姜黃素通過下調(diào)PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路蛋白表達(dá)對胃癌MGC-803 細(xì)胞增殖和侵襲的抑制作用

孫逸飛, 李迪諾, 王玉彬

（1.錦州醫(yī)科大學(xué)研究生院，遼寧 錦州 121000；2.錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外胃腸科，遼寧 錦州 121000）

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞株、主要試劑和儀器32 只SPF 級(jí)雄性BALB/c 小鼠（5～6 周齡），購自遼寧長生生物有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2012-0001。胃癌細(xì)胞株MGC-803 購于中國科學(xué)院細(xì)胞庫。姜黃素購于美國Sigma 公司，溶解于1% 羧甲基纖維素鈉分別配成含10、20 和40 μmol·L－1的混懸液備用。一步法TUNEL 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、增強(qiáng)型CCK-8 試劑盒、磷酸化PI3K（phosphorylated PI3K，p-PI3K）、磷酸化Akt（phosphorylated Akt，p-Akt）和 磷 酸 化mTOR（phosphorylated mTOR，p-mTOR）一抗及酶標(biāo)二抗均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，蛋白質(zhì)定量試劑盒（BCA 法）購自北京普利萊基因技術(shù)有限公司，ECL-Plus 熒光檢測試劑購自北京索萊寶科技有限公司。石蠟包埋機(jī)（型號(hào)：TKY-BMB）購自上海寰熙醫(yī)療器械有限公司，切片機(jī)（型號(hào)：DK-2268-Ⅵ）和熒光顯微鏡（型號(hào)：PLJ-131）購自北京世紀(jì)科信科學(xué)儀器有限公司），酶標(biāo)儀（型號(hào)：EXL808）購自美國Bio-RAD 公司，CO2培養(yǎng)箱（型號(hào)：371 型）購自美國Thermo Fisher Scientific公司。

1.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組胃癌MGC-803 細(xì)胞接種于RPMI 1640培養(yǎng)基（含10%胎牛血清、100 U·mL－1青霉素和鏈霉素）中，置于恒溫37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到85%以上進(jìn)行傳代培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為對照組、低劑量（10 μmol·L－1）姜黃素組、中 劑 量（20 μmol·L－1）姜 黃 素 組 和 高 劑 量（40 μmol·L－1）姜黃素組。

1.3 小鼠皮下移植瘤的制備及給藥處理將32 只小鼠隨機(jī)分為對照組、低劑量姜黃素組（0.5 mg·kg－1姜黃素）、中劑量姜黃素組（1 mg·kg－1姜黃素）和高劑量姜黃素組（2 mg·kg－1姜黃素），每組8 只。各組小鼠皮下注射5×105個(gè)胃癌MGC-803 細(xì)胞，待腫瘤體積達(dá)到100 mm3時(shí)視為造模成功，進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。……