巨細胞病毒IgM和IgG抗體在安圖AutoLumoA2000Plus化學發光儀上的性能驗證

唐貴文，華益帆，唐耀敏，何國丹

（1.貴陽市第二人民醫院檢驗科，貴州 貴陽 550081 ；2.貴州醫科大學，貴州 貴陽 550004）

巨細胞病毒（cytomegalovirus，CMV）廣泛存在于不同的人群中。CMV 感染是一個被忽視的重大公共衛生問題，全球近80% 人存在CMV 感染。CMV感染的發生與地理位置、種族和經濟狀況有關。發達國家的CMV 感染率低于發展中國家，發展中國家的CMV 感染率較高。育齡期女性的CMV 血清特異性抗體陽性率高達80% ～100%，新生兒先天性CMV感染率為0.6% ～6.1%[1]。CMV 感染易導致孕產婦發生不良妊娠事件。目前，臨床上對CMV 疫苗的需求十分迫切，雖然疫苗研究取得了一定進展，但至今尚無CMV 疫苗上市[2]。同時，目前也沒有更有效的措施來避免CMV 感染，故早發現、早治療尤為重要。為保證CMV 免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）抗體的檢測結果準確、有效，進行該項目的驗證工作顯得極為迫切。本文基于ISO15189《醫學實驗室質量和能力的專用要求》，通過安圖AutoLumo A2000Plus 化學發光儀，對CMV IgM 和IgG 抗體進行性能驗證，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑

安圖AutoLumoA2000Plus 化學發光儀；試劑：安圖公司配套使用的CMV IgM 和IgG 抗體試劑（簡稱安圖試劑）、標準品和標源質控品。

1.2 方法

1.2.1 精密度驗證 按照EP15-A3 及WS/T492-2016文件指導進行評價，IgM 和IgG 抗體分別檢測低值和高值2 個不同濃度的質控品，每個濃度每天測定5 次，連續測定5 d，獲得25 個檢測結果。根據EP15-A3規定的方法，計算各樣本的重復精密度（分析內精密度）和批間精密度，再進行統計學分析，計算變異系數（CV）。驗證要求：批內CV ≤1/4 允許總誤差（TEa）% ；批間CV ≤1/3TEa%。

1.2.2 正確度驗證 按照《CNAS-GL037 臨床化學定量檢驗程序性能驗證指南》的規定，IgM 和IgG 抗體分別使用標準品及2 個濃度進行驗證。每個濃度每天重復測定2 次，連續測定5 d，計算實測均值，并計算偏差。偏差=（實測均值- 理論濃度值）/ 理論濃度值×100%，正確度（參考物質）驗證要求：偏差不超過±15%。

1.2.3 線性驗證 根據國家衛生行業標準《WS/T 420-2013 臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》的規定，分別將IgM 和IgG 抗體接近線性范圍上限的高值樣本（H），用低值樣本（L）按照不同稀釋比例制備出至少5 個梯度樣本。每個濃度樣本重復測定3次，計算均值。將理論值與實測均值使用EXCEL 軟件進行一次方程y=ax+b 回歸分析，統計方程因子斜率a、截距b 和相關性R，要求R2≥0.99。

1.2.4 可報告范圍驗證 分別選取已知濃度接近線性范圍上限的高值樣本3 份，編號：H1、H2、H3。根據《CNAS-GL037 臨床化學定量檢驗程序性能驗證指南》所述方法并參考EP34 進行可報告范圍驗證。將H1、H2、H3 原倍樣本上機各重復測定3 次，每個高值樣本用廠家推薦的稀釋液，并在廠家推薦的稀釋比例附近進行3 個比例的手工稀釋，每份稀釋樣本重復測定3 次，計算原倍樣本及各稀釋后樣本均值，并分別與理論值計算偏差。驗證要求：3 份樣本相同稀釋比例的偏差均不大于廠家聲明的最大偏差時，對應的允許稀釋倍數應不小于廠家推薦的稀釋倍數。

