寇耀,賈映東,楊寧波

(遂寧市中心醫院 胃腸外科,四川 遂寧 629000)

胃癌是常見的消化系統惡性腫瘤,早期癥狀不明顯,50%的患者在確診時已處于晚期[1]。臨床上大約30%的胃癌患者在行根治性胃切除術后會復發,僅靠手術難以治愈,提高胃癌患者的治療效果是該病研究的重點[2]。因此,探索胃癌發生、發展相關指標,對胃癌個體化治療及預后預測有重要意義。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一組重要的轉錄RNA分子,長度大于200核苷酸,已有研究證實大量lncRNAs在胃癌等多種腫瘤中表達失調[3]。lncRNA SOX2重疊轉錄本(lncRNA SOX2 overlapping transcript,lncRNA SOX2OT)是一個位于SOX2基因內含子區域的新型lncRNA,在結直腸癌、食管鱗狀細胞癌、骨肉瘤、肺癌、非小細胞癌、肝細胞癌等多種腫瘤中異常表達,并扮演關鍵角色[4-5]。韓玲等[6]關于卵巢癌的研究結果顯示,卵巢癌組織中lncRNA SOX2OT高表達與TNM分期、淋巴結轉移以及腫瘤大小有關,而敲除lncRNA SOX2OT后,卵巢癌細胞侵襲受抑制。近期一項研究[7]顯示,lncRNA SOX2OT在膠質母細胞瘤中能夠促進替莫唑胺耐藥性。本研究通過探討胃癌組織中lncRNA SOX2OT的表達水平,并分析lncRNA SOX2OT與患者預后的關系,以期為胃癌的臨床治療、預后評估提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年1月至2018年4月收治的胃癌患者105例為研究對象,經術后組織病理學證實為原發性胃癌。術中收集組織標本,腫瘤組織在癌中心部位取樣,距胃癌組織5 cm外的正常胃黏膜為癌旁組織,所取樣本迅速置于液氮中,隨后貯存在-80 ℃冰箱。患者年齡≥60歲70例,<60歲35例,男61例,女44例。腫瘤直徑于術前7 d行內鏡超聲造影測量,直徑≥5 cm 48例,<5 cm 57例。腫瘤分化程度依據胃癌診療規范[8]分為低分化36例,中、高分化69例;腫瘤原發部位為胃底49例,胃體56例; TNM分期[9]Ⅰ～Ⅱ期64例,Ⅲ～Ⅳ期41例;淋巴結轉移32例,無轉移73例。

納入標準:(1) 初次診斷為胃癌;(2) 入組前無放療或化療史;(3) 臨床資料完整;(4) 經胃鏡及組織病理學檢查確診;(5) 行胃癌根治術;(6) 患者及其家屬自愿參加。排除標準:(1) 合并心腦血管病者;(2) 合并胃腸道梗阻、穿孔者;(3) 器官移植的患者;(4) 胃鏡檢查禁忌者;(5) 合并其他惡性腫瘤者。本研究經我院倫理委員會批準(批號2016-1209),取得患者及其家屬知情同意,并簽署知情同意書。

1.2 胃癌組織中lncRNA SOX2OT檢測方法

使用總RNA提取試劑(total RNA extraction reagent,Trizol)試劑(貨號:12183555,美國英杰Invitrogen公司)提取總RNA,然后使用超微量核酸蛋白分析儀(型號:K5500plus,北京凱奧科技發展有限公司)檢測RNA質量,OD260/OD280在1.8至2.0之間的樣品可以用于反轉錄;使用Super-M-MLV反轉錄試劑盒(貨號:PR6502,北京百泰克生物技術有限公司)進行反轉錄,使用SYBR Green染料(貨號:SY1020,北京索萊寶科技有限公司)在實時熒光定量聚合酶鏈反應(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)儀(型號:Exicycler 96,韓國BIONEER公司)采集lncRNA SOX2OT反應信號。引物均由上海生工生物公司合成,引物序列見表1。以GAPDH為內參,使用2-ΔΔCt法計算lncRNA SOX2OT相對表達量。

