招遠地區規模化種雞場禽白血病流行病學調查

蘇興海

（招遠市動物疫病預防控制中心 山東煙臺 265400）

禽白血病（avian leukosis，AL）是養雞業中主要的病毒性傳染病之一，該病主要由不同亞群（A～E、J、K）的禽白血病病毒（avian leukosis virus，ALV）引起以多種內臟器官中多種細胞腫瘤為主要臨床特征的一類病毒傳染性疾病[1]。相關研究表明ALV 可以感染不同的雞群（祖種雞、父母代雞、商品代雞等），當不同的雞群感染該病毒后可以導致機體嚴重的機體免疫（細胞免疫與體液免疫）抑制，導致相關疫苗免疫失敗，同時導致雛雞的生長緩慢與抑制，使其母雞導致性成熟延遲與生殖系統器官生長不良，嚴重影響其種雞的產蛋率、種蛋受精率及孵化率，嚴重者可以導致其死亡[2,3]。臨床中ALV 沒有有效疫苗免疫接種和藥物預防，且在雞群中可以通過多種傳播方式進行傳播，尤其是可以通過垂直傳播（經卵傳播）代代相傳，且成為水平傳播的主要來源，對養雞業危害較高[4]。ALV被列為《國家中長期動物疫病防治規劃（2012—2020 年）》中重要的凈化和消除的疾病，因此，對種雞場中ALV 進行有效的控制、凈化具有重要的意義。臨床中對ALV 檢測方法具有很多種，如RT-PCR方法、PCR 方法、雞胚成纖維細胞接種法、免疫熒光試驗、病毒分離鑒定、酶聯免疫吸附試驗（EILSA）等多種方法用于其中用ALV 的臨床檢測，其在臨床中檢測最常用的、簡單的方法就是EILSA 檢測，EILSA 檢測主要用于檢測ALV p27 抗原最常見，該方法主要用于種雞場祖代雞、父母代及商品蛋雞的ALV 的檢測[5-7]。為了解招遠地區規模化種雞場中祖種雞、父母代雞及種蛋中禽白血病（ALV）攜帶情況及流行亞群，用EILSA 方法對采集的樣品進行ALV p27抗原及亞群的檢測。為地區規模化種雞場中ALV 凈化和防控提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 病料來源

2020—2022 年采集招遠地區規模化種雞場中肛拭子、血清及蛋清樣品1 375 份品（表1），其中2020 年采集組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）431 份、2021 年采集組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）462份，2022 年采集組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）482 份。

表1 樣品采集統計結果

1.2 病料組織的處理

將采集自招遠地區規模化種雞場中的肛拭子、血清及蛋清樣品1 375 份樣品進行處理，肛拭子樣品用中等量的無菌PBS 進行高速離心（12 000 r/min 10 min）后取上清分裝，血液用離心形式進行制備血清，蛋清樣品進行分裝，處理完的樣品在-80 ℃低溫冰箱中保存備用。

1.3 ALV p27 抗原

按照EILSA 檢測ALV p27 抗原試劑盒說明書對采集自招遠地區規模化種雞場中的肛拭子、血清及蛋清樣品1 375 份樣品進行處理，將處理過的樣品進行反復凍融3～5 次后進行ALV p27 抗原和亞群檢測，并分析其感染率。

1.3 ALV 亞群檢測

對采集自招遠地區規模化種雞場中的肛拭子、血清及蛋清樣品1,375 份樣品中ALV p27 抗原檢測陽性樣品，按照EILSA 檢測ALV 亞群（A、B、C、D、E、J）試劑盒說明書進行ALV 亞群檢測，并分析其ALV p27 抗原檢測陽性樣品的亞群攜帶情況。

2 結果

2.1 ALV p27 抗原的檢測結果

對2020 年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）431 份、2021年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）462 份，2022 年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）482 份等樣品進行ALV p27 抗原陽性率在不同種類樣品感染情況統計，結果由表2 可知，2020—2022 年共計采集1 375 份樣品，檢測的陽性樣品243 份，陽性率為17.8%，2020—2022 年中肛拭子、蛋清的ALV p27 抗原陽性率均高于血清的ALV p27 抗原陽性率，且呈現逐年上升的趨勢。

表2 ALV p27抗原的檢測結果

2.2 ALV 亞群的檢測結果

對2020 年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）431 份、2021年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）462 份，2022 年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）482 份等樣品進行ALV 亞群的測定，并統計在（肛拭子、血清、蛋清）樣品中的分布情況。結果由表3 可知，2020—2022 年中規模化種雞場中ALV 亞群流行情況有A/B 亞群、J 亞群2 種亞群，檢測率分別為14.%、85.6%，以ALV J 亞群流行為主，2020—2022 年中肛拭子、蛋清的ALVA/B 亞群的檢測率也出現升高的趨勢。

表3 ALV亞群的檢測結果

3 討論

禽白血病是養雞業中常見免疫抑制的疾病之一，該病的檢測方法很多如酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、RT-PCR、間接免疫熒光（IFA）等[7,8]。許多研究表明，采用ELISA 檢測ALV p27 抗原是最有效的檢測方法，該ELISA 法具有快捷、便于操作、敏感性高并且適用于大面積檢測，因此，在種雞群中ALV 檢測與凈化中廣泛應用[9]。相關研究表明在我國不同的種雞場中禽白血病病毒主要有6 種亞群（A、B、C、D、E、J）流行，其中最常見的亞群為A/B 亞群和J 亞群，但是禽白血病病毒其他的亞群也逐漸出現[10]。目前ALV 沒有有效的預防與治療的方法，主要通過檢測，淘汰陽性的種雞群，建立健康的種雞群。相關研究表明ALV 在我國雞場中廣泛流行。李珂等[11]研究表明云南省滇東、滇西、滇中、滇南和滇北5 個區域8 個地方品種雞群的2 295 份血清樣品進行了禽白血病病毒（ALV）檢測，結果表明，ALV 檢出率為27.02%。邢林林等[10]報道了從山東地區采集7 個種雞場的1 000 份蛋清，用ELISA 方法檢測蛋清的ALV p27 抗原，1 298 份血清樣品進行ALV-A/B 和ALV-J 亞群的攜帶情況的檢測，結果顯示，山東地區采集7 個種雞場中的1 000 份蛋清ALV p27 抗原檢測的陽性率為0.1%～1.0%之間，1 298 份血清樣品中A/B 亞群陽性率為6.39%、ALV-J 亞群陽性率為19.80%。張浩等[9]報道了伊犁河谷地區不同來源黃羽父母代肉種雞禽白血病病毒以A/B 亞群和J 亞群感染為主。本試驗研究表明，2020—2021 年采集1 375 份樣品中ALV 陽性率為17.8%，且肛拭子、蛋清的ALV p27 抗原陽性率均高于血清，且呈現逐年上升的趨勢，說明該地區規模化種雞場中ALV 流行嚴重，應該引起注意，定期進行檢測，淘汰陽性雞群，進行有效的綜合防控。國內外相關研究表明，ALV 以J 亞群流行為主，本研究通過ALV 亞群的檢測，該地種雞場中ALV 的A/B 亞群、J 亞群檢測率分別為14.%、85.6%，以ALV J 亞群流行為主，且ALV 的A/B 亞群的檢測率呈逐年上升的趨勢。因此，在以后防控注意A/B 亞群的凈化。