6個重復，每個重復12羽雞，肉雞飼養于夏季高溫環境中。4個處理組飼糧分別添加0.0%（對照組）、0.5%、2.0%、3.5%蚯蚓液，試驗期為21d。結果顯示，與對照組相比，飼糧添加3.5%蚯蚓液顯著提高肉雞平均日采食量（P<0.05），并有提高平均日增質量的趨勢（P=0.095）。與對照組相比，飼糧添加0.5%和2.0%蚯蚓液顯著提高肉雞回腸黏膜總抗氧化力和過氧化氫酶活性（P<0.05），顯著降低回腸黏膜丙二醛水平（P<0.05）。與對照組相比，飼糧添加2.0%蚯蚓液顯著提高肉雞回腸絨毛高度（P<0.05），飼糧添加蚯蚓液顯著降低肉雞血清二胺氧化酶、D-乳酸和內毒素水平（P<0.05），顯著提高空腸和回腸黏膜sIgA水平（P<0.05）。以上結果表明，飼糧添加蚯蚓液可不同程度地提高高溫環境下肉雞生產性能和小腸黏膜抗氧化能力，緩解高溫環境對肉雞小腸黏膜屏障功能的損傷。

關鍵詞：高溫；蚯蚓液；肉雞；生產性能；腸道屏障功能

中圖分類號：S831.5文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2023）10-0163-05

家禽是熱敏感動物，極易受高溫應激而影響其生產性能。腸道是應激反應的靶器官，極易受到高溫應激、環境缺氧等因素的影響，造成黏膜損傷，進而引起腸道細菌易位和內毒素侵入機體并引起其他組織器官功能變化或損傷［1］。國內外研究揭示，高溫應激導致家禽腸道黏膜屏障結構和功能損傷，影響其對營養物質正常的消化吸收功能，并提高對病原菌的易感性，最終導致其生產性能下降［2-3］。蚯蚓富含蛋白質、脂肪、維生素和微量元素，且含有多種核苷酸、蚯蚓素、蚯蚓堿、琥珀酸、膽堿、膽甾醇等活性物質［4］。蚯蚓液，又分蚯蚓自溶液、蚯蚓提取物等。蚯蚓體內含有的蛋白水解酶如纖溶酶等，在高溫等特定條件下，可使蚯蚓自身溶解成液體，這種自溶方法提取率一般為75%以上［5］。研究表明，蚯蚓液可改善家禽的生長性能，提高家禽免疫能力［6-7］。然而，蚯蚓及其制品在緩解肉雞熱應激損傷研究還未見報道。本試驗旨在探究熱應激條件下飼糧中添加蚯蚓液對肉雞生長性能和小腸屏障功能的影響，為蚯蚓產品在緩解肉雞熱應激損傷方面提供參考依據。

1材料與方法

1.1蚯蚓液的制備

蚯蚓品種為大平2號與大平3號，養殖周期為15d。收集成熟的蚯蚓制備蚯蚓液，蚯蚓液的制備參照雷小文等的方法［8］。

1.2試驗設計

試驗選用健康良好的15日齡817肉公雞350羽，常規飼養以及免疫，飼喂至21日齡，選取健康，體質量相近288羽，隨機分成4個處理組，蚯蚓液添加量分別為0.0%（對照組）、0.5%、2.0%、3.5%，每個處理組6個重復，每個重復12羽雞，飼養至42日齡。試驗于2020年江西省南昌市江西農業大學畜禽飼養基地進行，飼養期間處于南昌夏季高溫（2020年8月10—31日，共21d），每日09：00—17：00的平均溫度為33.4℃。

1.3試驗飼糧與飼養管理

本試驗采用玉米-豆粕型飼糧，參考我國《雞飼養標準》（NT/T33—2004）推薦的營養水平進行配制（表1）。試驗采用4層籠養飼養法，乳頭式自動飲水，所有試驗雞均自由采食和飲水。試驗前對雞舍和周圍環境進行嚴格消毒。采用連續光照、自然通風。每天定時清理食槽，清理糞盤并消毒，雞羽按正常免疫程序進行。

1.4樣品采集與制備

在42日齡時，肉雞提前禁食12h，期間自由飲水，每個重復隨機選取1羽肉雞，翅靜脈采血10mL，3000r/min離心8min，分離血清，-20℃保存備用。采血后立即斷頸處死，剖開腹腔，采集空腸、回腸中段4cm，采用DEPC水洗凈內容物，置于裝有10%甲醛溶液中固定，用于制作腸道切片。采集空腸和回腸中下段，用預冷的生理鹽水沖洗干凈內容物，刮取腸黏膜并置于凍存管中，迅速放入液氮罐中，后于-80℃冰箱保存備用。

