超聲引導瘤區注射高聚生協同微波凝固治療對肝癌患者局部細胞免疫的影響

董 威，武凌云

（秭歸縣中醫醫院，湖北 秭歸 443600）

肝癌作為臨床上常見的一種惡性腫瘤，其發病與肝硬化、病毒性肝炎、環境等因素有關[1]。近年來，超聲及介入技術被廣泛應用于肝癌患者的治療中，其中超聲引導下微波凝固治療較為常用，可使肝癌患者的5 年病情復發率降至40% 以下[2]。超聲引導下微波凝固治療尤其適用于治療小肝癌，可使患者的5 年生存率達到80% 左右。超聲引導下微波凝固治療的療效與肝癌根治性手術相當，且具有能實現監控微波熱場的優勢，可有效凝固肝癌病灶，促使其壞死。治療后，患者局部的淋巴細胞表達明顯升高，表明肝癌患者采用超聲引導下微波凝固治療具有一定預防腫瘤復發的作用[3]。為了進一步保障超聲引導下微波凝固治療的抗腫瘤及預防腫瘤復發的作用，本次研究聯用了局部瘤區注射高聚生的治療方式。高聚生作為一種生物制劑，是從金黃色葡萄球菌代謝產物中提取制成，可抑制腫瘤細胞活性，修復損傷組織和細胞，對提高機體免疫力有積極的促進作用[4]。本文以我院收治的86 例肝癌患者為研究對象，對其進行分組對照研究，旨在探討超聲引導瘤區注射高聚生協同微波凝固治療對肝癌患者局部細胞免疫的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象為我院于2021 年2 月至2022 年2 月期間收治的肝癌患者86 例。以治療方式的差異作為分組原則，將其中單純行超聲引導下微波凝固治療的43例肝癌患者設為對比組，將其中行超聲引導瘤區注射高聚生協同微波凝固治療的43 例肝癌患者設為試驗組。對比組中，有男性患者23 例，女性患者20 例；年齡40 ～69 歲，平均年齡（56.19±2.17）歲；病程2 ～5年，平均病程（4.05±0.85）年；腫瘤直徑2.0 ～6.5 cm，平均腫瘤直徑（4.21±0.43）cm；腫瘤分化程度分布：低分化、中分化、高分化患者分別有10 例、25 例、8 例。試驗組中，有男性患者22 例，女性患者21 例；年齡41 ～69 歲，平均年齡（56.26±2.09）歲；病程3 ～5年，平均病程（4.48±0.80）年；腫瘤直徑2.2 ～6.6 cm，平均腫瘤直徑（4.68±0.41）cm；腫瘤分化程度分布：低分化、中分化、高分化患者分別有12 例、22 例、9 例。兩組上述一般資料對比，P＞0.05。

1.2 納入及排除標準

納入標準：1）經病理學檢查確診為原發性肝癌。2）肝癌CNLC 分期為Ⅰa 期，部分患者為Ⅰb 期。3）Child-Pugh 分級為A 級、B 級。4）臨床資料完整且能接受隨訪。排除標準：1）經病理學檢查證實患繼發性肝癌。2）合并其他類型惡性腫瘤。3）合并免疫缺陷性疾病或血液系統疾病。4）臨床資料缺失或拒絕隨訪。