1.3 統計學方法

用SPSS 20.0 軟件處理數據，計量資料用x±s表示，以t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 精密度驗證

CMV IgM 和IgG 抗體兩種濃度的質控品測得的批內精密度均小于1/4 允許總誤差，批間精密度均小于1/3 允許總誤差，驗證通過。詳見表1。

表1 CMV IgM 抗體精密度驗證結果

2.2 正確度驗證

CMV IgM 和IgG 抗體高低值的偏差均在標準品范圍內，均不超過±15%，驗證通過。詳見表2。

表2 CMV IgM 抗體正確度驗證

2.3 線性驗證

計 算 得 到y=1.0127x+0.4962，相 關 系 數R2＞0.99，驗證通過。詳見表3 和表4。

表3 CMV IgM 抗體線性驗證數據

表4 CMV IgG 抗體線性驗證數據

2.4 可報告范圍驗證

CMV IgM 抗體可報告范圍在-8.52% ～12.16%之間，CMV IgG 抗體可報告范圍在-7.57% ～2.73%之間，符合要求。詳見表5 和表6。

表5 CMV IgM 抗體項目可報告范圍驗證結果

表6 CMV IgG 抗體項目可報告范圍驗證結果

3 討論

我國是CMV 感染的高發國家。據統計，我國孕婦的CMV 血清特異性抗體陽性率為94% ～98%，新生兒先天性CMV 感染率約為0.7%[3-4]。CMV 抗體檢測結果的準確可靠，可以給臨床診斷提供數據支持及后續治療的方向。實驗室檢測CMV 抗體的依據為美國《醫療機構臨床實驗室管理辦法》和ISO15189 醫學實驗室認可的相關要求，以及《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》《臨床生物化學檢驗常規項目分析質量要求》[5-7]等。在進行臨床檢測之前，需要對實驗室的儀器設備、檢驗系統和方法等的主要分析性能進行驗證，并明確要求驗證結果能達到臨床要求[8-12]。本研究結果顯示，CMV IgM 抗體低水平和高水平質控品測得的批內精密度分別為3.20% 和0.42%，CMV IgG 抗體低水平和高水平質控品測得的批內精密度分別為1.38% 和1.90%，均小于1/4 允許總誤差6.25% ；而測得的批間精密度，CMV IgM 抗體分別為1.42% 和0.78%，CMV IgG 抗體分別為1.51%和2.73%，均小于1/3 允許總誤差8.33%，符合定量項目的要求。正確度方面，CMV IgM 抗體偏差P 分別為：0.66% 及-0.15%，CMV IgG 抗體偏差P 分別為：1.53% 及-0.57%，偏差P 均不大于±15%，符合要求。線性方面，R2≥0.99，b 值均在0.9 ～1.1范圍內。可報告范圍方面，CMV IgM 抗體允許偏差在-8.52% ～12.16% 之間，CMV IgG 抗體允許偏差在-7.57% ～2.73% 之間，均位于±15% 以內，符合要求。

綜上所述，通過對CMV IgM 和IgG 抗體項目檢測系統的精密度、正確度、線性、可報告范圍各項性能參數的驗證與分析，說明CMV IgM 和IgG 抗體項目的檢測系統性能良好，項目的相關性能也符合相應要求，能夠保證CMV IgM 和IgG 抗體檢驗結果的準確性和穩定性。目前，國內報道的性能驗證研究大部分是基于美國臨床實驗室標準化協會的相關文件（EP15-A2、EP6-A2、EP7-A2、C28-A2 等）或美國臨床實驗室改進修正法規進行的方案設計[13]，國家對優生定量項目的性能沒有明確規定，但是實驗室在實際工作中應進行相關方面的驗證工作，以確保實驗室檢驗結果的準確可靠，給臨床以更多數據支持，更好地為患者服務。