1.5測定指標與方法

1.5.1生長性能

分別在肉雞21日齡、42日齡的08：00對每組每重復雞稱空腹質量，每天記錄每個重復飼糧的飼喂量和剩余量，計算平均日采食量（ADFI）、平均日增質量（ADG）和料質量比（F/G）。

1.5.2小腸黏膜抗氧化指標的測定

分別取空腸、回腸腸段，快速刮取腸黏膜，放入凍存管于-20℃冰箱保存。采用生理鹽水制備10%組織勻漿，離心取上清進行抗氧化指標的檢測，采用BCA法測定上清液的蛋白濃度。采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定總抗氧化能力（T-AOC）、過氧化氫酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量。

1.5.3小腸黏膜形態結構的測定

將固定好的腸道樣品經脫水-透明-浸蠟-石蠟包埋-切片（5μm厚）-染色（蘇木精-伊紅，HE染色），最后通過光學顯微鏡拍照并觀察切片，利用MoticImagesAdvanced3.2圖像軟件測量絨毛高度（VH）和隱窩深度（CD）并計算絨毛高度和隱窩深度比值（V/C）。

1.5.4血清二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（D-LA）和內毒素（LPS）含量的測定

采用南京建成生物工程研究所的試劑盒，并嚴格按照試劑盒說明書測定DAO活性、D-LA和LPS含量。

1.5.5小腸黏膜分泌型IgA（sIgA）含量的測定

空腸和回腸黏膜sIgA含量采用上海酶聯生物科技有限公司的試劑盒并用ELISA法測定，嚴格按照說明書進行。

1.6數據統計分析

采用SPSS22.0軟件中的one-wayANOVA過程進行單因素方差分析，采用Duncans法進行多重比較，結果以“平均值±標準誤”表示，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著，0.05

2結果與分析

2.1飼糧添加蚯蚓液對高溫環境下肉雞生長性能的影響

由表2可知，與對照組相比，飼糧中添加3.5%蚯蚓液顯著提高高溫環境下21～42日齡肉雞平均日采食量（P<0.05）。飼糧添加蚯蚓液對高溫環境下，21～42日齡肉雞的料質量比無顯著影響（P>0.05），但有提高平均日增質量趨勢（P=0.095）。

2.2飼糧添加蚯蚓液對高溫環境下肉雞小腸黏膜抗氧化能力的影響

由表3可知，與對照組相比，飼糧添加0.5%蚯蚓液極顯著提高高溫環境下肉雞回腸黏膜T-AOC水平（P<0.01），添加0.5%、2.0%和3.5%蚯蚓液均極顯著提高高溫環境下肉雞回腸黏膜CAT活性（P<0.01），添加0.5%和2.0%蚯蚓液顯著降低高溫環境下肉雞回腸黏膜中MDA含量（P<0.05）。與對照組相比，飼糧添加不同含量蚯蚓液對空腸黏膜MDA含量、T-AOC水平和CAT活性均無顯著影響（P>0.05）。

2.3飼糧添加蚯蚓液對高溫環境下肉雞小腸黏膜形態結構的影響

由表4可知，與對照組相比，飼糧中添加不同含量蚯蚓液對高溫環境下肉雞空腸的絨毛高度、隱窩深度和V/C值均無顯著影響（P>0.05），對高溫環境下肉雞回腸隱窩深度和V/C值無顯著影響（P>0.05），飼糧添加2%蚯蚓液顯著提高高溫環境下肉雞回腸絨毛高度（P<0.05）。

2.4飼糧添加蚯蚓液對高溫環境下肉雞血清DAO、D-LA和LPS含量的影響

由表5可知，與對照組相比，飼糧中添加不同含量蚯蚓液顯著降低高溫環境下肉雞血清中D-LA的水平（P<0.05），極顯著降低高溫環境下肉雞血清中DAO和LPS的水平（P<0.01）。

2.4飼糧添加蚯蚓液對高溫環境下肉雞小腸黏膜sIgA含量的影響

由表6可知，飼糧添加不同含量的蚯蚓液均極顯著提高高溫環境下肉雞空腸黏膜sIgA含量（P<0.01），飼糧添加0.5%蚯蚓液極顯著提高高溫環境下肉雞回腸黏膜sIgA含量（P<0.01）。

