奇楠沉香葉的有效成分含量測定及其生物活性評價

林思琦， 招志輝， 司徒杰

（廣州中醫藥大學第一附屬醫院，廣東廣州 510405）

沉香為瑞香科植物白木香Aquilaria sinensis（Lour.）Gilg含有樹脂的木材，擅長“行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘”，中醫臨床常用于“胸腹脹悶疼痛、胃寒嘔吐呃逆、腎虛氣逆喘急”諸證[1]；現代研究發現其具有鎮痛鎮靜、鎮咳平喘、抗菌、抗腫瘤和改善心肌缺血等作用[2]。由于沉香成藥時間長、產量低，兼具收藏價值，因此市場價格一直居高不下[3]。資源的稀缺，市場的需求，使得沉香樹其他部位（如葉子），在近幾年來逐漸成為研發熱點。據報道，沉香葉中含有多糖、鞣質、黃酮、氨基酸、揮發油等多種成分[4]，具有抗氧化、降血糖、降血脂、平喘、抑菌等生物活性[5]。在2018年，國家衛計委將白木香葉列入終止審查新食品原料目錄，以地方特色食品進行管理[6]；同年，廣東省衛健委制定并實施了《食品安全地方標準白木香葉》（DBS44/011-2018）[7]，極大地推動了白木香葉產業的快速發展。現已開發出沉香葉茶飲品等產品[8-9]。

奇楠沉香，是經過野生分化變異和自然條件選育出的多個沉香品種中品質最高的一種，其油脂豐富、芳香優雅、回味悠長，關鍵指標色酮類成分含量高，同時具備“生長快、結香久、抗病害強”的種植優勢，正被大力推廣種植[10-11]。目前，關于奇楠沉香葉的研究甚少。本研究選取奇楠沉香葉為研究對象，采用不同提取方法，對其總黃酮、總多糖、鞣質含量測定以及體外抗氧化、抗菌、抗炎活性評價展開系統研究，以期為奇楠沉香葉產品的開發及工業化生產提供參考，現將研究結果報道如下。

1 材料

1.1 儀器SQP分析天平（賽多利斯科學儀器北京有限公司）；GZX-9076 MBE數顯鼓風干燥箱（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）；OSB-2100 旋轉蒸發儀（東京理化器械株式會社）；UV-1700 型紫外-可見光光度計（日本島津公司）；HH-S6數顯恒溫水浴鍋（江蘇金怡儀器科技有限公司）；DW 調溫電熱器（上海平環燃燒設備工程技術有限公司）；SW-CJ-2FD型雙人單面凈化工作臺（蘇州凈化科技設備有限公司）；LX-B50L 型立式自動電熱壓力蒸汽滅菌器（合肥華素醫療設備有限公司）。

1.2 樣品與試劑奇楠沉香葉于2020 年11 月采摘于廣東省陽江市陽西縣阿拉丁沉香種植基地，由廣東藥科大學李鐘副教授鑒定基源為白木香[Aquilaria sinensis（Lour.）Gilg]，且符合奇楠沉香植物特征。

沒食子酸（批號：110831-200803，含量99%），中國藥品生物制品檢定所； 蘆丁（批號：LD200119-08，含量99%），Stanford Analytical Chemicals Co.， Ltd.； D- 無 水 葡 萄 糖（批 號：20180111），中國食品藥品檢定研究院；抗壞血酸（VC，批號：20180110），天津市致遠化學試劑有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH·），上海麥克林生物有限公司；2，2’-聯氮-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）（ABTS+·），上海麥克林生物有限公司；其他試劑均為分析純，水為純水。

1.3 培養基營養肉湯培養基（批號：1094671）、Mueller-Hinton 瓊脂培養基（批號：1095901），廣東環凱微生物科技有限公司。

1.4 菌種金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、表皮葡萄球菌（ATCC 1228）、銅綠假單胞菌（ATCC 49103）、肺炎克雷伯菌（ATCC 700603）、變形桿菌（ATCC 49103）、沙門氏菌（ATCC 14028）、福氏痢疾桿菌（ATCC 43300）、大腸桿菌（ATCC 8739），均由廣東省微生物研究所提供。

