HPLC 法同時測定參松養心膠囊中5 種成分

王軍民，孔麗宇，黃月昌，丁思宇，韓麗琴*

（1.吉林醫藥學院附屬醫院，吉林 吉林 132011； 2.吉林醫藥學院，吉林 吉林 132013）

參松養心膠囊是以《黃帝內經》 絡病學理論為基礎，用以治療心律失常等心血管類疾病的中成藥［1］，主要由人參、麥冬、山茱萸、丹參等藥材組成，具有通絡疏血、清心安神功效［2］，與傳統西藥聯用療效更佳［3］，并且副作用小［4］。目前，關于參松養心膠囊的研究大多是臨床病例方面［5-8］，而對其化學成分、藥效物質基礎鮮有關注［9-13］。

前期報道，毛蕊異黃酮具有保護心腦血管的作用［14］；槲皮素在治療心血管疾病方面具有重要作用［15］；芍藥苷具有抗心肌缺血的作用，在治療老年慢性呼吸道疾病過程中也能發揮出良好效果［16］；阿魏酸可減少血小板5-羥色胺釋放［17］，廣泛應用于治療心腦血管疾病，并且上述成分也是參松養心膠囊主要活性物質。因此，本實驗建立HPLC 法同時測定參松養心膠囊中綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、槲皮素、毛蕊異黃酮的含量，以期為該制劑質量控制提供參考。

1 材料

1.1 藥物 參松養心膠囊共2 批，批號分別為Z20030058、Z20103032，購自北京以嶺藥業有限公司。

1.2 儀器 LC-20HT 高效液相色譜儀、SPDM20A 電二極管陣列紫外可見光檢測器（230 V）（日本島津公司）；CPA225D 型電子分析天平（德國賽多利斯公司）。

1.3 試劑 阿魏酸（批號B20007，純度98%）、芍藥苷（批號B21148，純度95%）、毛蕊異黃酮（批號B20847，純度98%）、槲皮素（批號B20527，純度98%）、綠原酸（批號B20782，純度96%）對照品均購自上海源葉生物科技有限公司。乙腈為色譜純［賽默飛世爾科技（中國）有限公司］；磷酸為色譜純（遼寧泉瑞試劑有限公司）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相乙腈（A）-0.1%磷酸（B），梯度洗脫，程序見表1；體積流量1.0 mL／min；柱溫30 ℃；檢測波長238 nm；進樣量20 μL。

表1 梯度洗脫程序Tab.1 Gradient elution programs

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取槲皮素、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊異黃酮、綠原酸對照品各1 mg，置于5 mL 量瓶中，少量甲醇超聲溶解后定容，即得（質量濃度分別為10、25、4、50、100、200 μg／mL）。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取本品內容物0.406 5 g，置于磨口錐形瓶中，加入10 mL 甲醇，密塞，稱定質量，在25 ℃下超聲（100 Hz、500 W）處理30 min，冷卻至室溫，甲醇補足減失的質量，12 000 r／min離心5 min，取上清液，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 系統適用性試驗 取對照品、供試品溶液適量，在“2.1” 項色譜條件下進樣測定，結果見圖1。由此可知，各成分分離度均大于1.5，表明該方法系統適用性良好。

圖1 各成分HPLC 色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents

2.3.2 線性關系考察 取“2.2.1” 項下對照品溶液適量，在“2.1” 項色譜條件下進樣測定。以對照品質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行回歸，結果見表2，可知各成分在各自范圍內線性關系良好。

表2 各成分線性關系Tab.2 Linear relationships of various constituents

2.3.3 精密度試驗 取同一份供試品溶液適量，在“2.1” 項色譜條件下進樣測定6 次，測得綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊異黃酮、槲皮素峰面積RSD 分別為1.27%、2.74%、2.31%、2.03%、2.44%，表示儀器精密度良好。

2.3.4 重復性試驗 取同一份供試品溶液6 份，在“2.1” 項色譜條件下進樣測定，測得綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊異黃酮、槲皮素峰面積RSD 分別為1.83%、2.68%、2.08%、2.70%、2.49%，表明該方法重復性良好。

2.3.5 穩定性試驗 取同一份供試品溶液，于0、2、4、6、8、10、12 h 在“2.1” 項色譜條件下各進樣20 μL 測定，測得綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊異黃酮、槲皮素峰面積RSD 分別為0.80%、2.04%、1.27%、1.01%、2.91%，表明溶液在12 h內穩定性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 取本品（批號Z20103032）6 份，每份約0.2 g，精密稱定，加入適量對照品溶液，按“2.2.2” 項下方法制備供試品溶液，在“2.1” 項色譜條件下進樣測定，計算回收率。結果，綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊異黃酮、槲皮素平均加樣回收率分別為95.48%、99.06%、96.92%、95.00%、96.75%，RSD 分別為0.81%、0.47%、1.40%、2.22%、1.72%。

2.3.7 樣品含量測定 取2 批樣品，按“2.2.2”項下方法平行制備6 份供試品溶液，在“2.1” 項色譜條件下進樣測定，計算含量，結果見表3。

表3 各成分含量測定結果（mg／g， n＝6）Tab.3 Result of content determination of various constituents（mg／g， n＝6）

3 討論

3.1 檢測波長選擇 本實驗采用光電二極管陣列紫外可見光檢測器，在210～400 nm 波長處進行掃描。結果，毛蕊異黃酮在254、230 nm，芍藥苷在238 nm，槲皮素、綠原酸在220、334 nm，阿魏酸在322 nm 處均有最大吸收。為了保證各成分均有適宜的靈敏度［18］并減少干擾，最終選擇238 nm 作為檢測波長。

3.2 供試品溶液制備方法選擇 本實驗考察了提取溶劑50%、75%、90% 甲醇及無水甲醇，發現90%甲醇提取效果最佳。再考察了超聲時間20、30、40、60 min，發現在40 min 時各成分提取率最高。

3.3 流動相比例選擇 本實驗選擇乙腈-0.1% 磷酸作為流動相，考察乙腈不同初始體積分數（19%、27%、40%）對分離效果的影響，發現在19%時綠原酸、芍藥苷、阿魏酸分離效果較差，尤其是綠原酸、芍藥苷，兩者色譜峰分離度小于1.5，而且其出峰時間均在5 min 內，容易與溶劑雜質峰重合。最終，選擇乙腈初始體積分數為10%并梯度洗脫（10%、19%、25%、28%），此時該成分色譜峰分離度良好。

4 結論

本實驗建立HPLC 法同時測定參松養心膠囊中阿魏酸、芍藥苷、槲皮素、綠原酸、毛蕊異黃酮的含量，該方法操作簡便，重復性、穩定性良好，可用于該制劑的質量控制。