不同血清標本保存條件及時間對血清生化檢驗結果影響

劉文卿, 布雨鑫, 閆承慧, 趙桂英, 李 萍, 劉 丹

北部戰區總醫院 心血管內科,遼寧 沈陽 110016

肝功能測定對肝系統疾病與其他藥物在肝代謝造成損傷的變化具有特殊的早期靈敏度,通過檢測血清中的肝酶與膽紅素等指標可以評估肝受損程度[1]。包括低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)在內的血脂代謝異常被認為是心血管疾病的獨立危險因素[2]。降低LDL-C水平已成為降低心血管疾病發病率與病死率的基石[3-10]。既往研究多對48 h內標本保存條件進行分析,而對標本保存時間>1周的保存方式研究較少[11-16]。本研究對50例冠心病患者的血清標本分別于4℃與-20℃保存12 d后進行肝功能、血脂等生化指標檢測,旨在探討不同標本保存條件對血清生化指標的影響。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取北部戰區總醫院心血管內科自2022年5月至2023年2月收治的50例行常規生化檢驗的冠心病患者為研究對象。納入標準:首次入院;無重大疾病手術史及過敏史。排除標準:嚴重的肝腎功能損傷、血液系統疾病、惡性腫瘤者;服用可能對檢測指標造成異常藥物者。其中,男性25例,女性25例;年齡33～57歲,平均年齡(49.32±5.55)歲。本研究經醫院倫理委員會批準。所有患者均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 采集標本前1 d,告知患者空腹8 h以上。采用分離膠采血管采集血標本5 ml,應用羅氏公司Roche Cobas6000 c 501全自動生化分析儀,全部試劑均采用羅氏公司的檢測試劑,并確保定標液及質控品均在有效期內,具有良好的溯源性。離心后,抽取部分血清測定生化九項檢驗結果作為即測值(設為即測組)。其余標本分裝至2支離心管內,1管以4℃密封冷藏保存(設為A組),1管以-20℃密封冷凍保存(設為B組)。12 d后,取出2管室溫平衡融化后,再次進行生化九項檢驗。測定并比較即測組、A組、B組丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草氨酸氨基轉移酶(oryzanol aminotransferase,AST)、總膽紅素(total bilirubin,TBIL)、直接膽紅素(direct bilirubin,DBIL)、甘油三酯(triacylglycerol,TG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、LDL-C、超敏C反應蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)。計算每個標本與即測值的變異系數(variable coefficient,CV),并記錄其中的最大變異系數(CVmax),并將其與室內質控允許最大變異系數(CV室內)、常規項目質量指標允許最大變異系數(CV指標)進行比較[13-14]。

2 結果

2.1 即測組、A組、B組生化九項檢驗結果比較 即測組、A組、B組ALT、AST、TBIL、DBIL、TG、TC、HDL-C、LDL-C、hs-CRP結果比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 即測組、A組、B組生化九項檢驗結果比較

2.2 CVmax、CV室內、CV指標結果比較 CVmax均小于或等于CV室內、CV指標,標本保存12 d后的CV在行業規定認可的波動范圍內。見表2。

表2 CVmax、CV室內、CV指標結果比較/%

3 討論

通常認為,血清在-80℃冰箱內各項生化指標穩定性均較為可靠,但對于-20℃或4℃情況下標本的穩定性尚存爭議。有研究報道,樣本于4℃保存時間>24 h,樣本檢測數據與即測數據偏差超出CV允許范圍,不具備臨床分析價值[6-8]。另有研究報道,于-20℃冷凍標本結果穩定保存至少1周[11-12]。既往研究多采用肝素抗凝或者自然凝固,血清與血細胞分離不徹底[17-20]。未完全分隔開的血清標本隨時間延長細胞破壞,改變了血清成分組成,可能為結果變化的主要因素。

本研究結果顯示,即測組、A組、B組ALT、AST、TBIL、DBIL、TG、TC、HDL-C、LDL-C、hs-CRP結果比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。這提示,A組、B組兩種保存方式對生化九項檢驗結果影響輕微,結果均與即測組接近,兩種保存方式下結果均足夠穩定。本研究結果顯示,以4℃密封冷藏保存標本12 d后CV未超過行業標準。這提示,分離冷藏標本指標精密度良好,接近抽血即測指標,不因放置時間延長發生影響臨床關鍵診斷的判定,同樣能作為疾病的診斷依據。本研究結果顯示,以-20℃密封冷凍保存標本在12 d后CV同樣未超過行業標準。這表明,密封的-20℃標本保留了標本的化學穩定性,并沒有因為低溫使有效成分破壞,可能與選用指標有關,對一些化學本質不穩定的指標可能得出不一樣的結論。冷藏標本穩定性提升的主要原因可能包括:采用分離膠采血管后,分離膠可以將血清及血細胞在離心機的作用下穩定分離,避免血細胞中組分破壞,內容物釋放,與血清中相同物質混合,造成結果偏差;密封離心管封閉較好,避免了血清中的水分自然蒸發,引起血清結果濃縮,導致結果異常現象的發生。

綜上所述,血清標本于4℃與-20℃密封保存12 d后,血清生化檢測結果依舊穩定,可作為不滿足即測條件標本測定的補充方案。