兩種方法檢測慢性乙型肝炎患者E 抗原/E 抗體雙陽性的情況分析

張莉（通信作者），王桂立

1 北京艾迪康醫學檢驗實驗室 （北京 100176）；2 北京小湯山醫院 （北京 102211）

臨床研究顯示，約有5%～10%的成人乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染者可發展為慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）[1]，CHB可持續進展為肝硬化或肝癌，實驗室檢查乙型肝炎病毒血清標記物（hepatitis B virus markers，HBV-M）對該病的診斷治療具有重要意義。CHB的進展過程中會出現血清學轉換，即乙型肝炎E抗原（hepatitis B E antigen，HBeAg）消失、E 抗體（Anti-HBe）出現，而部分患者在血清學轉換過程中可同時檢出HBeAg 與Anti-HBe[2]，這可能提示HBV 復制增加，故抗原、抗體共存現象的檢出至關重要。HBV-DNA 是CHB 的確診方法，但臨床一般不將其作為初篩方法。HBV-M 的常見檢測方法有化學發光微粒子免疫分析（chemiluminescence microparticle immuno assay，CMIA）法和酶聯免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法，兩種方法的靈敏度和特異度均較高，但究竟哪種方法更適合作為臨床檢出HBeAg 與Anti-HBe 的初篩方法，相關研究較少。鑒于此，特展開本研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017 年7 月至2021 年6 月于我院經CMIA 法檢測為HBeAg/Anti-HBe 雙陽性的350 例CHB 患者的臨床資料，其中男213 例，女137 例，年齡40～57 歲，平均（51.29±5.60）歲；同時收集經ELISA 法檢測為HBeAg/Anti-HBe 雙陽性的84例CHB患者的臨床資料，其中男45 例，女39 例，年齡43～57 歲，平均（50.46±5.22）歲。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

納入標準：確診為CHB[3]；臨床資料完整；近期接受抗病毒治療。排除標準：合并艾滋、丙型肝炎感染；合并自身免疫性疾?。缓喜⒏斡不?、糖尿病。

1.2 檢測方法與儀器

血樣處理：采集靜脈血3 ml，于常溫條件下放置30 min 左右，使血樣自行凝集，再在4 ℃條件下以3 500 r/min 的速度離心10 min，取上層血清樣本待檢。

CMIA 法檢測：采用雅培ArchitectRi2000 全自動免疫分析儀，試劑采用儀器配套試劑盒。

ELISA法檢測：采用Awareness ChemWell 2910 型酶標儀，試劑由北京萬泰生物藥業股份有限公司提供。

HBV-DNA 檢測：采用熒光定量PCR 法檢測，試劑由湖南圣湘生物科技股份有限公司提供，儀器采用羅氏Roche Light Cycler 480 實時熒光定量PCR 儀。

1.3 判定標準

參考說明書，Anti-HBs ≥10 mIU/ml 判斷為Anti-HBs 陽性；HBeAg ≥1 S/CO 判斷為HBeAg 陽性；Anti-HBe ≤1 S/CO 判斷為Anti-HBe 陽性。

1.4 統計學處理

采用SPSS 22.0 統計軟件進行數據分析，計量資料以±s 表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用F檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CMIA 法檢測350 例樣本中不同Anti-HBs 水平下HBeAg、Anti-HBe 水平比較

不同Anti-HBs 水平下的HBeAg、Anti-HBe 水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；Anti-HBs＞100 mIU/ml 水平下的HBeAg、Anti-HBe 水平高于Anti-HBs10～100 mIU/ml、Anti-HBs＜10 mIU/ml水平，差異有統計學意義（P＜0.05），Anti-HBs＜10 mIU/ml 與Anti-HBs 10～100 mIU/ml 水平下的HBeAg、Anti-HBe 水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 CMIA 法檢測350 例樣本中不同Anti-HBs 水平下HBeAg、Anti-HBe 水平比較（±s）

表1 CMIA 法檢測350 例樣本中不同Anti-HBs 水平下HBeAg、Anti-HBe 水平比較（±s）

注：與Anti-HBs 水平＜10 mIU/ml 比較，aP＜0.05；與Anti-HBs 水平10～100 mIU/ml 比較，bP＜0.05；HBeAg 為E 抗原，Anti-HBe 為E 抗體

Anti-HBe（S/CO)＜103185.21±1.080.62±0.20 10～100 245.26±1.170.57±0.13＞100 8 8.67±1.40ab 0.76±0.10ab F 335.071475.677 P＜0.001 ＜0.001（mIU/ml）例數HBeAg（S/CO)Anti-HBs 水平

2.2 不同HBV-DNA 水平下的HBeAg、Anti-HBe 檢測值比較

350 例患者中263 例行HBV-DNA 測定，HBVDNA＜ 2～8 水平下的HBeAg、Anti-HBe 水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；不同HBV-DNA水平下的HBeAg 水平：[（6～8）＞（2～ ）＞（＜2）]，差異有統計學意義（P＜0.05）；不同HBV-DNA水平下的Anti-HBe 水平：[（6～8）＜（2～ ）＜（＜2）]，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同HBV-DNA 水平下的HBeAg、Anti-HBe 檢測值比較（±s）

