HPLC法測定安痛定注射液3種組分的含量

丁陽 馮超林 陳向丹 董書香 王峻

摘要 本文建立了安痛定注射液中巴比妥、安替比林、氨基比林含量的HPLC測定方法：采用Agilent Eclipse Plus C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-磷酸鹽緩沖液（pH 7.8～8.0）（20∶80）（用磷酸調節pH至8.0），檢測波長240 nm，流速1.0 mL/ min。結果表明，巴比妥在4.5～67.5 μg/mL的濃度范圍內呈線性關系，r=0.999 7，平均回收率96.2%；安替比林在10～150 μg/mL的濃度范圍內呈線性關系，r=0.999 9，平均回收率100.1%；氨基比林在25～375 μg/mL的濃度范圍內呈線性關系，r=0.999 9，平均回收率97.1%；該方法簡便、準確、快速、重現性好，可用于該制劑的含量測定。

關鍵詞 安痛定注射液；含量測定；HPLC

中圖分類號 O657.72 文獻標識碼? A

文章編號 1007-7731（2023）03-0092-03

Determination of Three Components in Antondine Injection by HPLC Method

DING Yang? ?FENG Chaolin? ?CHEN Xiangdan? ?DONG Shuxiang? ?WANG Jun*

（Hubei Provincial Institute of Veterinary Drug Supervision， Wuhan Hubei 430070）

Abstract A method for the determination of Barbital， Phenazone and Aminophenazone in Antondine Injection by HPLC was established. The experiment used Agilent Eclipse Plus C18 column （4.6 mm×250 mm， 5 μm）， acetonitrile-phosphate buffer （pH7.8-8.0）（20∶80）（the pH value was adjusted to 8.0 with phosphoric acid）as the mobile phase， the detection wavelength was 240 nm with the flow rate of 1.0 mL/min. Results showed that linear range of Barbital was 4.5-67.5 μg/mL with r of 0.999 7， average recovery was 96.2%. Linear range of Phenazone was10-150 μg/mL with r of 0.999 9， average recovery was 100.1%. Linear range of Aminophenazone was 25-375 μg/mL with r of 0.999 9， average recovery was 97.1%. The method is simple， accurate， rapid and reproducible， and can be used for the content determination of the preparation.

Keywords antondineinjection; content determination; HPLC

安痛定注射液是廣泛應用的解熱鎮痛藥，含巴比妥、安替比林和氨基比林3種成分?！吨袊F藥典》2015年版一部均采用高效液相色譜法及容量分析進行含量測定[1]，此方法操作煩瑣費時，誤差較大。筆者參考相關文獻[2-4]，采用高效液相色譜法同時測定巴比妥、安替比林和氨基比林的含量，該方法具有簡易、快速、高效、重復性好等特點。

1 材料與方法

1.1 儀器

島津20AD高效液相色譜儀；Agilent Eclipse Plus C18色譜柱，4.6 mm×250 mm（i.d.），粒徑5 μm；Mettler AE240電子天平；MILIPORE超純水處理器等。

1.2 試劑與材料

氨基比林對照品由中國食品藥品檢定研究院提供，安替比林對照品由中國獸醫藥品監察所提供，巴比妥暫時為工作用對照品。甲醇、乙腈、磷酸鹽均為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純；原料、輔料，安痛定注射液樣品（批號為20171101、20171102、20171201）均由成都某獸藥公司提供。

1.3 試驗方法

1.3.1 溶液的配制。精密稱取巴比妥對照品11.25 mg，安替比林對照品25 mg、氨基比林對照品62.5 mg置于25 mL量瓶中，加流動相10 mL，超聲使其溶解，放至室溫，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述對照液2 mL置于50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為對照品溶液。精密量取安痛定注射液供試品5 mL置于100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述供試品溶液2 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

1.3.2 色譜條件。色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：乙腈︰磷酸鹽緩沖液（pH 7.8～8.0）（20∶80）用磷酸調節pH至8.0，流速1.0 mL/min；檢測波長240 nm；進樣量20 μL。

1.3.3 線性試驗。精密稱取巴比妥對照品45 mg，安替比林對照品100 mg，氨基比林對照品250 mg置于100 mL量瓶中，加流動相40 mL，超聲使其溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，取上述稀釋液1.00、2.00、4.00、5.00、10.00、15.00 mL置于100 mL量瓶中，加流動相稀釋成巴比妥濃度為4.5、9.0、18.0、22.5、45.0、67.5 μg/mL的標準工作液，安替比林濃度為10、20、40、50、100、150 μg/mL的標準工作液，氨基比林濃度為25、50、100、125、250、375 μg/mL的標準工作液，各取20 μL進樣，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線方程。