3討論

肉雞是熱敏感動物，全身覆蓋羽毛，且皮膚表層缺乏汗腺，極易遭受高溫應激。研究表明，高溫應激引起肉雞采食量下降、飼料轉化率降低，損傷腸道黏膜屏障結構和功能，影響其對營養物質正常的消化吸收功能，并增加對病原菌的易感性，最終導致生產性能下降［9-10］。高溫應激成為影響肉雞養殖產業經濟效益的重要因素之一。由于養殖實踐中的技術限制和經濟成本等原因，營養干預成為緩解肉雞高溫應激的重要手段［11］。蚯蚓是我國重要的中藥材之一，蚯蚓富含多種生物活性物質。筆者所在課題組前期研究發現，飼糧添加蚯蚓液可提高番鴨和寧都黃雞生產性能［7-8］。本研究發現，飼料中添加3.5%蚯蚓液顯著提高高溫環境下21～42日齡肉雞平均日采食量，并有提高日增質量的趨勢，但對飼料轉化率無顯著。由于熱應激會激活下丘腦-垂體-腎上腺軸，繼而影響攝食中樞與消化道交感神經，最終導致采食量下降［12］，而蚯蚓液本身富含“鮮味氨基酸”谷氨酸，可提高飼糧適口性，對生產性能具有一定的改善作用。

在熱應激條件下，機體產生過量活性氧，機體抗氧化穩態失衡，導致氧化應激［13］，機體氧化應激導致體內自由基和脂質過氧化物大量累積，SOD作為抗氧化酶系的第一道防線，首先將其催化同時生成H2O2，而后CAT與GHS-Px再對SOD的催化產物進行清除。MDA是自由基作用于脂質發生過氧化反應的氧化終產物，具有細胞毒性，能夠反映機體脂質過氧化程度。蚯蚓液富含SOD、CAT及過氧化物酶（POD），具有較強的抗氧化作用，對脂質過氧化物及自由基具有清除作用［14］。本試驗在飼糧中添加蚯蚓液，相較于對照組，顯著降低了熱應激肉雞回腸黏膜中MDA水平，顯著提高了回腸中T-AOC水平。同時，添加蚯蚓液均能顯著提高回腸黏膜中CAT酶活，這與周億金等的研究結果［15］一致。這些研究結果表明，蚯蚓液可通過提高腸道抗氧化能力，減少高溫環境下肉雞機體自由基與脂質過氧化物的產生，從而提高腸道健康。

腸道既是機體的消化器官，又是重要的免疫器官，同時又是熱應激主要的靶器官之一。研究表明，熱應激損害腸道黏膜組織形態，絨毛萎縮變短、隱窩深度增加、消化和免疫功能受損［16-17］。本試驗發現，飼糧中添加2%蚯蚓液能顯著提高42日齡肉雞回腸黏膜小腸絨毛長度，這表明飼糧中添加蚯蚓液能在一定程度上緩解高溫環境下肉雞回腸黏膜結構損傷。腸道黏膜的完整性對于上皮細胞的正常功能和防止腸腔內有害致病菌進入血液循環至關重要。內毒素（LPS）是革蘭氏陰性菌細胞壁中的一種高致病性成分，在應激條件下高濃度LPS存在于腸腔中，當腸道屏障受損時釋放到血液［18］。體循環中LPS濃度的增加表明腸道屏障功能受損［17］。D-LA是腸道細菌的產物，腸道菌群失衡導致D-LA過度產生，在機體腸道黏膜屏障受損時，腸道黏膜通透性增加，使得血液中D-LA水平升高［19］。DAO主要存在于小腸絨毛，DAO可通過受損的腸道屏障進入血液［20］。因此，血清LPS、D-LA和DAO濃度通常被用來作為評價腸黏膜屏障完整性和通透性的標志物。本試驗發現，飼糧添加蚯蚓液顯著降低高溫環境下肉雞血清D-LA水平，極顯著降低熱應激肉雞血清中DAO和LPS水平，由此表明，蚯蚓液可改善高溫環境下肉雞腸道黏膜結構，緩解高溫應激引起的腸道屏障損傷。本試驗發現，飼糧中添加蚯蚓液能顯著提高高溫環境下肉雞空腸和回腸黏膜重要防御因子sIgA水平。提示飼糧中添加蚯蚓液可顯著提高高溫應激條件下肉雞腸道免疫功能，提高肉雞抗應激能力。

4結論

綜上所述，飼糧中添加蚯蚓液可不同程度地提高高溫環境下肉雞生產性能和小腸黏膜抗氧化能力，改善高溫環境下肉雞腸道黏膜結構和免疫功能，緩解高溫環境對肉雞小腸黏膜屏障功能的損傷。

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