1.5 動物SPF 級昆明種小鼠，體質量18 ～22 g，雌雄各半，由廣東省醫學實驗動物中心提供，動物生產許可證號：SCXK（粵）2018-0002。實驗環境條件：室溫20 ～25 ℃，日溫差≤3 ℃，濕度40%～70%。

2 方法與結果

2.1 奇楠沉香葉提取物制備

（1）水提法：取200 g奇楠沉香葉粗粉，第1次加入12 倍純水，浸泡0.5 h，加熱回流提取2 h，200目篩網過濾；藥渣繼續加入12倍純水加熱回流提取2 h，200 目篩網過濾；合并濾液，75 ℃減壓濃縮至質量濃度為1.0 g（藥材）/mL的水提物溶液。

（2）醇提法：取200 g奇楠沉香葉粗粉，以70%乙醇溶液為溶劑，其余條件參數按照“水提法”制備方法進行提取，最終制備成質量濃度為1.0 g（藥材）/mL的70%醇提物溶液。

2.2 總黃酮含量測定[12]

2.2.1 溶液的制備

（1）對照品溶液：取蘆丁對照品約7.5 mg，精密稱定，置于25 mL 容量瓶中，加入適量60%乙醇，超聲溶解后繼續加入60%乙醇定容成0.30 mg/mL的蘆丁對照品溶液。

（2）供試品溶液：分別吸取1.0 g/mL 的奇楠沉香葉水提物、70%醇提物0.5 mL，精密稱定，置于100 mL 容量瓶中，分別加入適量60%乙醇超聲溶解，再定容成5.0 mg/mL 的水提物供試品溶液、70%醇提物供試品溶液。

2.2.2 標準曲線的繪制 準確吸取2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL 蘆丁對照品溶液于試管中，分別補足純水至5.0 mL；再加入5%的亞硝酸鈉溶液0.5 mL，室溫靜置6 min；繼續加入10%的硝酸鋁溶液0.5 mL，室溫靜置6 min；最后加入1.0 mol/L氫氧化鈉溶液4.0 mL，室溫靜置15 min。應用紫外-可見光分光光度計于510 nm波長處測定吸光度（OD）值。以純水為空白對照。以OD 為縱坐標（y），蘆丁對照品溶液濃度為橫坐標（x），繪制標準曲線，得線性回歸方程為y=11.993 2x-0.460 8（R2=0.9960）。結果表明，蘆丁對照品在0.06 ～0.12 mg/mL濃度范圍內線性關系良好。

2.2 .3 精密度試驗 準確吸取6 份蘆丁對照品溶液2.5 mL，按照“2.2.2”項下方法測定OD（510 nm）值，計算出平均吸光度（AOD）值為0.461、相對標準偏差（RSD）為0.57%，表明儀器精密度良好。

2.2.4 穩定性試驗 準確吸取水提物供試品溶液3.0 mL，同法進行反應0、30、60、90、120 min后測定OD（510 nm）值，平行3 份，計算出AOD 值為0.448、RSD為0.74%，表明該樣品穩定性良好。

2.2.5 重復性試驗 準確吸取水提物供試品溶液3.0 mL，同法反應后測定OD（510 nm 值），平行3 份，計算出AOD 值為0.445、RSD 為1.05%，表明該方法重復性良好。

2.2.6 加樣回收率試驗 吸取已知含量的水提物供試品溶液1.5 mL，加入蘆丁對照品溶液1.25 mL，同法反應后測定OD（510 nm）值，平行3 份，計算出平均回收率為108.89%，表明該測定方法準確可靠。

2.2.7 樣品含量測定 吸取“2.2.1”項下水提物供試品溶液、70%醇提物供試品溶液各3.0 mL，同法反應測定OD（510 nm）值，平行3 份，代入標準曲線計算出奇楠沉香葉中總黃酮含量分別為（5.04±0.011）%（水提法）、（3.78±0.020）%（醇提法）。

