抗核蛋白體100、抗糖蛋白210聯合線粒體2型抗體檢測在原發性膽汁性膽管炎診斷中的應用研究

王 丹，裴 兵

（宿遷市第一人民醫院醫學檢驗科，江蘇 宿遷 223800）

原發性膽汁性膽管炎（PBC）屬于自身免疫性疾病，以肝內膽汁淤積、肝內小膽管進行性炎癥損傷等為特征，可誘發乏力、瘙癢，若不及時治療，還可進展為膽汁性肝硬化，甚至肝衰竭[1-2]。但PBC起病較為隱匿，加之發展緩慢，早期癥狀缺乏典型性，使得疾病診斷難度較大[3-4]。肝穿刺為PBC診斷的金標準，但其創傷較大，早期患者接受度低。而PBC發病過程中血液循環內可出現與疾病相關的自身抗體，通過檢測該類抗體變化能夠一定程度上輔助疾病早期診斷，且操作簡單、取材便捷、無創傷。抗核蛋白體100（抗sp100）、抗糖蛋白210（抗gp210）、線粒體2型（AMA-2）抗體則為診斷PBC的常見抗體，當疾病發生后可釋放進入血液循環，易被臨床檢出，但單一檢測在敏感度、準確度方面仍未能達到臨床滿意效果[5-6]。鑒于此，本研究分析抗sp100、抗gp210聯合AMA-M2抗體檢測在PBC診斷中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2022年1月至6月宿遷市第一人民醫院收治的112例疑似PBC患者作為研究對象。其中男性61例，女性51例；年齡35～70歲，平均年齡（54.56±6.19）歲；身體質量指數18～29 kg/m2，平均身體質量指數（23.69±1.82）kg/m2。本研究經宿遷市第一人民醫院醫學倫理委員會批準，患者及家屬簽署知情同意書。納入標準：①均存在乏力、瘙癢或黃疸等表現；②精神狀態正常；③均行自身抗體檢測。排除標準：①既往明確PBC診斷；②合并惡性腫瘤；③存在肝移植手術；④存在長期酗酒史。

1.2 檢測方法所有入選患者均于清晨空腹狀態下采集5 mL靜脈血，以3 000 r/min速度離心5 min，取上清液待測。抗sp100、抗gp210、AMA-M2抗體以免疫印跡法檢測，均嚴格按照實驗室規范和試劑說明書開展。具體操作如下：①將反應膜條置于反應盤內，將1 mL配好的樣本緩沖液加至反應盤的槽內，完全浸潤膜條后棄去；②將血清按照1∶100稀釋后待測，取1 mL加入反應槽內，先于搖床內溫育30 min，倒掉槽內液體；③以洗滌緩沖液清洗膜條，沖洗3次，并在搖床晃動，5 min/次；④將1 mL的酶結合物加入反應槽內，溫育30 min后，將槽內液體去除；⑤再以洗滌緩沖液清洗3次，5 min/次；⑥于反應槽內加入1 mL酶底物，室溫下搖床輕晃10 min，倒掉酶底物；⑦使用蒸餾水清洗1 min后倒掉；⑧加入1 mL終止液，在搖床上溫育5 min，輕晃終止酶反應；⑨用濾紙將反應膜條上水分吸干后進行判定，肉眼可見條帶位置存在著色均勻、清晰可見顏色且顯色程度超過臨界值（CUTOFF）線，結果判定為陽性。聯合檢測中任意1項陽性即為聯合檢測陽性，并以肝穿刺為金標準分析診斷結果。

1.3 觀察指標①比較抗sp100、抗gp210、AMA-M2抗體單獨檢測及聯合檢測陽性率。②診斷效能：以肝穿刺為金標準，分析抗體單獨檢測及聯合檢測PBC的敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值；敏感度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%，特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）×100%，準確度=（真陽性+真陰性）/（真陽性+真陰性+假陽性+假陰性）×100%，陽性預測值=真陽性/（真陽性+假陽性）×100%，陰性預測值=真陰性/（真陰性+假陰性）×100%。③一致性分析：采用kappa檢驗分析抗體單獨檢測及聯合檢測診斷PBC與手術病理的一致性。

1.4 統計學分析采用SPSS 22.0統計學軟件分析數據，計數資料以[例(%)]表示，用χ2檢驗；計量資料以(±s)表示，用t檢驗；一致性采用kappa檢驗（kappa＞0.75表明一致性極好，0.4～0.75表明一致性尚可，＜0.4表明一致性差）；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 抗sp100、抗gp210聯合AMA-M2抗體陽性率112例疑似患者經肝穿刺確診為PBC患者68例，其中抗SP100陽性28例，抗gp210陽性29例，AMA-M2抗體陽性58例，聯合檢測陽性67例，見表1。

表1 抗sp100、抗gp210聯合AMA-M2抗體陽性率

2.2 診斷效能聯合檢測敏感度、準確度、陰性預測值高于抗sp100、抗gp210、AMA-M2抗體單一檢測，AMA-M2抗體敏感度、準確度、陰性預測值高于抗sp100、抗gp210，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表2。