1.3 治療方法

對對比組43 例患者行超聲引導下微波凝固治療，在此基礎上，對試驗組43 例患者行超聲引導瘤區注射高聚生協同治療。使用的儀器及設備：超聲引導微波凝固治療儀、絕緣微波輻射天線、穿刺引導針、半導熱敏電阻測溫針。設置超聲引導微波凝固治療儀的各項治療參數，微波頻率：2450 MHz，微波輸出功率：40 ～75 W。治療前，經腹部超聲檢查明確癌灶的相關情況，包括癌灶大小、具體位置、內部血流情況及與周圍組織的關系等，據此制定微波凝固治療方案（治療時間、絕緣微波輻射天線入路方式、各項參數、進針方式等）。超聲引導下微波凝固治療方法：確定穿刺部位后，常規消毒鋪巾、局部麻醉，超聲引導下穿刺。置入穿刺引導針，抽出內芯，將微波天線置入，并撤出部分穿刺引導針，使微波天線顯露出來。將半導熱敏電阻測溫針置于目標病灶周圍5 mm 處（治療性測溫）、重要臟器邊緣（保護性測溫）。靜脈麻醉成功后，對存在滋養血管的目標病灶先實施微波損毀后給予微波凝固（時間5 ～10 min）。微波治療后，若確定腫瘤壞死，則3 周后先對試驗組行試驗性高聚生肌內注射，注射時間為3 d，注射量分別為500 U、1000 U、2000 U。注射后若患者未出現任何過敏反應，則于高聚生肌內注射后的第3 d、第7 d、1 個月、3 個月及6 個月時，分別行超聲引導瘤區注射高聚生協同治療。治療時體位選取仰臥位或側臥位（左側肢體在上），超聲引導下選擇穿刺點，麻醉方式為局部浸潤麻醉，將引導針置于皮下，將介入穿刺針置于目標病灶中心處，緩慢輸注2000 U 高聚生。

1.4 免疫組化檢查方法

分別于治療前后經肝穿刺活檢取標本，方法：超聲引導下選擇穿刺點，穿刺部位常規消毒、鋪巾，局部浸潤麻醉，取小切口（長度2 mm），在超聲探頭的引導下，采用穿刺活檢槍取出組織條（1 mm×19 mm），其中腫瘤組織和周圍正常組織各占50%。活檢組織常規行福爾馬林固定、脫水、透明、石蠟處理后，行免疫組化染色，對局部免疫細胞浸潤、分布情況進行觀察。組織切片完成染色處理后，切片常規行緩沖液沖洗、脫水、浸泡、包埋處理，制成超薄切片，雙重染色。鏡下觀察測量窗內陽性細胞（免疫細胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+）浸潤情況，陽性細胞判定標準：細胞相應部位有棕色顆粒出現。了解單位面積內陽性細胞抗原的表達量，記錄浸潤密度值，以mm2為單位。一個組織標本取10 個視野，10 個視野陽性細胞數平均值為該標本中的陽性細胞數。每個標本測10 個測量窗口，計算平均值作為面密度。

1.5 觀察指標

1）對比兩組治療前后組織標本中免疫細胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+的浸潤密度值。2）治療后1 年，統計兩組病情復發情況，檢測血清異常凝血酶原（PIVKA- Ⅱ）和甲胎蛋白（AFP）水平。取兩組空腹血液樣本，經離心處理（4000 r/min，5 min）獲得血清，檢測血清中PIVKA- Ⅱ、AFP 的濃度，檢測方法為化學發光免疫分析法，嚴格按照檢測試劑盒說明書進行操作。

1.6 統計學分析

用SPSS 19.0 統計學軟件進行數據分析，繪制樣本數據直方圖，采用正態性檢驗，資料滿足正態分布。計量資料以±s表示，行t檢驗，計數資料以百分比（%）表示，行卡方（χ2）檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組治療前后組織標本中免疫細胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+浸潤密度值的對比

治療前，兩組組織標本中免疫細胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+的浸潤密度值對比，P＞0.05。治療后，兩組組織標本中免疫細胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+的浸潤密度值均高于治療前，P＜0.05；試驗組組織標本中免疫細胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+的浸潤密度值均高于對比組，P＜0.05。詳見表1。

表1 兩組治療前后組織標本中免疫細胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+浸潤密度值的對比（mm2，± s）

表1 兩組治療前后組織標本中免疫細胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+浸潤密度值的對比（mm2，± s）

組別 時間 CD3+CD4+CD8+CD57+對比組（n=43）治療前 14.25±2.19 9.25±1.03 5.63±0.64 14.23±2.36治療后 31.36±3.54 15.31±1.54 15.32±1.30 26.32±2.47試驗組（n=43）治療前 14.31±2.05 9.30±0.98 5.65±0.59 14.30±2.31治療后 48.62±5.34 18.20±1.32 19.21±1.53 40.39±3.01t值/P值（對比組治療前后比較）26.953/＜0.001 21.449/＜0.001 43.852/＜0.001 23.207/＜0.001t值/P值（試驗組治療前后比較）39.333/＜0.001 35.499/＜0.001 54.225/＜0.001 45.090/＜0.001t值/P值（組間治療后比較）17.666/＜0.001 9.343/＜0.001 12.705/＜0.001 23.695/＜0.001