2.3 總多糖含量測定[13]

2.3.1 溶液的制備

（1）對照品溶液：取D-無水葡萄糖對照品約10.0 mg，精密稱定，置于100 mL 容量瓶中，加入適量純水溶解，同時定容成0.10 mg/mL 的D-無水葡萄糖對照品溶液。

（2）供試品溶液：分別吸取1.0 g/mL 的奇楠沉香葉水提物、70%醇提物溶液0.1 mL，置于100 mL容量瓶中，加入適量純水溶解，同時定容成1.0 mg/mL的水提物供試品溶液、70%醇提物供試品溶液。

2.3.2 標準曲線的制備 準確吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 的D-無水葡萄糖對照品溶液于試管中。分別加入純水至1.0 mL，再加入5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻后加入濃硫酸溶液5.0 mL，90 ℃水浴20 min，取出冰浴冷卻至室溫，應用紫外-可見光分光光度計于490 nm波長處測定OD值。以純水為空白對照。以OD 為縱坐標（y），D-無水葡萄糖對照品濃度為橫坐標（x），繪制標準曲線，得線性回歸方程為y=0.067 7x+0.079 5（R2=0.995 2）。結果表明，D-無水葡萄糖在1.43 ～14.31 μg/mL 濃度范圍內線性關系良好。

2.3.3 精密度試驗 準確吸取6 份D-無水葡萄糖對照品溶液0.6 mL，按照“2.3.2”項下方法測定OD（490 nm）值，計算出AOD 值為0.685、RSD 為0.76%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩定性試驗 準確吸取水提物供試品溶液0.5 mL，同法進行反應0、30、60、90、120 min后測定OD（490 nm）值，平行3 份，計算出AOD 值為0.419、RSD為1.29%，表明該樣品穩定性良好。

2.3.5 重復性試驗 準確吸取水提物供試品溶液0.5 mL，同法反應后測定OD（490 nm）值，平行3 份，計算出AOD 值為0.407、RSD 為1.35%，表明該方法重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 吸取已知含量的水提物供試品溶液0.25 mL，加入D-無水葡萄糖對照品溶液0.17 mL，同法反應后測定OD（490 nm）值，平行3 份，計算出平均回收率為106.88%，表明該測定方法準確可靠。

2.3.7 樣品含量測定 吸取“2.3.1”項下水提物供試品溶液、70%醇提物供試品溶液各0.5 mL，同法反應測定OD（490 nm）值，平行3 份，代入標準曲線計算出奇楠沉香葉中總多糖含量分別為（6.86±0.11）%（水提法）、（3.09±0.27）%（醇提法）。

2.4 鞣質含量測定[14]

2.4.1 溶液的制備

（1）對照品溶液：取沒食子酸對照品約5.0 mg，精密稱定，置于100 mL 容量瓶中，加入適量純水，超聲溶解后繼續加入純水定容成0.050 mg/mL的沒食子酸對照品溶液。

（2）供試品溶液：分別吸取1.0 g/mL 的奇楠沉香葉水提物、70%醇提物溶液0.5 mL，精密稱定，置于100 mL 容量瓶中。分別加入適量純水、70%乙醇，超聲溶解，再定容成5.0 mg/mL 的水提物供試品溶液、70%醇提物供試品溶液。

2.4.2 總酚含量測定

2.4.2.1 標準曲線的繪制 準確吸取0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL 沒食子酸對照品溶液于試管中。分別加入純水至4.8 mL，再加入0.4 mL 磷鉬鎢酸溶液，混勻后加入10%碳酸鈉溶液稀釋至10.0 mL，避光靜置30 min。應用紫外-可見光分光光度計于760 nm波長處測定OD值。以純水為空白對照。以OD為縱坐標（y），沒食子酸對照品濃度為橫坐標（x），繪制標準曲線，得線性回歸方程為y=0.093 8x+0.043 8（R2=0.994 8）。結果表明，沒食子酸在0.99 ～9.90 μg/mL濃度范圍內線性關系良好。

