頂空-氣相色譜法測定桂利嗪原料中4種有機溶劑的研究

敦 康，郭永輝，付 莉，柴倩雯，隋思強，張俊朋，王若琳

（1.河北省藥品審評中心，河北 石家莊 050091 ；2.河北省藥品醫療器械檢驗研究院，河北 石家莊 050071；3.河北省藥品職業化檢查員總隊，河北 石家莊 050091；4.河南省食品藥品檢驗所，河南 鄭州 4500083；5.河北科技大學材料科學與工程學院，河北省柔性功能材料重點實驗室，河北 石家莊 050018）

桂利嗪是一種鈣通道拮抗劑，能通過阻止血管平滑肌鈣內流使血管擴張，從而改善腦部供血。目前，桂利嗪多用于治療缺血性腦血管病，包括腦血栓形成、腦動脈硬化等[1-7]。桂利嗪現行標準《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2020 年版二部桂利嗪品種項下，未對桂利嗪原料藥中的有機溶劑進行質量控制，無法保證其安全性和有效性[8]。目前，關于桂利嗪質量控制的研究文獻及報道較少。我們采用氣-質聯用的方法檢測到桂利嗪原料藥中含有有機溶劑異丙醇，同時結合桂利嗪的合成工藝中使用到甲醇、乙醇、丙酮作為溶劑[9-15]，這些有機溶劑殘留會對人體健康造成一定危害，因此有必要建立桂利嗪中有機溶劑甲醇、乙醇、丙酮和異丙醇的檢測方法，以用于其質量控制，更好地保障患者的用藥安全。國外藥典未對桂利嗪原料中的有機溶劑進行質量控制，同時未見相關文獻對桂利嗪原料中的殘留溶劑進行研究。結合目前有機殘留溶劑的主要測定方法為頂空-氣相色譜法[16-22]，我們根據國際人用藥品注冊技術協調會（ICH）的指導原則和《中國藥典》2020 年版四部氣相色譜法及殘留溶劑的相關規定，采用頂空-氣相色譜法對上述4 種有機溶劑的檢測條件進行了研究，現報道如下。

1 儀器與試劑

氣相色譜儀：Agilent 7896，美國安捷倫科技公司；XS105 電子天平，瑞士METTLER TOLEDO 公司。甲醇對照品：LiChrosolv，l1057307943；乙醇對照品：國藥集團化學試劑有限公司，20190618；丙酮對照品：天津福晨化學試劑有限公司；異丙醇對照品：山東禹王和天下新材料有限公司，2020030601；4 種對照品的純度均為100%；N,N-二甲基甲酰胺：色譜純，美國默克公司；試驗用水為超純水；桂利嗪原料藥：批號分別為180119061、GL21901001、CIN/11171111-01。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

CP9210-wax（30 m×320 μm×1.8 μm）色譜柱，載氣：N2；流速：2 mL/min；分流比：20:1；檢測器：FID 檢測器；檢測器溫度：250 ℃；進樣口溫度：200 ℃；進樣方式：頂空；頂空平衡時間：30 min ；頂空加熱溫度：100 ℃；定量環溫度：105 ℃；傳輸線溫度：110 ℃；程序升溫：起始溫度為35 ℃，維持5 min，以每分鐘3 ℃的速率升溫至50 ℃，維持2 min，再以每分鐘20 ℃的速率升溫至200 ℃，維持7 min。

2.2 溶液的配置

2.2.1 供試品溶液 取桂利嗪原料藥約0.2 g，精密稱定，置于頂空瓶中，精密加N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，振搖使溶解，壓蓋密封，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液 取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇各適量，精密稱定，用N,N- 二甲基甲酰胺定量稀釋制成每1 mL 約含甲醇1.5 μg、乙醇66 μg、丙酮4 μg、異丙醇24 μg 的混合溶液，精密量取5 mL，置于頂空瓶中，壓蓋密封，作為對照品溶液。

2.2.3 空白溶液 精密量取N,N- 二甲基甲酰胺5 mL置于頂空瓶中，壓蓋密封，作為空白溶液。

2.3 專屬性試驗

精密量取對照品溶液5 mL，置于頂空瓶中，密封。進樣，記錄氣相色譜圖，色譜圖見圖1。

精密量取N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，置于頂空瓶中，密封。進樣，記錄氣相色譜圖，色譜圖見圖2。與對照品溶液相比，在甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇出峰位置無FID 響應。說明本色譜條件下各峰之間能夠實現良好分離，該方法專屬性好，能夠用于有機溶劑的檢測。

