紫蘇提取物和透明質酸混合滴眼液對實驗性干眼的治療效果研究

金海燕 李正日 李英俊（通訊作者）

（延邊大學附屬醫院眼科 吉林 延吉 133000）

1.引言

干眼癥是患病率最高的眼表疾病。干眼的發病機制繁雜，其中主要是炎癥及氧化應激共同參與了干眼的發病。氧化應激產生活性氧（ROS），可導致角膜和結膜上皮細胞DNA 的改變和損傷[1]，受損上皮細胞釋放細胞因子并導致眼表炎癥，最終導致干眼癥。

紫蘇含有大量的黃酮類化合物，Omega-3，Omega-6，Omega-9 等，使得紫蘇有著強大的防止動脈硬化的作用，更具有強大的抗氧化能力，清除自由基，維系細胞的“青春壽命”。

人工淚液是干眼癥的常見治療方法[2]。其中透明質酸（HA）是最常用的潤滑劑滴眼液的成分之一。這些藥物不僅可以緩解干眼癥狀，還可以改善角膜表面完整性。然而，單獨使用HA 滴眼液可能無法解決干眼癥的病因。

雖然已發現紫蘇提取物具有抗炎及抗氧化作用，但尚未探索紫蘇提取物和HA 聯合應用于干眼癥。本實驗探討紫蘇提取物和HA 混合物對干眼治療效果和機制。

2.方法

2.1 干眼癥的老鼠模型

該研究在實驗中使用6 至8 周齡健康雌性C57BL/6 小鼠60只，體重（20±2）克。通過每天四次用0.5mg/0.2mL 氫溴酸東莨菪堿皮下注射小鼠來誘導實驗性干眼（EDE）模型。暴露于30%的環境濕度[3]。

2.2 材料

將蘇子葉晾干，粉碎，準確稱取5.0000g 置于錐形瓶中，加入200mL 的蒸餾水，浸泡24h，加入纖維素酶放入恒溫水浴鍋加熱，一段時間后將其取出抽濾，濾液在60℃以下加熱，待將要得到膏狀物質時，停止加熱，用平衡鹽溶液（BSS）稀釋。

2.3 實驗設計和程序

將小鼠隨機分成5 組：（1）未處理的對照組；（2）EDE干眼誘發組，但不接受滴眼液；（3）用0.1%HA 治療的EDE 小鼠；（4）用0.01%紫蘇提取物和0.1%HA 混合物處理的EDE 小鼠；（5）用0.1%紫蘇提取物和0.1%HA 混合物處理的EDE 小鼠。每組由10 只動物組成。所有治療組每天四次接受3μL 滴眼液。在處理后10 天測量淚液體積，淚膜破裂時間（BUT），并進行多重免疫珠測定，酶聯免疫吸附測定（ELISA）。

2.4 淚液體積測量。

如前所述（3），使用酚紅浸漬的棉線測量小鼠的淚液體積。簡而言之，將棉線施加到外側眼角上20秒，并且使用顯微鏡測量，以紅色線的毫米數做記錄，構建標準曲線以將距離轉換為體積。

2.5 淚膜破裂時間和角膜熒光素染色評分的評價

在將1%熒光素滴注到下結膜囊中后，讓小鼠眨眼三次，然后使用在裂隙燈生物顯微鏡鈷藍光下在幾秒鐘內記錄淚膜BUT。

2.6 多重免疫珠測定，酶聯免疫吸附測定

如前所述，多重免疫珠測定法測量結膜中IL-1β，TNF-α[4]。使用ELISA 檢測脂質過氧化標記物 4-羥基壬烯醛（4-HNE）的總蛋白質水平[5]。

3.結果

3.1 各組小鼠淚液分泌結果

在造模后的第10 天，淚液分泌量指標上，EDE 組較正常對照組均減少，差異具有統計學意義（P＜0.004)。治療第10 天時，在淚液分泌量上0.1%與0.01%混合物治療組較EDE 組及溶劑對照組明顯延長，其差異有統計學意義（P＜0.05)。然而0.1%透明質酸治療組較EDE 組無明顯改善。

3.2 淚膜破裂時間

治療第10 天時，在BUT 上0.1%與0.01%混合物治療組較EDE 組明顯延長，其差異有統計學意義（P＜0.05)。然而0.1%透明質酸治療組較EDE 組略有改善，但無統計學意義。

3.3 多重免疫珠測定，酶聯免疫吸附測定

與其他組相比，0.1%紫蘇提取物和0.1%HA 混合物滴眼液組的IL-1β，4HNE和TNF-α的含量較EDE組均顯著降低（P＜0.05）。

4.討論

目前，干眼的治療手段主要為藥物治療，包括人工淚液、抗炎藥物、促淚液分泌藥物等，而人工淚液作為干眼治療的一線藥物，由于其不包含正常淚液中包含的多種活性因子成分，僅能潤滑眼表，而對于角膜上皮缺損修復的幫助有限。既往的研究發現，許多抗氧化劑已經顯示出對人角膜上皮細胞以及干眼患者的干眼的有益作用。發現抗氧化治療的實驗性干眼小鼠眼表上皮細胞及杯狀細胞密度顯著上升、細胞凋亡數量下降，氧化物質及炎癥因子減少。

在本實驗結果中發現，相較于其他組，0.1%紫蘇提取物和0.1%HA 混合物治療組淚液分泌增加，淚膜破裂時間延長。這與Li 等應用Omega-3 治療實驗性小鼠干眼的結果基本一致，表明了紫蘇提取物和HA 混合物對實驗性干眼有改善癥狀的作。

干眼的治療中，恢復角膜上皮屏障功能，減少眼表炎癥及氧化物質，促進角膜上皮修復尤為重要。干眼患者中IL-1β 作為重要的炎癥因子，可以促進其他的炎癥因子，比如IL-6、IL-8 和TNF-α。同時，晚期脂質過氧化標志物4-HNE 和丙二醛（MDD）的表達與無干眼的類似患者相比，在淚膜和眼表中增加。

0.1%紫蘇提取物和0.1%HA 混合物治療組結膜中IL-1β、TNF-及4-HNE 表達顯著下降。這可能與紫蘇提取物和HA 混合物促進角膜上皮修復，維持淚膜穩定，潤滑眼表，避免了眼表長期處于慢性炎癥狀態。

綜上所述，本研究證實了紫蘇提取物與HA 混合物滴眼液對干眼癥的療效。紫蘇提取物通過保護免受氧化應激，抑制炎癥標志物的表達，減弱氧化損傷，減少暴露于干燥應激的小鼠眼表中的氧化物質的產生和炎癥。再加上HA 傷口愈合和控制炎癥及潤滑劑的特性，這兩種成分的混合物將協同作用， 有助于改善干眼癥的癥狀和體征。