2.4.2.2 精密度試驗 準確吸取6 份沒食子酸對照品溶液0.8 mL，按照“2.4.2”項下方法測定OD（760 nm）值，計 算 出AOD 值 為0.366、RSD 為0.93%，表明儀器精密度良好。

2.4.2.3 穩定性試驗 準確吸取水提物供試品溶液0.2 mL，同法進行反應0、30、60、90、120 min后測定OD（760 nm）值，平行測定3份，計算出AOD值為0.452、RSD為1.02%，表明該樣品穩定性良好。

2.4.2.4 重復性試驗 準確吸取水提物供試品溶液0.2 mL，同法反應后測定OD（760 nm）值，平行3 份，計算出AOD 值為0.440、RSD 為0.73%，表明該方法重復性良好。

2.4.2.5 加樣回收率試驗 吸取已知含量的水提物供試品溶液0.1 mL，加入沒食子酸對照品溶液0.4 mL，同法反應后測定OD（760 nm）值，平行3 份，計算出平均回收率為96.46%，表明該測定方法準確可靠。

2.4.2.6 樣品含量測定 吸取“2.4.1”項下水提物供試品溶液、70%醇提物供試品溶液各0.2 mL，同法反應測定OD（760 nm）值，平行3 份，代入標準曲線計算出總酚含量。

2.4.3 不被吸附多酚含量測定 分別吸取“2.4.1”項下水提物供試品溶液、70%醇提物供試品溶液10.0 mL 及20.0 mL 純水，加至已加入0.6 g 干酪素的100 mL 具塞錐形瓶中，置于30 ℃水浴中保溫1.0 h，時時振搖。取出過濾，先棄去初濾液，再吸取1.0 mL續濾液于10 mL試管中。按照“2.4.2.1”項下方法，加入3.8 mL 純水及0.4 mL 磷鉬鎢酸溶液，再用10%的碳酸鈉溶液稀釋到10.0 mL，避光靜置30 min。測定OD（760 nm）值，代入標準曲線計算出不被吸附多酚含量。

2.4.4 樣品鞣質含量測定 根據以下公式計算：鞣質含量=（m總酚-m多酚）/m沉香葉×100%。奇楠沉香葉中鞣質含量分別為（2.16 ± 0.012）%（水提法）、（1.81±0.012）%（醇提法）。

2.5 抗氧化活性評價參考文獻方法[15-16]進行操作并做適當改變。

2.5.1 DPPH·清除率測定 分別準確吸取：①0.1 mg/mL 的VC 溶 液：0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL；②2.50 mg/mL 的水提物溶液：0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL；③2.49 mg/mL 的70%醇提物溶液：0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL。各加入95%乙醇溶液至2.0 mL，再加入6.5×10-5mol/L 的DPPH·溶液2.0 mL，室溫避光反應30 min，以95%乙醇溶液調零，應用紫外-可見光分光光度計于517 nm波長處測定OD 值（ODi）。同法測定95%乙醇2.0 mL與水提物/70%醇提物供試品溶液2.0 mL 混合后的OD 值（ODj），以及DPPH·溶液2.0 mL 與95%乙醇2.0 mL 混合后的OD 值（OD0）。計算公式如下：DPPH·清除率（%）=[1-（ODi-ODj）]/OD0×100%。

實驗測得VC，奇楠沉香葉水提物、70%醇提物對DPPH·的IC50分別為0.019、0.31、0.37 mg/mL，圖1、圖2 可見清除率均隨著藥物濃度的增加而提高。相比之下，奇楠沉香葉水提物、70%醇提物的IC50之間無顯著性差異，但均明顯高于VC，表明奇楠沉香葉水提物、70%醇提物對DPPH·的清除能力均弱于VC，且水提法略優于醇提法。

