50%苯菌靈可濕性粉劑的分析方法研究

陳 偉，何培迎，黃華樹

(1.江蘇藍豐生物化工股份有限公司，江蘇 新沂 221400；2.中國農藥工業協會，北京 100125)

關鍵字：苯菌靈；高效液相色譜；分析

苯菌靈(benomyl)是美國杜邦公司研制開發的高效、廣譜、內吸性的氨基甲酸甲酯類殺菌劑，具有保護、治療和鏟除作用，其在植物體內代謝為多菌靈及具有揮發性的異氰酸丁酯而發揮殺菌作用，主要用于防治谷類作物、葡萄、仁果及核果類、水稻和蔬菜上的子囊菌綱、半知菌綱及某些擔子菌綱真菌引起的病害[1]。

苯菌靈的分析方法除了少數采用氣相色譜法和薄層色譜法外，主要采用液相色譜法[2-5]。50%苯菌靈可濕性粉劑作為一種常用登記制劑產品，有關其分析方法報道較少。基于此，本文采用反相高效液相色譜法開展了50%苯菌靈可濕性粉劑中有效成分的分析方法研究，以期為該產品的質量控制提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑和試劑

苯菌靈標樣(沈陽化工研究院有限公司)，已知質量分數含量≥99.0%；正丁基異氰酸酯、乙腈、乙酸，色譜純(上海國藥)。

1.2 主要儀器

Agilent1260 型高效液相色譜儀配可調波長紫外檢測器和色譜數據處理機(安捷倫)；AL204 型電子天平(梅特勒)。

1.3 色譜檢測條件

色譜柱：250 mm×4.6 mm 不銹鋼柱，內填5 μm化學鍵合C18；流動相：乙腈+2%乙酸溶液＝80+20(體積比)；流量：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；檢測波長：290 nm；進樣體積：20 μL；采用外標法峰面積定量。在該色譜條件下，苯菌靈保留時間約為5.2 min，如圖1 所示。

圖1 苯菌靈標樣的高效液相色譜圖(3.2 μg/μL)

1.4 檢測步驟

1.4.1 流動相配制

準確移取乙酸10 mL 于500 mL 超純水中，配制成2%乙酸溶液，按照乙腈+乙酸溶液=80+20(體積比)配制成流動相，超聲脫氣備用。

1.4.2 標準溶液的配制

準確稱取苯菌靈標樣約40 mg(稱準至0.1 mg)置于250 mL 容量瓶中，用含有5%正丁基異氰酸酯的乙腈溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。

1.4.3 試樣溶液的配制

準確稱取含有苯菌靈試樣約40 mg(稱準至0.1 mg)置于250 mL 容量瓶中，用含有5%正丁基異氰酸酯的乙腈溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻、過濾。

1.4.4 進樣分析

按1.3 節所述的儀器條件運行液相色譜儀，待儀器基線穩定后，連續注入數針標樣溶液，計算各針相對響應值的重復性，待相鄰2 針的相對響應值變化小于1.0%，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.4.5 結果計算

將測得2 針試樣溶液以及試樣前后2 針標樣溶液中苯菌靈面積進行平均，苯菌靈的質量分數X1(%)按式(1)計算：

式中：R1為標樣溶液中苯菌靈峰面積的平均值；R2為試樣溶液中苯菌靈峰面積的平均值；m1為苯菌靈標樣的質量，g；m2為試樣的質量，g；p為苯菌靈標樣的質量分數，%。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

采用二極管陣列檢測器(DAD)在190～400 nm 吸收波長范圍內觀察苯菌靈的紫外吸收曲線，掃描結果如圖2 所示。從圖2 可知，在掃描范圍內苯菌靈最大吸收波長為290 nm，結合出峰峰形及干擾峰情況，最終選擇290 nm 作為本方法的檢測波長。

圖2 苯菌靈標樣的紫外吸收掃描

2.2 流動相的選擇

目前國內行業方法檢測苯菌靈采用的流動相是甲醇加1%乙酸配制而得。但在實際試驗操作中發現，在該流動相條件下，苯菌靈制劑中出現了更多的雜質峰，部分雜質峰與苯菌靈峰的出峰位置接近甚至重疊，無法達到良好的分離效果，從而影響檢測結果的可靠性。因此本文優化了流動相條件，采用2%乙酸溶液的緩沖體系作為流動相對苯菌靈和雜質進行有效分離。結果發現，將乙酸配制成2%溶液，加入乙腈，以乙腈∶乙酸溶液80∶20 的體積比配制成流動相，所得色譜圖顯示能夠將苯菌靈和雜質進行更好地分離，且有效成分出峰位置無明顯雜質干擾，符合定量分析要求，且峰形更好(圖1)，因此本試驗選用該體系作為流動相。

2.3 分析方法的線性相關性試驗

準確配制一系列不同質量濃度的苯菌靈標樣溶液，分別為0.208 3、0.709 2、1.205 9、1.410 8、2.219 8 mg/mL，然后分別按1.4 節測定步驟進行分析檢測，以苯菌靈的質量濃度為橫坐標，苯菌靈的峰面積為縱坐標，計算一元性回歸方程和作線性相關圖，結果如圖3 所示。在選定質量濃度范圍內，苯菌靈的質量濃度與峰面積線性良好，苯菌靈線性回歸方程y=2 370.7x+39.80，相關系數(R2)為0.999。

圖3 苯菌靈線性回歸曲線

2.4 分析方法的精密度試驗

任取一批50%苯菌靈可濕性粉劑，按1.4 節測定步驟連續測定苯菌靈含量5 次，分別計算其標準偏差、變異系數。精密度測定試驗數據見表1，可見，苯菌靈的標準偏差為0.158，變異系數為0.312%。

表1 苯菌靈精密度測定

2.5 方法準確度試驗

準確稱取已知含量的50%苯菌靈可濕性粉劑樣品5 份，分別加入定量的苯菌靈標樣，然后按1.4 節測定步驟測定苯菌靈標樣的加入量，同理論值進行比較，計算回收率。回收率測定試樣數據見表2。可見，苯菌靈的回收率分別為98.80%～100.60%，平均回收率為99.702%。

表2 回收率測定

3 結論

本文采用高效液相色譜儀建立了一種檢測苯菌靈可濕性粉劑有效成分的定量分析方法，其用于測定苯菌靈可濕性粉劑中苯菌靈的含量，能夠有效避免雜質干擾，具有簡便快速、重現性好、準確度高及分離效果好等優點，是檢測苯菌靈加工的制劑中有效成分質量分數的有效檢測方法，適用于此類產品的質量控制和檢測。