徐全飛 牛 宇 聶建軍 蒙秋霞 馮婉君 李彩萍 潘保華

（1 山西農(nóng)業(yè)大學農(nóng)業(yè)經(jīng)濟管理學院，山西太原 030006；2山西農(nóng)業(yè)大學資源環(huán)境學院，山西太原 030031）

毛木耳Auricularia polytricha，屬木耳科Auriculariaceac，木耳屬Auricularia[1-2]，俗稱構(gòu)耳、黃背木耳、白背木耳。毛木耳質(zhì)地脆滑，清新爽口，具有很高的食用及藥用價值[3-5]，也是我國栽培的主要食用菌品種之一[6-8]。

野生毛木耳在夏、秋季生長在櫟、柳、槐等多種闊葉樹倒木或樹樁上，單生、群生或叢生[2，9-10]。筆者于2020 年6 月中旬在山西省汾西縣姑射山櫟樹的倒木上采集到一株野生毛木耳菌株，該菌株子實體較大，初期呈碗狀，后耳片伸展為耳狀，腹面紅褐色，背面灰白色，絨毛較長且密集，干后棕褐色至黑色，強烈收縮呈硬而脆的角質(zhì)至近革質(zhì)（圖1）。筆者通過考察該菌株菌絲生長速度、菌絲長勢，篩選母種培養(yǎng)基最佳碳源、氮源、pH 及菌絲最適宜生長溫度，旨在為該菌株馴化栽培提供數(shù)據(jù)支撐。

圖1 野生毛木耳子實體

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）供試菌株

供試毛木耳菌株采自山西省汾西縣姑射山，采用耳（菇）木分離法[2，11-12]，取生長健壯，無病蟲害、腐朽程度較輕的子實體，鋸成1～3 cm 厚的木塊，在超凈工作臺上，將耳木在酒精燈外焰灼燒幾次，殺滅耳木表面部分雜菌，再用手術(shù)刀將木塊劃開，取中間長有菌絲長0.3～0.5 cm 的木芯，移接至PDA 試管培養(yǎng)基上，接種后將試管放入25 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，暗光培養(yǎng)5～7 d 后，挑取色澤潔白、長勢強的菌絲轉(zhuǎn)接到PDA 培養(yǎng)基上純化培養(yǎng)[13-15]，將純化菌種作為供試菌株。

（2）供試培養(yǎng)基

耳木分離培養(yǎng)基采用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯20%，葡萄糖2%，瓊脂粉2%，pH自然。

菌種活化培養(yǎng)基采用馬鈴薯綜合培養(yǎng)基（CPDA）：馬鈴薯20%，葡萄糖2%，KH2PO40.3%，MgSO4·7H2O 0.15%，瓊脂2%。

碳源試驗培養(yǎng)基：供試碳源分別為葡萄糖、可溶性淀粉、麥芽糖、乳糖、甘露醇、蔗糖、空白（對照），質(zhì)量分數(shù)均為2%，培養(yǎng)基其他成分均為蛋白胨0.5%，KH2PO40.3%，MgSO4·7 H2O 0.15%，瓊脂2%。

氮源試驗培養(yǎng)基：供試氮源分別為蛋白胨、麩皮、硝酸銨、酵母粉、尿素、空白（對照），質(zhì)量分數(shù)均為0.5%，培養(yǎng)基其他成分均為葡萄糖2%，KH2PO40.3%，MgSO4·7H2O 0.15%，瓊脂2%。

最佳pH 篩選試驗培養(yǎng)基：以PDA 為基礎培養(yǎng)基，用1.0 mol/L NaOH 溶液或1.0 mol/L HCl 溶液調(diào)整培養(yǎng)基pH為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌種活化

將試驗毛木耳菌株試管種從菌種保藏箱中取出，25 ℃恒溫放置24 h，將活化后的菌種接于CPDA平皿培養(yǎng)基上，25 ℃恒溫暗光培養(yǎng)至平皿表面接近長滿菌絲[6，16]備用。

1.2.2 最佳碳源、氮源及pH篩選試驗

無菌操作，用直徑為5 mm 已滅菌打孔器，從菌種培養(yǎng)皿中截取菌絲長勢一致活化的毛木耳菌種，分別接種于不同碳源、氮源及pH 供試培養(yǎng)基平皿中心。置25 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)暗光培養(yǎng)，3 d 后菌絲已經(jīng)萌發(fā)生長，采用十字劃線法測量菌落直徑[17]，記錄菌絲形態(tài)和長勢，連續(xù)觀察記錄，測定8 d。每個處理重復3次，取平均值。

菌絲日均生長速度（mm/d）=[（菌落直徑-5）/2]/培養(yǎng)天數(shù)

1.2.3 最適生長溫度試驗

將活化毛木耳菌種接于PDA 培養(yǎng)基內(nèi)，分別置5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃暗光培養(yǎng)。菌絲觀察測定方法同1.2.2，每個處理重復3次，取平均值。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析采用WPS 和SPSS，采用Duncan 新復極差法多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)基最適碳源篩選結(jié)果