表1 引物序列Tab 1 Primer sequences

1.3 隨訪

患者出院后采用電話、入院復查方式隨訪,準確記錄患者生存情況,共隨訪3年,截止于2021年5月。

1.4 統計學處理

2 結 果

2.1 lncRNA SOX2OT在胃癌組織中的表達

胃癌組織lncRNA SOX2OT的表達水平為3.49±0.57,顯著高于癌旁組織的表達水平(1.16±0.32),差異有統計學意義(t=36.524,P<0.001)。

2.2 lncRNA SOX2OT表達水平與胃癌患者臨床特征的關系

以癌組織lncRNA SOX2OT表達水平的均數3.49為界限,將患者分為lncRNA SOX2OT高表達組(56例)及lncRNA SOX2OT低表達組(49例)。lncRNA SOX2OT高表達組與lncRNA SOX2OT低表達組間胃癌患者年齡、性別、飲酒比例、腫瘤位置、吸煙比例相比,差異無統計學意義(P>0.05);lncRNA SOX2OT高表達組腫瘤直徑≥5 cm、低分化胃癌、Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移比例顯著高于lncRNA SOX2OT低表達組,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 lncRNA SOX2OT水平與患者臨床特征關系 例Tab 2 Relationship between lncRNA SOX2OT level and clinical characteristics of patients cases

2.3 胃癌組織中lncRNA SOX2OT表達水平與患者預后的關系

所有胃癌患者術后隨訪3年,105例患者中生存68例,死亡37例,總生存率64.76%。Kaplan-Meier顯示,lncRNA SOX2OT高表達組的3年生存率為55.35%,低于lncRNA SOX2OT低表達組的75.51%(Log rankχ2=4.451,P=0.031)。見圖1。

圖1 lncRNA SOX2OT水平與患者生存時間關系Fig 1 Relationship between lncRNA SOX2OT level and survival time of patients

2.4 胃癌患者預后的單因素及多因素Cox分析

以年齡(≥60歲=1、<60歲=0)、吸煙史(是=1、否=0)、性別(女性=1、男性=0)、腫瘤直徑(≥5 cm=1、<5 cm=0)、飲酒史(是=1、否=0)、分化程度(低分化=1、中/高分化=0)、腫瘤位置(胃體=1、胃底=0)、淋巴結轉移(有=1、無=0)、TNM分期(Ⅲ～Ⅳ期=1、Ⅰ～Ⅱ期=0)及lncRNA SOX2OT表達(高表達=1、低表達=0)為自變量,以預后為因變量(死亡=1、生存=0),納入單因素Cox分析,結果顯示,分化程度、TNM分期、lncRNA SOX2OT表達與胃癌患者預后相關(P<0.05),見表3。多因素Cox回歸分析結果顯示,分化程度為低分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、lncRNA SOX2OT高表達是影響胃癌患者預后的危險因素(P<0.05),見表4。

表3 影響胃癌患者預后的單因素Cox分析Tab 3 Single factor Cox analysis affecting prognosis of gastric cancer patients

表4 影響胃癌患者預后的多因素Cox分析Tab 4 Multivariate Cox analysis of prognosis of gastric cancer patients

3 討 論

全球癌癥統計數據顯示,胃癌是全球第二大致死疾病,該類癌癥與1/12的死亡病例相關[10]。由于胃癌發病早期癥狀不明顯,加之患者缺乏早診早治意識,導致初診即處于中晚期的病例數仍處于較高比例[11-12]。D2根治術后輔助化療是亞洲晚期胃癌的傳統治療方式,該術式的5年相對生存率僅為17.90%～54.20%[13]。近年來,胃癌的治療方式中引入了新輔助化療,患者在術前接受化療后腫瘤分期明顯降低,使腫瘤完全切除率增加,但是也存在著過度治療以及延誤手術的風險[14]。既往研究顯示,lncRNA與胃癌的病理過程及預后效果密切相關[15]。因此,探索胃癌發病相關lncRNA及其臨床意義,能夠為病理機制解析、預后判定提供新的角度。