1.3.4 專屬性試驗。在1.3.2色譜條件下，分別取供試品輔料空白溶液、對照品溶液以及供試品溶液注入液相色譜儀，考察其專屬性。

1.3.5 回收率試驗。精密量取已知含量的安痛定注射液（批號20171101）5 mL 9份，按照各主成分80%、100%、120% 3個水平進行添加，分別按1.3.1項下制備方法進行處理，按1.3.2色譜條件進行測定，按外標法計算巴比妥、安替比林、氨基比林的含量，計算回收率。

1.3.6 精密度試驗。取1.3.1項下制備的對照品溶液，按1.3.2色譜條件測定峰面積，連續進樣6次，計算相對標準偏差RSD，考察精密度。

1.3.7 穩定性試驗。取1.3.1項下制備的對照品溶液，按1.3.2色譜條件測定峰面積，在不同時間0、2、4、6、8、10、12、24 h分別進行測定，計算相對標準偏差RSD，考察對照品穩定性。

2 結果與分析

2.1 線性試驗

以濃度為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標進行線性回歸（結果見圖1），得巴比妥回歸方程Y=25 261 x-10 613（r=0.999 7）；安替比林回歸方程Y=116 289 x-42 515（r=0.999 9）；氨基比林回歸方程Y=23 212 x-15 750（r=0.999 9）?？梢娫诖松V條件下巴比妥在4.5～67.5范圍內線性良好，安替比林在10～150 μg/mL范圍內線性良好，氨基比林在25～375 μg/mL范圍內線性良好，結果見圖1～3。

2.2 專屬性試驗

在1.3.2色譜條件下，色譜圖中巴比妥、安替比林與氨基比林峰分離效果好，含量測定不受其他雜質峰的干擾，圖譜見圖4～6。

2.3 回收率試驗

加樣回收率考察結果見表1～3。巴比妥平均回收率為100.5%，RSD為0.9%；安替比林平均回收率為100.5%，RSD為0.9%；氨基比林平均回收率為100.5%，RSD為0.9%，表明該法符合試驗分析要求，準確度高。

2.4 精密度試驗

連續進樣6次，測得巴比妥峰面積平均值為562 696，RSD為0.2%，安替比林峰面積平均值為2 896 340，RSD為0.1%，氨基比林峰面積平均值為5 800 114，RSD為0.1%，結果表明儀器精密度良好。

2.5 穩定性試驗

在不同時間0、2、4、6、8、10、12、24 h分別進行測定，測得巴比妥峰面積平均值為563 370，RSD為0.2%；安替比林峰面積平均值為2 896 755，RSD為0.1%；氨基比林峰面積平均值為5 801 764，RSD為0.2%，表明對照品溶液在室溫下24 h內性質穩定。

2.6 樣品的測定

分別取同一廠家不同批號的樣品，采用1.3.2色譜條件進行測定，試驗結果見表4。樣品測定結果中可以看出本法與《中國獸藥典》2015年版一部測定的結果基本一致。

3 討論與結論

巴比妥在200～254 nm范圍內有吸收，安替比林在240、254 nm處有較強吸收；氨基比林在240、273 nm有較強吸收。注射液中巴比妥含量較低，為了避免低波長誤差，故選擇干擾較小的波長240 nm。因為氨基比林和安替比林結構相似，而巴比妥受酸堿影響較大，在一般的液相色譜條件下，難以分離。試驗多種流動相，結果表明流動相為乙腈-磷酸鹽緩沖液（pH 7.8～8.0）（20∶80）用10%磷酸調節pH至8.0，可使3組分達到最佳分離效果，峰形好，分離度較高，重現性好，因此采用以上色譜條件測定安痛定注射液的含量。

本法測定安痛定注射液中巴比妥、安替比林、氨基比林3種組分的含量時，操作簡單、快速，結果準確可靠，可作為該制劑的含量測定提供參考，特別是在獸藥企業的內部質量控制方面有一定的指導作用。

4 參考文獻

[1] 中國獸藥典委員會. 中華人民共和國獸藥典2015年版一部[S].

[2] 趙素珍. 高效液相色譜法同時測定復方氨林巴比妥注射液中氨基比林和安替比林的含量[J]. 中國醫藥導報. 2007（21）：128-129.

[3] 孫東凱，劉廣川，王麗琴. HPLC法測定復方氨林巴比妥注射液中氨基比林和安替比林的含量[J]. 天津藥學，2007（6）：19-20.

[4] 陳秀琳，蔡加琴，黃麗萍. HPLC法測定復方氨林巴比妥注射液三組分的含量[J]. 海峽藥學，2008（6）：53-55.

（責編：王慧晴）

作者簡介 丁陽（1992—），男，河南信陽人，從事獸藥檢驗檢測工作。

王峻*通信作者

收稿日期 2022-04-02