一株禽流感（H9 亞型）病毒細胞毒與雞胚毒的免疫效力對比試驗

郭林濤，閆紅濤

（河北省館陶縣農業農村局，河北 邯鄲 056000）

為了解禽流感（H9 亞型）病毒雞胚毒接種獲得的細胞毒抗原與雞胚毒抗原免疫效力的差異，本試驗分別采用禽流感（H9 亞型）病毒HA效價≥1∶256 或病毒含量≥107.5EID50/0.1 毫升的細胞毒抗原和禽流感（H9 亞型）病毒雞胚毒抗原制備成兩批滅活疫苗，分別免疫SPF 雞，進行免疫效力比較試驗。對比試驗結果顯示，禽流感（H9 亞型）病毒細胞毒滅活疫苗與禽流感（H9 亞型）病毒雞胚毒滅活疫苗免疫SPF 雞后HI 抗體效價均高于雞新城疫、禽流感（H9 亞型）二聯滅活疫苗禽流感部分質量標準，且兩者免疫效力無顯著差異。禽流感（H9 亞型）病毒細胞毒與禽流感（H9 亞型）病毒雞胚毒的免疫效力對比試驗證明了，禽流感（H9 亞型）病毒雞胚毒接種MDCK 細胞繁殖的細胞毒，沒有改變毒株本身的特性，保持了毒株較好的免疫原性，能夠用于本制品的研究；禽流感（H9 亞型）病毒HA 效價≥1∶256 或病毒含量≥107.5EID50/0.1 毫升的細胞毒，制備的滅活疫苗均合格。

1 材料

1.1 制苗用種毒、細胞

1.1.1 種毒

禽流感（H9 亞型）病毒雞胚毒，E5 和E7 代，由河北農業大學繁殖傳代。

1.1.2 生產種毒

禽流感（H9 亞型）病毒雞胚毒。

1.1.3 生產種細胞

全懸浮MDCK 細胞由河北農業大學實驗室制備。

1.2 主要試劑

1.2.1 診斷試劑

禽流感病毒H9 亞型血凝抑制試驗抗原及禽流感病毒H9 亞型陽性血清，來源于哈爾濱維科生物技術開發公司。

1.2.2 MDCK 全懸浮無血清培養基

MS01 無血清培養基來源于蘇州沃美生物技術有限公司，產品批號41241701。

1.2.3 制苗用油相

來源于河南通商進出口有限公司，批號：701195。

1.3 試驗動物

SPF 雞胚和SPF 雞均來源于北京勃林格殷格翰維通生物技術有限公司。

1.4 高剪切分散乳化機

型號：FA25；生產廠家：上海弗魯克科技發展有限公司。

2 方法

2.1 疫苗的配制

2.1.1 細胞毒滅活疫苗制備

使用禽流感（H9 亞型）病毒E5 和E7 代雞胚毒，接種MDCK 細胞，繁殖得到2 批禽流感（H9 亞型）病毒細胞病毒液，HA 效價均為1∶256，病毒含量分別為107.68EID50/0.1 毫升、107.5EID50/0.1 毫升。兩批細胞毒抗原滅活后，按照油相∶水相=2∶1 的比例，分別配制成兩批滅活疫苗。

2.1.2 雞胚毒滅活疫苗的制備

使用禽流感（H9 亞型）病毒E5 和E7 代雞胚毒，接種SPF 雞胚，繁殖得到禽流感（H9 亞型）病毒雞胚毒，HA 效價均為1∶256，病毒含量分別為108.5EID50/0.1 毫升、108.68EID50/0.1 毫升。兩批雞胚毒抗原滅活后，按照油相∶水相=2∶1 的比例，分別配制成兩批滅活疫苗。

2.2 分組與免疫

使用45 只雞，四組疫苗分別免疫10 只，每只雞頸部皮下注射疫苗0.3 毫升。另5 只SPF雞，不接種作為對照，同等條件下隔離飼養。免疫21 日后。連同對照雞5 只分別采血，分離血清，按現行《中國獸藥典》三部附錄3404 測定各組血清HI 抗體效價。

3 結果

3.1 將HA 血凝價均為1∶256 的兩批禽流感（H9 亞型）病毒細胞毒配制疫苗，免疫SPF 雞產生的HI 平均抗體滴度分別為1∶588 （9.2log2）和1∶676（9.4log2）。因此，免疫后雞新城疫HI 抗體水平遠高于雞新城疫、禽流感（H9 亞型）二聯滅活疫苗禽流感部分質量標準要求（HI 不低于1∶64）。不免疫對照組HI 抗體均不高于1∶4 （見表）。

3.2 將HA 血凝價均為1∶256 的禽流感（H9亞型）病毒雞胚毒配制疫苗，免疫SPF 雞產生的HI 平均抗體效價分別達到1∶724（9.5log2）和1∶832（9.7log2）；因此，免疫后抗體水平遠高于雞新城疫、禽流感（H9 亞型）二聯滅活疫苗禽流感部分質量標準要求（HI 不低于1∶64）。不免疫對照組HI 抗體均不高于1∶4（見下表）。

通過對比試驗，表明禽流感（H9 亞型）病毒細胞毒HA 效價1∶256 或病毒含量為107.5EID50/0.1 毫升，均可達到雞新城疫、禽流感（H9 亞型）二聯滅活疫苗制苗的標準。兩批細胞毒配制的疫苗，免疫SPF 雞后，抗體效價與兩批雞胚毒配制的疫苗效力相當，且四組疫苗免疫SPF 雞后抗體效價均遠高于雞新城疫、禽流感（H9 亞型）二聯滅活疫苗禽流感部分質量標準。因此，禽流感（H9 亞型）病毒細胞毒HA 效價1∶256 或病毒含量為107.5EID50/0.1 毫升均可用于制苗。

4 結論

綜上所述，通過禽流感（H9 亞型）病毒細胞源與雞胚源病毒液的免疫效力對比試驗，禽流感細胞源滅活疫苗接種SPF 雞可以獲得與禽流感雞胚源病毒滅活疫苗相近的抗體效價，兩者具有相同的免疫效力。禽流感（H9 亞型）病毒細胞毒與雞胚毒的免疫效力對比試驗證明了，禽流感病毒雞胚接種MDCK 細胞，制備的細胞毒，沒有改變毒株本身的特性，保持了毒株較好的免疫原性，能夠用于本制品的研究；禽流感（H9亞型）病毒HA 效價不低于1∶256 或病毒含量≥107.5EID50/0.1 毫升的細胞毒，制備的滅活疫苗均合格。

不同抗原制備的禽流感疫苗免疫后HI 抗體