圖1 不同濃度抗壞血酸（VC）對DPPH·清除率的影響Figure 1 Effect of different concentrations of VC on DPPH·clearance rate

圖2 不同濃度奇楠沉香葉提取物對DPPH·清除率的影響Figure 2 Effect of different concentrations of extract of Aquilaria sinensis leaves on DPPH·clearance rate

2.5.2 ABTS+·自由基清除作用測定 分別準確吸取：①0.1 mg/mL 的VC 溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL；②2.50 mg/mL 的水提物溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL；③2.49 mg/mL 的70%醇提物溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL。各加入純水至1.0 mL，再加入ABTS+·溶液3.9 mL，室溫反應6 min，應用紫外-可見光分光光度計于734 nm 波長處測定ODE。同時吸取ABTS+·溶液3.9 mL，加入70%的乙醇溶液0.1 mL 測定ODB。計算公式如下：ABTS+·清除率（%）=（ODB-ODE）/ODB×100%。

實驗測得VC，奇楠沉香葉水提物、70%醇提物對ABTS+·的IC50分別為0.004、0.12、0.16 mg/mL，圖3、圖4 可見清除率均表現出隨著藥物濃度的增加而提高。相比之下，奇楠沉香葉水提物、70%醇提物的IC50之間無顯著性差異，但均明顯高于VC，表明奇楠沉香葉水提物、70%醇提物對ABTS+·的清除能力弱于VC，且水提法略優于醇提法。

圖3 不同濃度抗壞血酸（VC）對ABTS+·清除率的影響Figure 3 Effect of different concentrations of VC on ABTS+·clearance rate

圖4 不同濃度奇楠沉香葉提取物對ABTS+·清除率的影響Figure 4 Effect of different concentrations of Aquilaria sinensis leaves extract on ABTS+·clearance rate

2.5.3 ·OH 清除率測定 分別準確吸取：①0.1 mg/mL 的VC 溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL；②1.67 mg/mL 的水提物溶液0.05、0.1、0.2、0.4、0.6 mL；③1.67 mg/mL 的70%醇提物供試品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL。各加入純水至1.0 mL，再分別加入1 mL 的6 mmol/L 硫酸亞鐵溶液和6 mmol/L 過氧化氫溶液，室溫反應5 min。繼續加入1 mL 的6 mmol/L 水楊酸溶液，室溫反應30 min，應用紫外-可見光分光光度計于510 nm波長處測定OD 值（ODi）。以純水代替水楊酸溶液同法測定OD值（ODj）。以純水代替樣品溶液為空白對照同法測定OD 值（OD0）。計算公式如下：·OH 清除率（%）=[OD0-（ODi-ODj）]/OD0×100%。

實驗測得VC，奇楠沉香葉水提物、70%醇提 物 對ABTS+·的IC50分 別 為0.007 8、0.069、0.074 mg/mL，圖5、圖6 可見清除率均表現出隨著藥物濃度的增加而提高。相比之下，奇楠沉香葉水提物、70%醇提物的IC50之間無顯著性差異，但均明顯高于VC，表明奇楠沉香葉水提物、70%醇提物對·OH 的清除能力弱于VC，且水提法優于醇提法。

圖5 不同濃度抗壞血酸（VC）對·OH清除率的影響Figure 5 Effect of different concentrations of VC on·OH clearance rate

圖6 不同濃度奇楠沉香葉提取物對·OH清除率的影響Figure 6 Effect of different concentrations of Aquilaria sinensis leaves extract on ·OH clearance rate

圖7 不同濃度抗壞血酸（VC）對清除率的影響Figure 7 Effect of different concentrations of VC onclearance rate

圖8 不同濃度奇楠沉香葉提取物對清除率的影響Figure 8 Effect of different concentrations of Aquilariasinensis leaves extract on clearance rate

