MACC1、c-met及ERCC1的表達(dá)在結(jié)直腸癌病理評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值研究

曹 明，懷建國(guó)，楊小苗

（蕪湖市第一人民醫(yī)院病理科，安徽 蕪湖 241000）

結(jié)直腸癌現(xiàn)已成為我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。近年來(lái)隨著國(guó)人生活水平的提高以及飲食習(xí)慣的改變，結(jié)直腸癌的發(fā)病率逐年升高。現(xiàn)階段，結(jié)直腸癌最主要的治療方式仍然是外科根治性手術(shù)輔以術(shù)后化療。約半數(shù)的結(jié)直腸癌患者在確診時(shí)病情即已處于晚期，后期的隨訪表明有超過(guò)一半的患者因腫瘤復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處廣泛轉(zhuǎn)移而死亡[1]。結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1（MACC1）是2009 年由美國(guó)學(xué)者Stein 等研究發(fā)現(xiàn)的，該基因與結(jié)腸癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[2]。隨后的研究發(fā)現(xiàn)MACC1 與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（c-met）的表達(dá)呈正相關(guān)[3]，二者參與了結(jié)腸癌的發(fā)生及發(fā)展。傳統(tǒng)結(jié)直腸癌術(shù)后病理評(píng)估大多是基于病理組織學(xué)，具有相對(duì)的主觀性。本研究對(duì)結(jié)直腸癌根治標(biāo)本癌組織及癌旁組織進(jìn)行MACC1 和c-met 表達(dá)檢測(cè)，以了解二者在結(jié)直腸癌術(shù)后標(biāo)本病理評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值，進(jìn)而豐富結(jié)直腸癌術(shù)后病理評(píng)估內(nèi)容，為臨床后續(xù)治療提供一定的參考。核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（ERCC1）是核苷酸切除修復(fù)途徑的重要成員，抑制ERCC1 的表達(dá)可有效抑制惡性腫瘤的增殖[4]。一些研究已表明ERCC1 的表達(dá)是影響多種惡性腫瘤患者預(yù)后的重要因素[5-7]。然而，結(jié)直腸癌中ERCC1 的表達(dá)與患者預(yù)后之間的關(guān)系，學(xué)者之間尚存在爭(zhēng)議。有研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌ERCC1 高表達(dá)提示患者預(yù)后較差，因其影響化療效果[8]。同時(shí)，又有一些研究認(rèn)為ERCC1 的表達(dá)情況與結(jié)直腸癌患者的預(yù)后無(wú)關(guān)[9-10]。本研究對(duì)結(jié)直腸癌根治標(biāo)本進(jìn)行癌組織ERCC1 表達(dá)檢測(cè)，評(píng)估不同臨床病理特征條件下ERCC1 的表達(dá)情況，為其在化療評(píng)估中的應(yīng)用提供一定的參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

分析2019 年至2021 年在我院行結(jié)直腸癌根治性手術(shù)治療的103 例患者的臨床病理資料，其中男60 例，女43 例；年齡26 ～87 歲。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)（免疫組化）法檢測(cè)癌組織中MACC1、c-met、ERCC1 及癌旁組織中MACC1、c-met的表達(dá) 103 例結(jié)直腸癌患者行根治性手術(shù)治療后，取每例患者癌組織2 塊，癌旁組織（以手術(shù)標(biāo)本吻合口為癌旁組織）1 塊。使用10% 中性福爾馬林固定標(biāo)本，隨后進(jìn)行常規(guī)處理，并行免疫組化染色，染色采用二步法。MACC1 抗體、c-met 抗體由美國(guó)Bioss 公司提供，抗體稀釋濃度1:400 ；ERCC1 抗體由福建邁新公司提供，克隆號(hào)8F1，為即用型抗體；二步法Elivision Plus 免疫組化試劑盒、DBA 試劑盒均由福建邁新公司提供。