lncRNA SOX2OT是一種位于人類染色體3q26.3位點的新型lncRNA,在多種疾病中異常表達,在調節多種腫瘤行為中起重要作用,例如在膀胱癌、胰腺癌、結直腸癌中高表達,促進腫瘤細胞增殖、分化、遷移,發揮致癌作用[16]。lncRNA SOX2OT還與腫瘤耐藥性有關。郭飄婷等[17]有關大腸癌的研究發現,lncRNA SOX2OT通過調節miR-30a的表達,間接上調SOX2表達水平,最終導致HCT-116大腸癌細胞耐藥性增強。但lncRNA SOX2OT在胃癌中的研究較少,鑒于lncRNA SOX2OT在腫瘤中的重要作用,有必要探究胃癌組織中lncRNA SOX2OT表達與患者臨床病理特征及預后的關系,以期為胃癌的臨床治療提供參考。本研究結果顯示,胃癌組織中lncRNA SOX2OT表達水平高于癌旁組織,說明lncRNA SOX2OT可能參與胃癌發生發展。Feng等[16]的研究發現,lncRNA SOX2OT在結直腸癌中上調表達,并且lncRNA SOX2OT的表達與TNM分期相關。另有研究顯示,lncRNA SOX2OT表達與卵巢癌腫瘤大小、TNM分期、淋巴結轉移有關[18]。本研究以胃癌組織中lncRNA SOX2OT表達水平均數為界限將其分為lncRNA SOX2OT高表達組與低表達組,探究lncRNA SOX2OT表達與胃癌臨床病理特征關系。結果顯示,lncRNA SOX2OT的高表達與TNM分期、腫瘤分化程度、腫瘤直徑、淋巴結轉移有關,提示lncRNA SOX2OT參與了胃癌的侵襲進展過程,進一步證實了lncRNA SOX2OT在胃癌發展過程中扮演的促癌角色。在肺鱗癌中lncRNA SOX2OT表達水平較肺腺癌細胞中上調,高表達lncRNA SOX2OT的患者生存時間較短,發揮致癌作用[19]。另有研究[20]顯示,膀胱癌中lncRNA SOX2OT高表達與腫瘤分期及患者不良預后呈正相關,抑制lncRNA SOX2OT的表達會延緩腫瘤生長,減少體內轉移。本研究采用Kaplan-Meier法分析了lncRNA SOX2OT表達與胃癌患者預后的關系,發現lncRNA SOX2OT高表達組3年生存率(55.35%)低于低表達組(75.51%),說明lncRNA SOX2OT水平可能一定程度反映胃癌患者生存情況,其表達水平較高者預后較差。本研究Cox分析結果顯示,Ⅲ～Ⅳ期、低分化胃癌、lncRNA SOX2OT高表達是影響患者預后的危險因素。然而,lncRNA SOX2OT調控腫瘤進展中的分子機制非常復雜,有研究發現lncRNA SOX2OT通過靶向微小RNA(miRNA)參與人各種腫瘤的發生。來自癌細胞外泌體的lncRNA SOX2OT,可以靶向miR-194-5p介導的RAC1信號通路,促進非小細胞肺癌[5]。提示lncRNA SOX2OT可能通過調控miRNA或mRNA表達,參與胃癌發生、發展過程,lncRNA SOX2OT在調控胃癌進展中至關重要,并可能是胃癌治療最有潛能的靶點。

綜上所述,lncRNA SOX2OT在胃癌組織中表達水平升高,并與淋巴結轉移、TNM分期、腫瘤直徑、腫瘤分化程度以及預后有關,lncRNA SOX2OT高表達患者3年生存率較低,且lncRNA SOX2OT高表達是影響胃癌預后的危險因素。然而,本研究納入的樣本量有限,易產生偏差,從而影響研究結果,下一步將擴大入組例數,進一步闡明lncRNA SOX2OT對胃癌患者預后的影響,并借助細胞或動物模型探究lncRNA SOX2OT參與胃癌發展的調控機制。