2.5.5 總還原力測定 分別準確吸取：①0.1 mg/mL的VC溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL；②5.0 mg/mL的水提物溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL；③5.0mg/mL的70%醇提物溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL。加入純水至0.5 mL，再加入0.2 mmol 的pH6.6 磷酸鹽緩沖液2.5 mL 和1%鐵氫化鉀溶液2.5 mL，50 ℃反應20 min，冰水降溫；繼續加入10%三氯乙酸溶液2.5 mL，混勻后以3 000 r/min 離心10 min；取上清液2.5 mL，加入純水2.5 mL 和0.1%氯化鐵溶液1.0 mL。應用紫外-可見光分光光度計于700 nm 波長處測定OD值。

在同樣的質量濃度下，OD 值越大，即對Fe3+的還原能力越強，表明抗氧化能力越好。由圖9、圖10 可知，在同一濃度下，奇楠沉香葉的水提物OD 值比70%醇提物稍大，但均小于VC 的OD 值，表明奇楠沉香葉水提物、70%醇提物對Fe3+的總還原力均弱于VC，且水提法略優于醇提法。

圖9 不同濃度抗壞血酸（VC）對Fe3+還原力的影響Figure 9 Effect of different concentrations of VC on the reducing power of Fe3+

圖10 不同濃度奇楠沉香葉提取物對Fe3+還原力的影響Figure 10 Effect of different concentrations of Aquilaria sinensis leaves extract on the reducing power of Fe3+

2.6 抗菌活性評價

2.6.1 菌液制備

將金黃色葡萄球菌等受試菌種于MH 瓊脂板上劃線復蘇培養24 h，挑選生長良好的單菌落于營養肉湯培養基中，37 ℃培養20 h，采用麥氏比濁管進行校正，并稀釋成濃度為1×106CFU/mL 的菌懸液。

2.6.2 MIC測定

采用微量二倍稀釋法[17]。于96 培養孔板每排第1 ～12 孔各加入100 μL 的1 × 106CFU/mL 菌懸液，再按濃度由高至低依次往每排第1 ～11孔各加入100 μL 的系列濃度（1 000.0 ～0.98 mg/mL）水提物溶液、70%醇提物溶液，第12 孔只加入純水作為空白對照。將96 孔培養板于培養箱中37 ℃培養20 h，吸取10 μL 混合培養液涂板后37 ℃培養20 h，以菌落數少于5個者為MIC。

由表1結果可知，奇楠沉香葉水提物對不同致病菌的抑制作用由強至弱依次是：銅綠假單胞菌=變形桿菌（15.63 mg/mL）＞沙門氏菌＞表皮葡萄球菌＞金黃色葡萄球菌＞福氏痢疾桿菌＞肺炎克雷伯菌=大腸桿菌（＞500.0 mg/mL）；70%醇提物則是：銅綠假單胞菌=變形桿菌（31.25 mg/mL）＞沙門氏菌＞表皮葡萄球菌=金黃色葡萄球＞福氏痢疾桿菌＞肺炎克雷伯菌=大腸桿菌（＞500.0 mg/mL）。表明奇楠沉香葉水提物、70%醇提物均對銅綠假單胞菌、變形桿菌、沙門氏菌等革蘭氏陰性菌表現出較強的抗菌活性，同時水提法優于醇提法。

表1 奇楠沉香葉提取物對不同致病菌的MICTable 1 MICs of Aquilaria sinensis leaves extract against different pathogenic bacteria

2.7 抗炎活性評價[18]

將小鼠隨機分組：空白對照組，奇楠沉香葉水提物高、中、低劑量組（生藥3.33、1.67、0.83 g·kg-1），奇楠沉香葉70%醇提物高、中、低劑 量 組（生 藥3.33、1.67、0.83 g·kg-1），每 組10 只，雌雄各半。空白對照組按20 mL·kg-1給予生理鹽水灌胃，水提物組、70%醇提物組分別給予不同劑量藥物灌胃，1 次/d，連續7 d。于實驗第7 天灌胃給藥1 h 后，吸取50 μL 的二甲苯溶液均勻涂抹小鼠右耳正反兩面，致炎20 min 后處死，剪下右耳，用打孔器打出直徑為6 mm 的圓耳片，稱質量（m），以左耳為空白對照。計算公式如下：耳廓腫脹度=m右-m左。