1.2.2 MACC1、c-met、ERCC1 的免疫組化染色結(jié)果判讀 結(jié)果判讀由2 名具備高級(jí)職稱(chēng)的病理科醫(yī)師進(jìn)行，每張切片隨機(jī)選擇10 個(gè)視野，單個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算染色陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞百分比。MACC1陽(yáng)性大部分表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)，少部分表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞核；c-met 陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)；ERCC1 陽(yáng)性則表達(dá)于細(xì)胞核。腫瘤細(xì)胞染色百分比評(píng)分：腫瘤細(xì)胞無(wú)表達(dá)為0 分，陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞百分比≤10% 為1 分，陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞百分比為11% ～50%為2 分，陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞百分比為51% ～75% 為3 分，陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞百分比＞75% 為4 分。腫瘤細(xì)胞免疫組化染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)著色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。最后計(jì)算上述兩項(xiàng)評(píng)分的乘積，MACC1、c-met 免疫組化結(jié)果判讀，如乘積＞3 分為陽(yáng)性，乘積≤3 分則為陰性[11]；ERCC1免疫組化結(jié)果判讀，乘積＞2 分為陽(yáng)性，乘積≤2 分則為陰性[12]。MACC1、c-met、ERCC1 染色陽(yáng)性結(jié)果如圖1-3 所示。

圖1 MACC1 陽(yáng)性（×100，表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)）

圖2 c-met 陽(yáng)性（×100，表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)）

圖3 ERCC1 陽(yáng)性（×100，表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞核）

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

選用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較行χ2 檢驗(yàn)；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中MACC1 及c-met 陽(yáng)性表達(dá)率的比較

結(jié)直腸癌組織中MACC1、c-met 的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.0001）。詳見(jiàn)表1。

表1 不同組織中MACC1 及c-met 陽(yáng)性表達(dá)率的比較[例（%）]

2.2 不同臨床病理特征患者結(jié)直腸癌組織中MACC1及c-met 陽(yáng)性表達(dá)率的比較

不同性別、年齡患者結(jié)直腸癌組織中MACC1、c-met 的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同病理大體類(lèi)型、腫瘤T 分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況患者結(jié)直腸癌組織中MACC1、c-met 的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表2。

表2 不同臨床病理特征患者結(jié)直腸癌組織中MACC1 及c-met 陽(yáng)性表達(dá)率的比較[例（%）]

2.3 不同臨床病理特征患者結(jié)直腸癌組織中ERCC1陽(yáng)性表達(dá)率的比較

不同性別、年齡、病理大體類(lèi)型、腫瘤T 分期患者結(jié)直腸癌組織中ERCC1 的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況患者結(jié)直腸癌組織中ERCC1 的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表3。

表3 不同臨床病理特征患者結(jié)直腸癌組織中ERCC1 陽(yáng)性表達(dá)率的比較[例（%）]

3 討論

MACC1、c-met 通過(guò)參與調(diào)控肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）/c-met 信號(hào)通路，促進(jìn)結(jié)直腸癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[13]。本研究依據(jù)上述理論基礎(chǔ)，通過(guò)檢測(cè)結(jié)直腸癌患者癌組織中MACC1、c-met 的表達(dá)情況，進(jìn)而分析MACC1、c-met 的表達(dá)與不同臨床病理特征之間的關(guān)系，以了解MACC1、c-met 免疫組化檢測(cè)在結(jié)直腸癌患者術(shù)后病理評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值。本研究發(fā)現(xiàn)，癌組織中MACC1、c-met 的陽(yáng)性表達(dá)率遠(yuǎn)高于癌旁組織，該結(jié)果與過(guò)往其他研究[14]基本一致。MACC1 基因包含7 個(gè)外顯因子與6 個(gè)內(nèi)含因子，共有2559 個(gè)核苷酸，位于人類(lèi)7 號(hào)染色體（7p21.1）內(nèi)。MACC1 的特殊功能區(qū)域中，ZU5、SH3 區(qū)域可介導(dǎo)特定蛋白質(zhì)的產(chǎn)生，另一區(qū)域則可引導(dǎo)細(xì)胞凋亡。當(dāng)MACC1 與c-met 激活HGF/c-met 信號(hào)通路后，可促進(jìn)結(jié)直腸癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[15]。因而，結(jié)直腸癌組織中MACC1、c-met 呈高表達(dá)狀態(tài)。腫瘤T 分期、腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況是過(guò)往評(píng)估結(jié)直腸癌術(shù)后病理特征的核心內(nèi)容，也是傳統(tǒng)病理評(píng)估的重要組成部分。但上述病理評(píng)估均依據(jù)病理形態(tài)學(xué)，具有一定的主觀性。過(guò)往大量的研究提示，腫瘤T 分期較晚、腫瘤分化程度低及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者預(yù)后較差。HGF/c-met 信號(hào)傳導(dǎo)通路在正常情況下，參與胚胎發(fā)育以及組織修復(fù)等正常生理過(guò)程，當(dāng)MACC1 與c-met 出現(xiàn)異常結(jié)合后，可導(dǎo)致HGF/c-met信號(hào)通路激活，促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展[15]。本研究發(fā)現(xiàn)腫瘤T 分期為T(mén)3或T4、腫瘤分化程度低、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者癌組織中MACC1、c-met 的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯升高，提示MACC1、c-met 既參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生，又促進(jìn)了結(jié)直腸癌的發(fā)展，進(jìn)一步表明MACC1、c-met 在結(jié)直腸癌等惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起到了較為關(guān)鍵的作用，與先前的研究結(jié)果[16]較為一致。同時(shí)，本研究還發(fā)現(xiàn)潰瘍型結(jié)直腸癌患者癌組織中MACC1、c-met 的陽(yáng)性表達(dá)率高于隆起型結(jié)直腸癌患者，而過(guò)往研究未提示這一現(xiàn)象。該現(xiàn)象可能對(duì)解釋潰瘍型與隆起型結(jié)直腸癌患者的預(yù)后差異具有一定的價(jià)值，上述改變有待進(jìn)一步深入研究及探討。