2.2 兩組治療后1 年病情復發率及血清PIVKA-Ⅱ、AFP 水平的對比

治療后1 年，兩組血清PIVKA- Ⅱ、AFP 的水平對比，試驗組均低于對比組，P＜0.05。詳見表2。治療后1 年，對比組、試驗組的病情復發率分別為58.14%（25/43）、34.88%（15/43），二 者 相 比，χ2=4.674，P=0.031。

表2 兩組治療后血清PIVKA-Ⅱ、AFP 水平的對比（± s）

表2 兩組治療后血清PIVKA-Ⅱ、AFP 水平的對比（± s）

組別 血清PIVKA-Ⅱ（mAU/mL）血清AFP（ng/mL）對比組（n=43）53.58±3.38 8.35±0.98試驗組（n=43）20.32±2.14 5.65±1.06t值 54.518 12.264P值 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

肝癌患者以肝區疼痛為首發癥狀。導致肝區疼痛出現的原因是腫瘤生長速度較快，肝包膜張力隨著腫瘤的增大而增加[5]。此外，肝癌患者還可出現乏力、消瘦、腹脹、食欲下降等癥狀，若疾病進展至晚期，還可表現為貧血、腹水、水腫等惡病質[6]。臨床上對肝癌患者主要進行肝切除治療。研究發現，經肝切除治療后，肝癌患者的5 年病情復發率超過60%[7]。術后1 ～2 年為肝癌患者病情復發的高峰期，原因在于進行肝切除手術可在一定程度上促進殘留癌灶的生長，且若將肝大部分切除可引發免疫功能低下，從而促使患者的病情復發[8]。20 世紀70 年代，微波技術開始應用于臨床，主要用于止血、組織切割等領域[9]。近年來隨著超聲診斷技術的不斷進步，微波療法在肝癌治療中的應用越來越廣泛，超聲引導下微波凝固治療已被廣泛應用于肝癌的治療中[10]。研究發現，人體組織細胞內外液中包含多種極性分子，如水、離子、蛋白質等[11]。對肝癌患者進行微波凝固治療時，微波可產生交變電場，細胞內外液中的極性分子可因振動或摩擦而產生熱量，從而使微波凝固治療相較于其他類型的局部介入治療在熱效率、凝固范圍等方面更具優勢[12]。微波凝固治療的頻率為2450 MHz 左右，微波電極可接收到經同軸電纜傳導的高頻能量，產生的熱效應可起到理想的促進組織凝結的作用。治療期間，引導針可與瘤體接觸，有效傳導微波能量。在行局部微波凝固治療時，應確保整個瘤體覆蓋于微波凝固范圍內，這屬于該介入手術的難點。對于直徑＜3 cm 的瘤體，微波凝固治療期間可采用單電極；對于直徑＞3 cm 的瘤體，微波凝固治療期間應采用雙電極[13-14]。有研究表明，行微波凝固治療的肝癌患者在局部病灶壞死的同時，還可明顯提高此處淋巴細胞的表達水平，說明此療法具有理想的抗腫瘤作用[15]。為了解決肝癌患者微波凝固治療后病情復發率高的問題，目前臨床上常在微波凝固治療后聯用高聚生瘤體注射法。研究發現，細胞免疫功能降低是導致肝癌患者病情復發的重要誘因。高聚生是一種高科技生物制劑，屬于惡性腫瘤超抗原生物制劑，在發揮抗腫瘤作用的同時，還可提高機體的免疫功能[16]。大量動物實驗證實，高聚生可有效激活免疫細胞，并促使免疫細胞增殖、釋放多種細胞因子，增強細胞毒性作用，提高機體的免疫功能。

本研究結果證實，肝癌患者行超聲引導瘤區注射高聚生協同微波凝固治療的效果較理想，可有效增強局部細胞免疫功能，并可降低患者的病情復發率。