由圖11 可知：與空白對照組相比，奇楠沉香葉水提物高、中劑量組及70%醇提物高、中劑量組小鼠耳廓腫脹度降低均具有非常顯著性差異（P＜0.01），水提物低劑量組具有顯著性差異（P＜0.05），而70%醇提物低劑量組則無顯著性差異（P＞0.05）；同一劑量水平，水提物組與70%醇提物組相比未見顯著性差異（P＞0.05）。表明水提法與醇提法的抗炎效果相同或近似。

圖11 不同劑量奇楠沉香葉提取物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響Figure 11 Effect of different doses of Aquilaria sinensis leaves extract on xylene-induced auricular swelling in mice

3 討論

本研究測得奇楠沉香葉中總黃酮、總多糖、鞣質含量分別為：①水提法：5.04%、6.86%、2.16%；②醇提法：3.78%、3.09%、1.81%。結果表明，奇楠沉香葉中含量最高的是總多糖，其次是總黃酮，最低是鞣質。兩法相比，水提法所得有效成分含量均高于醇提法，分別是其1.33、2.22、1.19 倍，以多糖的差異量最大。考慮以水為溶劑的提取物中由不同分子量組成的水溶性多糖較多，且大分子量多糖更多，而以70%乙醇為溶劑提取得到的多糖，分子量則較為集中，致醇提法多糖含量低于水提法。

測得奇楠沉香葉對DPPH·、ABTS+·、·OH、的IC50分別為：①水提法：0.31、0.12、0.069、0.71 mg/mL； ②醇 提 法： 0.37、 0.16、 0.074、1.17 mg/mL。結果表明，沉香葉對·OH 的清除作用最強，其次是ABTS+·、DPPH·，最弱是。兩法相比，水提法所得物質的IC50均低于醇提法，分別是其0.84、0.75、0.93、0.61 倍，對清除能力的差異性最大。其原因可能與其黃酮、多糖、鞣質含量較高有關[19-20，14]。

測得奇楠沉香葉對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、變形桿菌、沙門氏菌、福氏痢疾桿菌、大腸桿菌的MIC范圍分別為：①水提法：15.63～＞500.0 mg/mL；②醇提法：31.25～＞500.0 mg/mL。結果表明，奇楠沉香葉對革蘭氏陰性菌的作用明顯強于革蘭氏陽性菌，特別是對銅綠假單胞菌、變形桿菌的作用最強。兩法相比，水提法所得物質的MIC 均低于或等于醇提法，分別是其1.0、0.5、1.0、0.5、0.5、0.5、1.0、1.0 倍，其原因可能與其黃酮、鞣質含量較高有關[21-22]。

測得奇楠沉香葉高、中、低劑量組小鼠耳廓腫脹度分別為：①水提法：13.0、15.2、16.3 mg；②醇提法：13.6、15.5、16.8 mg。結果表明，奇楠沉香葉對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹具有顯著性抑制作用，尤其是高、中劑量。兩法相比，水提法略優于醇提法，主要表現為水提法的低劑量組與空白對照組相比，耳廓腫脹度具有顯著性差異，而醇提法的低劑量組則無顯著性差異，但水提法與醇提法的相同劑量組間比較卻無明顯差異性。其原因可能是提取物在進入小鼠體內后，機體對有效成分的吸收、代謝有限，略微的含量差異，無法在活性表達上顯現出不同。

綜上所述，奇楠沉香葉中含有較多的總黃酮、總多糖和鞣質成分，同時具有較強的抗氧化、抗菌、抗炎活性，且成分含量與生物活性基本呈現正相關性。相比醇提法，水提法制備的奇楠沉香葉提取物具有更多的有效成分和更強的生物活性。