現(xiàn)階段，F(xiàn)OLFOX 方案為結(jié)直腸癌術(shù)后標(biāo)準(zhǔn)的化療方案之一，有效率較高，一般超過(guò)40%[17]。鉑類(lèi)藥物通過(guò)使DNA 螺旋形成交聯(lián)物，促使腫瘤細(xì)胞凋亡[18]。過(guò)往的研究顯示，ERCC1 表達(dá)在非小細(xì)胞肺癌[19]等惡性腫瘤患者中有預(yù)后評(píng)估價(jià)值，但其在結(jié)直腸癌患者預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值仍有爭(zhēng)議[8-10]。進(jìn)一步探尋ERCC1 在結(jié)直腸癌患者預(yù)后評(píng)估中的作用，具有一定的臨床價(jià)值。就理論而言，ERCC1 高表達(dá)患者的腫瘤細(xì)胞具有較高的DNA 修復(fù)能力，因此可使鉑類(lèi)藥物的抗癌作用降低，進(jìn)而導(dǎo)致ERCC1 高表達(dá)的患者預(yù)后不良。一項(xiàng)包含2076 例患者的研究表明，ERCC1 高表達(dá)的患者具有較短的無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤分化程度低、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，其癌組織中ERCC1 的表達(dá)較高。在傳統(tǒng)病理評(píng)估中，腫瘤分化程度低、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等現(xiàn)象，均提示不良預(yù)后，而ERCC1 的高表達(dá)可能進(jìn)一步加劇這種不良預(yù)后，這與傳統(tǒng)病理評(píng)估是相佐證的。同時(shí)，免疫組化檢測(cè)結(jié)果具有相對(duì)的客觀性，因而ERCC1 在結(jié)直腸癌的術(shù)后病理評(píng)估中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。由于本研究對(duì)結(jié)直腸癌患者隨訪的時(shí)間尚短，因此ERCC1 在結(jié)直腸癌化療評(píng)估中的作用有待進(jìn)一步的觀察。

綜上所述，相對(duì)于癌旁組織，結(jié)直腸癌組織中MACC1、c-met 的 表 達(dá) 明 顯 增 高，MACC1、c-met在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。同時(shí)，MACC1、c-met 高表達(dá)與傳統(tǒng)病理評(píng)估中的不良預(yù)后因素均有一定的相關(guān)性，免疫組化檢測(cè)相對(duì)于病理組織學(xué)具有相對(duì)的客觀性，相應(yīng)的檢測(cè)可進(jìn)一步完善病理評(píng)估，因而具有一定的臨床參考及應(yīng)用價(jià)值。ERCC1 檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)病理評(píng)估結(jié)果有一定的相關(guān)性，其病理評(píng)估價(jià)值有待后續(xù)工作的進(jìn)一步探討及研究。