表2 診斷效能（%）

2.3 一致性分析kappa檢驗顯示，抗sp100與肝穿刺結果一致性差（kappa值=0.323，P＜0.001）；抗gp210與肝穿刺結果一致性差（kappa值=0.336，P＜0.001）；AMA-M2抗體與肝穿刺結果一致性尚可（kappa值=0.748，P＜0.001）；聯合檢測與肝穿刺結果一致性極好（kappa值=0.944，P＜0.001）。

3 討論

PBC病因復雜，臨床認為與遺傳、環境、免疫系統紊亂等相關，多因素長期相互作用，可促使免疫系統紊亂，且細胞介導的攻擊源會損傷黏膜組織，增加黏膜通透性，并誘發局部持續炎癥反應，隨著病程的發展大量炎癥因子侵犯并滲透至中小膽管上皮，使得膽管破壞[7-8]。而膽管組織穩態缺失后，可造成膽汁排泄障礙，形成肝內膽汁淤積，且該病理變化過程中細胞外基質可持續沉積，加速周圍組織纖維化進展，若不及時治療，肝臟可逐漸纖維化，并最終向肝硬化及肝衰竭發展，直接威脅患者生命[9-10]。臨床對于PBC多以早確診、早治療為原則，以避免病情持續進展，減輕肝功能損害。但PBC早期發病隱匿性強，不易被臨床察覺，導致漏診發生，影響遠期預后，故還需尋找更為安全、準確的早期診斷方式。

肝穿刺為當前診斷PBC的金標準，通過肝活檢獲得組織標本，能夠及時明確肝臟病變情況，為臨床早期治療提供重要參考。但該方式對機體造成的創傷較大，不適合作為常規檢查開展。而血清學檢測具有操作簡單、安全性高、可重復性強等優勢，通過采集靜脈血即可開展一系列檢測工作，不僅取材方便，且出結果快，能夠為早期明確PBC病情提供必要信息。但常規血清谷氨酰轉肽酶、堿性磷酸酶等診斷效果欠佳，還需尋找更為準確的血清檢測指標。而隨著臨床深入研究發現，不同類型的自身免疫性肝病均存在不同特征的自身抗體，當疾病發生后可于血液循環內檢出相關抗體陽性，故自身抗體的檢測在PBC診斷中尤為重要。本研究結果顯示，聯合檢測敏感度、準確度、陰性預測值高于抗sp100、抗gp210、AMA-M2抗體單一檢測，AMA-M2抗體敏感度、準確度、陰性預測值高于抗sp100、抗gp210；kappa檢驗顯示，抗sp100與肝穿刺結果一致性差（kappa值=0.323）；抗gp210與肝穿刺結果一致性差（kappa值=0.336）；AMA-M2抗體與肝穿刺結果一致性尚可（kappa值=0.748）；聯合檢測與肝穿刺結果一致性極好（kappa值=0.944）。上述結果提示抗sp100、抗gp210聯合AMA-M2抗體檢測在PBC診斷中價值更高，能夠提高診斷敏感度、準確度，降低漏診、誤診風險，以便于臨床盡早開展針對性治療。其原因為，抗sp100、抗gp210、AMA-M2抗體為PBC發病過程中產生的重要抗體，其中抗sp100屬于抗核抗體，其靶抗原為可溶性酸性磷酸化核蛋白，當PBC發生后，可于血液內檢出，也可在其他自身免疫性疾病患者中少量檢出，但在其他肝病中為陰性，故在PBC診斷方面具有較高的特異度，但抗sp100單一檢測陽性率較低[11]。抗gp210則為核孔膜糖蛋白抗體，在PBC診斷中具有較高特異度，其靶抗原位于核孔復合物上210kD跨膜糖蛋白，炎癥反應持續作用可觸發免疫系統或潛在的分子模擬誘導抗gp210生成，使得血清內可檢測出陽性[12-13]。與抗sp100相同的是，抗gp210也存在高特異度、低敏感度特點，單一應用陽性率低。AMA-M2抗體則為PBC診斷的特異性抗體，PBC病理過程中則以循環血液內出現抗線粒體抗體為特征，病理變化過程中可誘導AMA-M2抗體大量生成，故血液內陽性檢出率較高，但AMA-M2抗體單用仍存在一定漏診風險[14-15]。而抗sp100、抗gp210不僅能夠在AMA-M2抗體陽性患者中存在表達，在AMA-M2抗體陰性患者中亦可存在表達，故抗sp100、抗gp210、AMA-M2抗體聯合檢測可以優勢互補，彌補單一檢測敏感度、特異度不足等缺點，進一步提高診斷效能，最大限度降低漏診、誤診風險，為臨床早期治療工作開展提供重要指導。

綜上所述，抗sp100、抗gp210聯合AMA-M2抗體檢測可提高PBC診斷敏感度、準確度，減少疾病漏診的發生，以便于盡早采取針對性治療，有效阻止疾病進展，改善患者預后。