紡錘體蛋白、鋅指轉錄因子和緊密連接蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系

張子杭，成元華，2，李小梅

作者單位：1貴州醫科大學臨床醫學院病理學教研室，貴州 貴陽 550004；2貴州醫科大學附屬醫院病理科，貴州 貴陽550004

在我國，胃癌的發病率及病死率均居消化道惡性腫瘤之首［1-3］，每年死于胃癌的病人達16 萬人［4］。胃鏡的普及應用使許多早期胃癌病人得到了早期診斷和治療，從而獲得了長久的生存［5］。但在國內早期胃癌檢出率不足10%，大部分病人被發現時已處于中晚期，即使施行了胃癌根治術，5 年生存率仍低［6］，預后仍差。腫瘤轉移和復發是預后差的主要原因［7-8］，上皮間充質轉化（EMT）是腫瘤發生轉移的重要原因［6］。紡錘體蛋白（SPIN1）是新近發現的癌基因［9］，在多種腫瘤中高表達，且與不良預后密切相關，而緊密連接蛋白（Claudin-1）為鋅指轉錄因子（Slug）的下游基因［10］，其三者共同參與了EMT 的調控，與胃癌發生轉移的原因密切相關，目前國內相關研究較少，故本研究旨在分析胃癌病人癌組織中SPIN1、Slug 和Claudin-1 三種蛋白的表達情況與其臨床病理特征的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取貴州醫科大學附屬醫院2019年6月至2021年7月確診并收治的胃癌病人中抽取病人作為實驗對象，在早期胃癌病人和晚期胃癌病人中按照性別進行1∶1 分層抽樣，各抽取50 例，共計100 例，排除其中不愿參與研究病人與合并其他癌癥病人，余下的84例病患按照胃癌分期分為對照組（早期胃癌）和實驗組（晚期胃癌）兩組。對照組男20 例，女22 例，年齡范圍30～73 歲，年齡（50.48±9.51）歲；實驗組男23 例，女19 例，年齡范圍35～74歲，年齡（55.16±10.43）歲。所有病人均符合胃癌診斷標準。病人或其近親屬知情同意，本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 方法ELISA 檢測腫瘤組織中SPIN1、Slug 和Claudin-1 三種蛋白表達：新鮮腫瘤組織磨碎的勻漿5 000g離心5 min，上清液使用ELISA 試劑盒檢測（上海康朗生物科技公司），標準孔各加50 μL 不同標準濃度；分別設置待測空白孔和樣品孔。稀釋后，樣品的最終稀釋度為5 倍。加入100 μL 酶標試劑，密封避光，37 ℃孵育60 min，棄去液體，洗滌5次，顯色后在450 nm 波長處測量各孔的吸光度，比較標準曲線從而計算出各組蛋白含量。

1.3 統計學方法采用Graph pad 8.0.2 和SPSS 13.0 軟件進行統計分析。計量資料以表示。獨立t檢驗用于兩組比較，計數資料以例數（%）形式表示，用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較兩組病人在性別、吸煙史上差異無統計學意義（P＞0.05），在年齡、飲酒史、胃部疾病上差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組早、晚期胃癌病人一般資料比較∕例（%）

2.2 兩組病人SPIN1、Slug 和Claudin-1 蛋白表達情況實驗組SPIN1 蛋白表達情況為（784.19±16.42）ng∕L，對照組SPIN1 蛋白表達情況為（397.46±14.29）ng∕L。實驗組Slug 蛋白表達情況為（876.84±17.78）ng∕L，對照組Slug 蛋白表達情況為（412.34±16.08）ng∕L。實驗組Claudin-1 蛋白表達情況為（324.03±16.77）ng∕L，對照組Claudin-1 蛋白表達情況為（918.95±19.46）ng∕L，實驗組Claudin-1 蛋白表達程度低于對照組（P＜0.001）。

2.3 兩組胃癌病人與臨床病理的關系兩組胃癌病人組織學分級、腫瘤長徑、是否存在淋巴結轉移之間均差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 早、晚期胃癌病人臨床病理情況比較∕例（%）

3 討論

胃癌是全球常見的惡性腫瘤之一［11］，其發生發展涉及多信號、多基因的調控，而EMT 在這一過程中起著關鍵作用［12-14］。研究表明，細胞間連接丟失是EMT的重要標志之一［15-16］。Claudin-1作為一種緊密連接蛋白，可調節小離子在相鄰細胞之間的轉運，保持細胞極性，在聯系細胞間通信和維持上皮屏障功能中發揮重要作用。Claudin-1 的缺失會大大增加胃癌細胞遠處轉移的概率［17］，而過表達Claudin-1能抑制黑色素瘤的侵襲和遷移，同時能夠減弱裸鼠成瘤能力［18-19］。

Slug 蛋白作為EMT 的重要轉錄調節因子，可誘導E-cad 蛋 白表達下降從而促進EMT 發 生［20-21］，SPIN1 表達情況與Claudin-1 成反比，而Claudin-1 本身是上皮細胞中Slug 轉錄因子的直接下游靶基因。推測SPIN1、Slug 與Claudin-1 三者間通過某種方式促進了EMT 的發生，從而調控腫瘤細胞的侵襲和轉移能力，導致腫瘤發生遠處轉移。

本研究觀察到晚期胃癌病人SPIN1、Slug 蛋白表達情況較早期胃癌病人明顯升高，而Claudin-1 蛋白表達明顯下降。結合兩組間臨床病理情況后發現，相較于早期胃癌病人，在SPIN1、Slug 蛋白高表達而Claudin-1 低表達的晚期胃癌病人中，腫瘤體積較大且多見淋巴結轉移，組織學分型多為高、中度分化，可看出SPIN1、Slug 蛋白表達情況與胃癌惡性程度成正比，而Claudin-1 蛋白表達情況與胃癌分期成反比，Slug 和SPIN1 蛋白可能通過抑制Claudin-1蛋白表達從而促進EMT 的發生。E2F1 是參與調控細胞周期的重要因子［22］，在胃癌中可上調胃癌病人體內SPIN1 的表達，研究表明，SPIN1 可以促進胃癌細胞的遷移和增殖［23］，也可以促進細胞周期進程。這些結果表明SPIN1 在胃癌中充當潛在的癌基因，通過促進胃癌細胞生長和遠處轉移從而帶來不良預后，相關研究發現，SPIN1高表達時Claudin-1表達情況會顯著降低［24］，其二者之間的作用關系目前仍然未知。Slug 蛋白作為EMT 上游的重要轉錄因子，與CDH1啟動子結合后可誘導E-cad蛋白表達降低，從而激活EMT 發生，并導致遠處轉移和較差的預后。Claudin-1 是上皮細胞中Slug 家族因子的直接下游靶基因，通過Slug 與近端E-box 區域的直接結合而被抑制其轉錄［25］，Claudin-1 作為參與構成緊密連接結構的密蛋白，當其表達收到Slug 轉錄因子的抑制，緊密連接的結構和功能即發生改變從而導致細胞間黏附的喪失。因此當Slug蛋白高表達，E-cad和Claudin-1 表達均收到抑制，從而導致細胞正常極性和組織結構完整性降低，引起癌細胞侵襲性和轉移能力增加，惡化病人預后［26］。

綜上所述，在胃癌病人中，SPIN1、Slug蛋白高表達而Claudin-1 蛋白低表達往往提示發生淋巴結轉移且預后較差，能夠作為判斷胃癌分期較好的臨床指標。