表2 不同HBV-DNA 水平下的HBeAg、Anti-HBe 檢測值比較（±s）

注：與HBV-DNA＜2 比較，aP＜0.05；與HBV-DNA＜2～ 比較，bP＜0.05；HBeAg 為E 抗原，Anti-HBe 為E 抗體；HBV-DNA 結果為對數值

Anti-HBe（S/CO）＜21233.50±0.820.69±0.16 2～118 5.79±1.24a 0.55±0.12a 6～8 2213.44±2.65ab 0.46±0.10ab F 1 449.6171 235.220 P＜0.001 ＜0.001 HBV-DNA例數HBeAg（S/CO）

2.3 CMIA 和ELISA 法檢測雙陽性的方法學差異

ELISA 法初檢HBV-M 雙陽性84 例，ELISA 法復檢雙陽性45 例，再行CMIA 法檢出雙陽性3 例（6.67%）；其他結果：HBeAg（+）/Anti-HBe（-）、HBeAg（-）/Anti-HBe（+）、HBeAg（-）/Anti-HBe(-)分別為36 例（80.00%）、4 例（8.89%）、2 例（4.44%）。

CMIA 法檢出雙陽性中有47 例再行ELISA 法復檢，檢出雙陽性2 例（4.26%）；其他結果：HBeAg（+）/Anti-HBe（-）、HBeAg（-）/Anti-HBe（+）、HBeAg（-）/Anti-HBe（-）分別為5 例（10.64%）、2 例（4.26%）、38 例（80.84%）。

3 討論

HBV 感染病程超過6 個月且有慢性肝炎的臨床表現即可判斷為CHB。在疾病發展過程中，患者從免疫耐受期向免疫活動期轉變，此時出現血清學轉換，但部分患者表現為HBe 抗原與抗體共存，HBe 抗原陽性可能提示HBV 再度活動[4]，因此HBeAg 與Anti-HBe 共存現象的檢測對于CHB 病情監測具有重要意義。實驗室檢測HBV-M 水平是評估CHB 病情的關鍵手段，其中HBV-DNA 定量是判斷HBV 的直接而準確的手段，可判定乙肝病毒數量和傳染程度，但其檢測步驟煩瑣、成本高昂，難以在常規實驗室中普及。ELISA 法可進行定量和半定量檢測，其檢測成本低、步驟簡單，但對低濃度抗原或抗體進行檢測時易造成漏檢，且檢測結果的準確性易受反應時間、反應溫度的影響[5]。隨著電化學發光技術的逐步成熟，CMIA 法的應用逐漸增多，其自動化、重復性較強，定量檢測更靈敏[6]。而對于HBeAg/Anti-HBe 雙陽性檢出的最適用方法暫不明確。

HBeAg 陽性提示HBV 正處于感染復制階段，傳染性較強，而HBeAg 消失、Anti-HBe 出現則提示感染趨于恢復。HBeAg、Anti-HBe 同時檢出陽性的情況，可能是由于患者體內正處于轉換過程的動態平衡中[7]。羅琳等[8]的研究顯示，HBV編碼HBeAg 的基因組C存在變異株，導致非耐受HBeAg 消長存在差異。本研究結果發現，隨著Anti-HBs 水平的增加，HBeAg、Anti-HBe 水平呈現上升趨勢；隨著BHV-DNA 水平的增加，HBeAg 水平亦呈現上升趨勢，而Anti-HBe 水平呈現下降趨勢，表明部分雙陽性患者的HBeAg 水平較高，而Anti-HBe 水平低或處于臨界值，提示HBV 顯現高復制狀態，可用于病情的監測。此外，本研究還發現，行ELISA 法檢測后再經CMIA法復檢發現，ELISA 法檢測出的假陽性較多，而行CMIA 法檢測后再經ELISA 法復檢的檢出率也偏低，說明ELISA 法檢出雙陽性的陽性準確率偏低，表明CMIA 法的檢測價值更高。研究表明，CMIA法檢測HBsAg 水平，達到0.1 ng/ml 即可檢出，而ELISA 法需達到0.5 ng/ml 方可檢出[9]。其原因為，ELISA 以固相包被板式法、競爭法、一步法為HBe 的主要檢測方法，如血樣中的HBeAg 水平較高，可導致后帶現象的出現，大量HBeAg 與酶標的Anti-HBe 結合，使酶標物無法與微孔內包被的HBeAg 結合，造成Anti-HBe 假陽性的情況。另外，ELISA 法檢測的線性范圍較窄，且檢測結果的準確性易受溫育時間、不同人員吸附手法等因素的影響[10]。而CMIA 法的檢測原理包括電化學反應和免疫反應兩種，通過Ag/Ab 與對應的試劑產生化學反應而引發的發光強度定量評價被檢物水平，發光強度與Ag/Ab 水平呈線性關系，即可確定被檢物的水平[11]。CMIA 法的干擾因素較少，檢測的準確度較高，因此CMIA 法具有較高的檢測價值[12]。

綜上所述，不同水平HBV-DNA 下的HBV-M呈多樣性，且不同方法檢測HBeAg、Anti-HBe 的結果間存在明顯差異，其中CMIA 法較ELISA 法檢測出的假陽性更少。