圖2 N,N- 二甲基甲酰胺溶劑氣相色譜圖

2.4 重復性試驗

取批號180119061 和CIN/11171111-01 樣品各約0.2 g，精密稱定，置于頂空瓶中，精密加N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，振搖使溶解，密封。每個樣品平行制備6 份，記錄氣相色譜圖，按外標法以峰面積計算。結果見表1。結果表明該試驗的重復性良好。

表1 重復性結果

2.5 線性關系試驗

取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇各適量，精密稱定，用N,N-二甲基甲酰胺定量逐級稀釋制成標準曲線工作溶液，分別精密量取5 mL，置于頂空瓶中，進樣，記錄氣相色譜圖。以濃度為Y 軸，峰面積為X 軸，擬合線性方程。結果見表2。結果表明甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇的濃度在0.2 ～96 μg/mL 范圍內與峰面積呈良好線性關系。

表2 線性及范圍測定結果

2.6 檢出限與定量限

取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇各適量，精密稱定，用N,N- 二甲基甲酰胺定量稀釋，測定檢出限與定量限，結果見表3。

表3 檢出限與定量限測定結果

2.7 精密度試驗

取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇各適量，精密稱定，用N,N- 二甲基甲酰胺定量稀釋制成每1 mL 約含甲醇1.5 μg、乙醇66 μg、丙酮4 μg、異丙醇24 μg的混合溶液，精密量取5 mL，置于頂空瓶中，密封。平行制備6 份，記錄氣相色譜圖。結果見表4。結果表明該方法的精密度良好。

表4 精密度測定結果

2.8 加標回收試驗

取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇各適量，精密稱定，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋成低、中、高三個濃度的混合溶液。取桂利嗪樣品（批號180119061）約0.1 g，精密稱定，精密加混合溶液5 mL，密封。每個濃度平行制備3 份。同時配制混合對照溶液，記錄氣相色譜圖，按外標法計算。結果見表5。結果表明甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇四種物質的回收率良好，表明該方法測定桂利嗪中有機溶劑的準確度高。

表5 回收率測定結果

續表

2.9 供試品測定

取桂利嗪原料藥約0.2 g，精密稱定，置于頂空瓶中，精密加N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，密封，振搖使溶解，按上述色譜條件測定溶劑殘留，測定結果見表6。參照《中國藥典》2020 年版四部通則0861 殘留溶劑測定法中的藥品限度，甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇限度分別為0.3%、0.5%、0.5%、0.5%。3 批原料藥中殘留溶劑遠低于限度要求。

表6 殘留溶劑測定結果（%）

3 討論

3.1 供試品測定結果

在供試品測定中，我們使用了3 個廠家的產品作為供試品，3 個廠家分別使用了3 種不同的生產工藝。工藝一使用了甲醇、乙醇和丙酮作為溶劑，工藝二和工藝三分別使用了乙醇和異丙醇作為溶劑。因此我們最終將甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇作為殘留溶劑進行檢測，建立了桂利嗪中殘留溶劑甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇的檢測方法。

3.2 色譜柱的選擇

我們選擇了非極性、弱極性、中等極性和強極性四種不同極性的色譜柱進行了考察，根據考察結果選擇聚乙二醇（PEG-20M）（或極性相近）為固定液的毛細管柱，使各組分按照極性由小到大的順序出峰，這樣極性相差較大的甲醇和丙酮就能夠實現良好的分離，因此本試驗選擇CP9210-wax 作為色譜柱。

3.3 升溫程序的選擇

根據文獻和我們的實踐經驗判斷，如果使用恒柱溫氣相色譜分析法，結果會使低沸點組分很快流出，峰形窄且易重疊，高沸點組分流出很慢，峰形扁平且拖尾，結果不利于定量測定，拖延分析時間。因此本研究采用程序升溫氣相色譜法，為了使甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇達到良好的分離，利用其沸點不同的特性，設定升溫程序，改變初始溫度和升溫速率來實現良好的分離。

3.4 頂空條件的選擇

為了使待測物能夠氣化充分，本研究選擇了頂空進樣法，通過改變頂空瓶的平衡時間和溫度使待測物充分氣化。平衡溫度分別設定為80、100、120 ℃，平衡時間分別設定為20、30、40 min，根據交叉試驗結果選擇100 ℃為平衡溫度，30 min 為平衡時間，待測物能夠在頂空瓶中達到平衡，測定結果準確穩定。

綜上所述，本試驗建立的頂空- 氣相色譜法測定桂利嗪原料藥中4 種有機溶劑的準確度高，操作簡單，可以有效控制產品質量，為相關質量標準的制定提供了參考，為企業提高藥品質量提供了方法和參考。