以碳源空白為對照，供試碳源對野生毛木耳菌絲生長的影響見表1。由表1可知，野生毛木耳菌株在供試碳源培養(yǎng)基上，菌絲形態(tài)、色澤、生長勢、菌落邊緣形態(tài)及生長速度都有所不同，以葡萄糖為碳源時野生毛木耳菌絲潔白、生長勢強，菌落邊緣整齊，平均生長速度最快，為5.53 mm/d，與其他供試碳源差異極顯著；以乳糖或甘露醇為碳源時，菌絲生長速度較快，同時乳糖為碳源時菌絲生長勢強，有氣生菌絲；以可溶性淀粉、麥芽糖、蔗糖為碳源時，菌絲生長速度一般，以可溶性淀粉為碳源時，菌絲致密、潔白、生長勢強。綜合比較，葡萄糖為野生毛木耳母種培養(yǎng)基的最佳碳源。

表1 供試碳源培養(yǎng)基中野生毛木耳菌絲生長狀態(tài)比較

2.2 培養(yǎng)基最適氮源篩選結(jié)果

以氮源空白為對照，供試氮源對野生毛木耳菌絲生長的影響見表2。由表2可知，野生毛木耳菌株在供試氮源培養(yǎng)基上，菌絲形態(tài)、色澤、生長勢、菌落邊緣形態(tài)及生長速度都有所不同。以蛋白胨、酵母粉為氮源時，菌絲潔白、生長勢強，菌落邊緣整齊，平均生長速度最快，分別為4.97 mm/d、5.03 mm/d，且兩者差異不顯著，但與其他氮源差異極顯著；以硝酸銨、尿素為氮源或氮源空白時，菌絲灰白、稀疏、生長勢弱，其中以尿素為氮源時，只有少量菌絲萌發(fā)。綜合比較，蛋白胨或酵母粉為野生毛木耳母種培養(yǎng)基的最佳氮源。

表2 供試氮源培養(yǎng)基中野生毛木耳菌絲生長狀態(tài)比較

圖2 6種碳源、碳源空白（對照）培養(yǎng)基上野生毛木耳菌株菌絲生長狀態(tài)

圖3 5種氮源、氮源空白（對照）培養(yǎng)基上野生毛木耳菌絲生長狀態(tài)

2.3 培養(yǎng)基最適pH篩選結(jié)果

由圖4 可知，培養(yǎng)基pH 為4、6、8 時，野生毛木耳菌絲生長速度較快，pH≤3 或pH≥9 不適宜該菌株生長，pH 為5、6、7 時，該菌株菌絲生長速度最快，且三者間差異不顯著，但與其他pH 差異顯著，因此培養(yǎng)基pH 5～7最適宜該菌株生長。

圖4 試驗（培養(yǎng)基）pH野生毛木耳菌絲生長速度比較

2.4 最適培養(yǎng)溫度篩選結(jié)果

由圖5可知，培養(yǎng)溫度對野生毛木耳菌株的菌絲生長速度影響較大，當培養(yǎng)溫度為5 ℃時，菌絲幾乎不生長；溫度15 ℃以下，菌絲生長緩慢；溫度25 ℃，菌絲潔白、生長勢強，生長速度較快；溫度30 ℃菌絲生長速度最快，但菌絲較稀疏；溫度35 ℃，菌絲生長速度變慢，且菌絲生長勢弱，稀疏。綜合比較，該野生毛木耳菌株菌絲生長的適宜溫度為25～30 ℃。

圖5 試驗培養(yǎng)溫度下野生毛木耳菌絲生長速度比較

3 小結(jié)與討論

試驗野生毛木耳菌株在供試碳源培養(yǎng)基中均能較快生長，綜合評價最佳碳源是葡萄糖，與王慶武等[18]研究結(jié)果不同，這可能與所用毛木耳菌株有關。培養(yǎng)基氮源試驗表明，最佳氮源為蛋白胨或酵母粉，尿素明顯地抑制該菌株菌絲生長勢和生長速度，原因可能是尿素在高溫滅菌的過程中，產(chǎn)生了氨氣，影響了菌絲的生長。

供試毛木耳菌株的最適生長溫度為25～30 ℃，菌絲生長勢強，生長速度快，屬于偏高溫型菌株；供試毛木耳菌株生長的培養(yǎng)基最適宜pH為5～7，pH為4～8時，菌絲都能夠較快的生長，pH為9時，該菌株的菌絲也能生長，說明該菌株耐酸和耐堿的能力較強。

綜合得出，適宜該野生毛木耳菌株菌絲生長的培養(yǎng)基最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為蛋白胨或酵母粉，培養(yǎng)基最適宜pH 為5～7，最適宜培養(yǎng)溫度為25～30 ℃。