改良肌氨酸氧化酶法肌酐試劑抗高IgM干擾分析

顧 剛 歐維正 陶銅芳 董江義

（貴陽市公共衛生救治中心檢驗科，貴州 貴陽 550003）

血清肌酐（serum creatinine，SCr）是臨床判斷患者腎功能的重要參考指標，其檢測方法的抗干擾性尤其重要。濕化學酶法具有特異性好、干擾小、線性范圍寬等優點，適用于全自動生化分析儀，是目前SCr檢測的首選方法。近幾年有學者指出，采用濕化學酶法檢測華氏巨球蛋白血癥患者SCr會受到血清中IgM干擾而出現假陽性，而堿性苦味酸法（Jaffe法）不會受到干擾[1-2]。近日，貴陽市公共衛生救治中心收治了1例華氏巨球蛋白血癥患者，其血清IgM>47.9 g/L，尿素正常，SCr結果異常增高，查看肌酐反應曲線，檢測受到嚴重干擾。廠商針對IgM干擾改良了肌氨酸氧化酶法肌酐檢測試劑。本研究擬探討改良肌氨酸氧化酶法肌酐試劑（簡稱改良肌酐試劑）抗IgM干擾的原理，并以不受IgM干擾的Jaffe法作為參照，對比改良肌酐試劑和原肌氨酸氧化酶法肌酐檢測試劑（簡稱原肌酐試劑）SCr檢測結果的差異。

1 材料和方法

1.1 樣本來源

收集1例華氏巨球蛋白血癥患者和88例普通門診患者的血清樣本。

1.2 儀器與試劑

AU5800全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）。肌酐檢測的反應過程：在0點開始向反應杯加入試劑R1，加入血清，攪拌混勻，在第10點（180 s）加入試劑R2攪拌混勻。反應過程從0點開始，儀器每隔18 s記錄1次吸光度（A）值，記錄到第27點時終止，連接所有記錄點即為反應曲線。原肌酐試劑（編號H105，批號210111101）、改良肌酐試劑（編號H105T，批號210423101）和校準品均購自寧波美康公司，方法學均為肌氨酸氧化物酶法。Jaffe法試劑（貨號100020170，批號200751）和校準品均購自北京中生北控公司。室內質控品（批號：26471、26472）購自美國伯樂公司。

1.3 統計學方法

采用SPSS 26.0軟件進行統計分析。呈正態分布的計量資料以x±s表示，2個組之間比較采用配對樣本t檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 原肌酐試劑、改良肌酐試劑和Jaffe法檢測華氏巨球蛋白血癥患者SCr水平比較

采用原肌酐試劑、改良肌酐試劑和Jaffe法檢測華氏巨球蛋白血癥患者SCr水平，結果分別為625.5、59.7、62.6 μmol/L。3種試劑的反應曲線見圖1、圖2。

圖1 原肌酐試劑、改良肌酐試劑和Jaffe法反應曲線

圖2 原肌酐試劑、改良肌酐試劑和Jaffe法主波長反應曲線匯總

2.2 原肌酐試劑和改良肌酐試劑檢測88例患者SCr水平比較

采用原肌酐試劑和改良肌酐試劑同時檢測88例患者樣本，SCr分別為（79.5±37.4）、（79.6±37.3）μmol/L。2種試劑檢測結果差異無統計學意義（t=0.175，P>0.05）。88例患者2種試劑SCr檢測結果的散點圖見圖3。

圖3 原肌酐試劑和改良肌酐試劑檢測88例患者SCr的比較

3 討論

反應曲線是生化反應發生過程的完整記錄。檢驗工作人員通過觀察反應曲線的變化可以判斷檢測過程中存在的異常情況，更快地查找原因，作出正確判斷[3-4]。肌酐檢測采用雙波長，副波長的作用是消除噪音干擾、減少雜散光影響和樣本本身光吸收干擾，結果以主波長與副波長A值的差來計算。肌酐肌氨酸氧化酶法采用雙試劑，參與反應的主要是R2試劑。從原肌酐試劑反應曲線[圖1（a）]可看出，在第10點加入R2試劑后，主波長和副波長反應曲線在短時間內迅速升高，且升高幅度很大，提示有某種物質生成，造成A值大幅變化。從圖1（b）和圖1（c）可以看出，改良肌酐試劑與Jaffe法反應曲線相對平滑，符合肌酐生化反應特征。圖2 3種試劑主波長反應曲線更直觀地顯示出原肌酐試劑受到的干擾，以及改良肌酐試劑和Jaffe法試劑反應過程相似。

本研究結果顯示，原肌酐試劑和改良肌酐試劑檢測88例患者SCr水平差異無統計學意義（P>0.05），提示改良肌酐試劑不會對其他患者的SCr檢測造成影響。由此可見，改良肌酐試劑中參與反應的成分與原肌酐試劑一致。分析華氏巨球蛋白血癥患者肌酐水平異常升高的原因，在排除參與反應的試劑成分因素后，考慮可能是試劑的其他組分對IgM產生了影響，如緩沖液、防腐劑等均有可能使反應溶液的性質發生變化，導致蛋白的大分子發生沉淀反應，影響A值，造成干擾。我們把華氏巨球蛋白血癥患者的血清分別用純水和0.9%NaCl溶液稀釋5倍，結果顯示加入純水的血清會變混濁，而加入0.9%NaCl溶液的血清則無變化。華氏巨球蛋白血癥是以血液中出現大量單克隆巨球蛋白（IgM）為特征的B淋巴細胞惡性增生性疾病[5]，其IgM為五聚體，是相對分子質量最大的免疫球蛋白。當加入0.9%NaCl溶液稀釋時，氯離子和鈉離子圍繞在IgM周圍，使其不能聚集；而當用純水稀釋時，由于溶液中離子濃度降低，pH值和滲透壓的改變導致大量IgM交聯聚集，進而產生混濁。由此可以判斷，在采用原肌酐試劑檢測華氏巨球蛋白血癥患者血清樣本的過程中，加入R2試劑使反應溶液中的pH值、滲透壓等因素發生了改變，導致大量IgM發生聚集，產生混濁，造成A值急劇升高，干擾了肌酐的檢測。

綜上所述，由于華氏巨球蛋白血癥患者血清中存在大量IgM，且IgM具有相對分子質量大的特點，因此易受各種因素影響而發生交聯聚集。改良肌酐試劑優化了試劑組分，使得反應溶液中IgM的性質穩定，未觸發IgM產生聚集，從而得到真實的檢測結果。在臨床工作中，如遇到肌酐異常高值，且與臨床不相符的情況，建議立即查看反應曲線，用合適的方法確定其真實值，以防止臨床誤診。