超高液相色譜-串聯質譜法測定雞肉中氟苯尼考殘留量的不確定度評定

單長海　李翔　楊周　龍洋　胡容　孫輝

摘 要：本文依據GB 31658.5—2021，建立雞肉中氟苯尼考殘留量測定的不確定度評定方法。通過對測量過程中不確定度來源的分析以及對不確定度分量進行評定，探討影響測定結果不確定度的主要因素。結果表明，標準曲線的線性擬合是影響不確定度的主要因素，在檢測過程中應加以控制。雞肉中氟苯尼考的測量結果為（75.3±6.4） μg·kg^-1（k=2）。

關鍵詞：不確定度評定；氟苯尼考；雞肉；超高液相色譜-串聯質譜法

Uncertainty Evaluation of Determination of Florfenicol Residues in Chicken by Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

SHAN Changhai， LI Xiang， YANG Zhou， LONG Yang， HU Rong， SUN Hui

（National Quality Supervision and Testing Center for Selenium Rich Products， Enshi 445000， China）

Abstract： Based on GB 31658.5—2021， an uncertainty evaluation method for the determination of florfenicol residues in chicken was established. By analyzing the source of uncertainty and evaluating the component of uncertainty， the main factors affecting the uncertainty of measurement results were discussed. The results show that the linear fitting of the standard curve is the main factor affecting the uncertainty， which should be controlled in the testing process. The results of florfenicol in chicken were （75.3±6.4） μg·kg^-1（k=2）.

Keywords： uncertainty evaluation; florfenicol; chicken; ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

氟苯尼考是一種畜禽動物專用的酰胺醇類的廣譜抗菌藥，治療畜禽動物的細菌性疾病，尤其對呼吸道系統感染和腸道感染療效顯著[1-2]。氟苯尼考具有一定的毒性，畜牧農產品中氟苯尼考累積到一定限量，會對人體造成危害[3-4]。《食品安全國家標準 食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）規定，雞肉中氟苯尼考殘留限量小于100 μg·kg-1，是國家對農產品重點監督項目。《食品安全國家標準 動物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》（GB 31658.5—2021）自2022年2月1日起開始實施，是國家農產品安全監督抽檢指定的唯一檢測方法。在獸藥殘留的分析檢測工作中，由于試劑耗材質量等級的不同、檢測設備的精密度和靈敏度的不同對檢測結果產生一定的偏差，通過對標準方法進行測量不確定度分析并關注主要不確定度來源，能夠提高檢測結果的準確度[5-6]。

本文依據GB 31658.5—2021、《化學分析中不確定度的評估指南》（CNAS—GL006：2019），對雞肉中氟苯尼考殘留量測定的不確定度進行評定，旨在為采用新標準進行檢測時找出關鍵控制環節并加以控制，以降低檢驗風險。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

雞肉樣品，市場采購。

氟苯尼考標準品（100.0 mg·L^-1，上海安譜實驗科技股份有限公司，濃度不確定度U=3.0 mg·L^-1）；乙腈、甲酸、正己烷、乙酸乙酯（色譜純，德國CNW公司）；實驗室用水為Milli-Q超純水，雞肉中氟苯尼定量分析質控樣（自制）。

Triple Quad 5500三重四級桿液相色譜-質譜聯用儀（美國ABSCIEX公司）；ST 40R離心機（美國Thermo Fisher公司）；Vac Elut SPS 24半自動固相萃取儀（美國Agilent Technologies公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 溶液配制以及樣品處理

標準溶液及內標配制：精密量取1.0 mL氟苯尼考標準溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容，得到10 μg·mL^-1氟苯尼考標準工作液；同樣方法制備100 ng·mL^-1內標工作溶液。按照GB 31658.5—2021中8.3的方法制備得濃度分別為10 ng·mL^-1、50 ng·mL^-1、100 ng·mL^-1、200 ng·mL^-1、500 ng·mL^-1和1 000 ng·mL^-1的校準工作溶液。

樣品處理按GB 31658.5—2021中8.1、8.2、8.3的方法處理，色譜和質譜條件按照8.4的條件設置。

1.2.2 數學模型的建立

根據測量方法建立雞肉中氟苯尼考殘留量定量分析的數學模型為

X=（c×v）/m（1）

式中：X為雞肉中氟苯尼考含量，μg·kg^-1；c為試樣溶液中氟苯尼考濃度，μg·L^-1；m為供試試料質量，g；v為試樣定容體積，mL。

2 結果與分析

2.1 不確定度來源的識別

根據GB 31658.5—2021標準方法的測量過程和測量模型，影響雞肉中氟苯尼考定量分析的不確定度來源有：①樣品稱量引入的不確定度urel（a）；②氟苯尼考標準物質濃度的準確性引入的不確定度urel（c）；③校準曲線擬合引入的不確定度urel（q）；④檢測方法重復性引入的不確定度urel（r）；⑤檢測方法加標回收率引入的不確定度urel（h）。由于檢測方法加標回收率引入的不確定度包含了提取凈化過程引入的不確定度，因此在評定過程中忽略了提取凈化過程引入的不確定度。

2.2 不確定度測量

2.2.1 樣品稱量引入的不確定度urel（a）

2.2.2 氟苯尼考標準物質濃度的準確性引入的不確定度urel（c）

2.2.3 校準曲線擬合引入的不確定度urel（q）

2.2.4 檢測方法重復性測定引入的不確定度urel（r）

2.2.5 檢測方法回收率引入的不確定度urel（h）

2.2.6 合成不確定度urel

2.2.7 擴展不確定度U

3 結論

本研究依據GB 31658.5—2021標準，對雞肉中氟苯尼考殘留量測量過程中的不確定度來源進行了分析，對測量不確定度分量進行評定，發現對檢測結果準確度影響最主要的因素為標準曲線擬合，而校準曲線擬合與人員操作檢測熟練程度和儀器性能有關。因此，在檢測過程中，需要對人員檢測能力和儀器維護保養進行定期監控，以降低檢驗風險。

參考文獻

[1]孫繼超，陳晨，張東輝，等.氟苯尼考的研究進展[J].江蘇農業科學，2020，48（20）：31-36.

[2]張春輝，邢廣旭，胡驍飛，等.動物專用藥物氟苯尼考的研究進展[J].中獸醫醫藥雜質，2019，38（5）：95-98.

[3]楊詩珍.分散固相萃取劑-液相色譜串聯質譜法測定雞肉和雞蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留[J].工業微生物，2022，52（1）：34-39.

[4]李紅嬋，段凱，汪聰勇，等.氟苯尼考藥動力學及殘留檢測研究進展[J].安徽農業科學，2022，50（21）：9-12.

[5]孫作剛，陳智慧.高效液相色譜測氟苯尼考注射液含量的不確定度評定[J].新疆畜牧業，2018，33（3）：30-32.

[6]張立佳，莫楠，劉麗君，等.超高液相色譜-串聯質譜法測定乳飲料中香蘭素的不確定度評定[J].飲料工業，2022，25（1）：12-16.