靖遠(yuǎn)縣包蟲病基因型測(cè)定及防控技術(shù)研究

劉俊石，付寶權(quán)，李斌，賈萬(wàn)忠

（1.靖遠(yuǎn)縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)中心 甘肅白銀 730900；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所/家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/國(guó)家動(dòng)物包蟲病專業(yè)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省動(dòng)物寄生蟲病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 蘭州 730046）

棘球蚴病（echinococcosis）是由棘球?qū)俳{蟲（echinococcus spp.）的幼蟲-棘球蚴引起的一類重要人獸共患寄生蟲病，棘球?qū)俳K末宿主是狗、狐貍、狼等食肉類動(dòng)物，成蟲寄生于其小腸內(nèi)，蟲卵隨糞便排出，污染食物、飲水和周圍環(huán)境，感染棘球絳蟲的終末宿主是棘球蚴病的最重要傳染源，呈全球性分布。在我國(guó)，棘球蚴病主要分為兩型：囊型棘球蚴病（cystic echinococcosis，CE）和泡型棘球蚴病（alveolar echinococcosis，AE）。靖遠(yuǎn)縣轄區(qū)18 個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)、177 個(gè)行政村、10.3 萬(wàn)農(nóng)戶，總?cè)丝?0.35 萬(wàn)人，其中農(nóng)業(yè)人口43.98 萬(wàn)人，占總?cè)丝诘?7.34%。2012 年靖遠(yuǎn)縣被省上確定為養(yǎng)羊大縣。2019 年底各類畜禽飼養(yǎng)量達(dá)到614.53 萬(wàn)頭（只），存欄333.12 萬(wàn)頭（只），出欄281.41 萬(wàn)頭（只），其中：羊只飼養(yǎng)量122.41 萬(wàn)只，羊只出欄64.81 萬(wàn)只。近幾年，全縣棘球蚴病人感染病例呈上升趨勢(shì)，每月以2～7 人的感染速度增加。發(fā)病家畜達(dá)6 萬(wàn)頭（只），年新發(fā)病1.26萬(wàn)頭（只），年經(jīng)濟(jì)損失500 萬(wàn)元。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2019—2022 年，緊緊圍繞靖遠(yuǎn)縣動(dòng)物包蟲病綜合防治技術(shù)試驗(yàn)示范與推廣項(xiàng)目，在靖遠(yuǎn)縣萬(wàn)信牛羊定點(diǎn)屠宰場(chǎng)采集典型牛羊肝臟棘球蚴包囊或疑似包囊12 份，將采集的樣品保存于-80℃冰箱。

1.2 材料

熒光PCR 儀、基因組提取試劑盒、解剖器具。

1.3 方法

1）基因型分析。用基因提取試劑盒按照產(chǎn)品使用說(shuō)明書對(duì)處理后的包囊樣本生發(fā)層進(jìn)行基因組DNA 提取，用熒光PCR 進(jìn)行檢測(cè)。

2）犬糞抗原檢測(cè)。在靖遠(yuǎn)縣包蟲病流行的四個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)共采集480份犬糞進(jìn)行檢測(cè)，陽(yáng)性數(shù)為36 份，陽(yáng)性率為7.5%。

3）中間宿主羊血清抗體檢測(cè)。在靖遠(yuǎn)縣包蟲病流行的四個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)共采集羊血清160 份，進(jìn)行羊包蟲病感染抗體檢測(cè)，陽(yáng)性數(shù)21份，陽(yáng)性率13%。

4）屠宰羊肝、肺包蟲病感染情況調(diào)查。在靖遠(yuǎn)縣萬(wàn)信屠宰場(chǎng)用剖檢的方法檢查待宰羊800 只。待宰羊只主要來(lái)源于該縣烏蘭鎮(zhèn)、劉川鎮(zhèn)、大蘆鎮(zhèn)、高灣鎮(zhèn)等周邊鄉(xiāng)鎮(zhèn)，其中一小部分來(lái)源于會(huì)寧縣河畔鎮(zhèn)牲畜交易市場(chǎng)，屠宰檢查發(fā)現(xiàn)肝肺包蟲囊感染64 只，感染率為8%。

2 棘球蚴病基因型鑒定結(jié)果

通過(guò)對(duì)采集自本地綿羊肝的12 個(gè)疑似包囊（白色而較硬的非囊型棘球蚴包囊）進(jìn)行了線粒體nad1 基因PCR 擴(kuò)增和序列測(cè)定，結(jié)果表明其中7 個(gè)棘球蚴疑似包囊的基因型為細(xì)粒棘球絳蟲（E.granulosus）G1 基因型，結(jié)果見圖1。3 個(gè)疑似包囊為多房棘球絳蟲中絳期（E.multilocularis metacestode）。經(jīng)序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)3 個(gè)多房棘球蚴nad1 基因核苷酸序列之間一致，且與NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中MH259778 序列完全相同，結(jié)果見圖2[1]。

圖1 棘球蚴疑似包囊基因型測(cè)定

圖2 棘球蚴疑似包囊基因序列測(cè)定

3 防控技術(shù)

3.1 切斷傳播途徑

對(duì)犬只進(jìn)行驅(qū)蟲，排泄物集中處理，切斷病犬及家畜之間的傳播鏈，禁止用感染棘球蚴病的家畜臟器喂犬，對(duì)感染棘球蚴病的家畜臟器進(jìn)行無(wú)害化處理[2]。

3.2 加強(qiáng)宣傳培訓(xùn)

通過(guò)廣泛開展棘球蚴病宣傳培訓(xùn)，提高人民群眾對(duì)棘球蚴病的認(rèn)識(shí)，增強(qiáng)個(gè)人防護(hù)意識(shí)，掌握基本防治知識(shí)，形成群防群控的局面。也可通過(guò)科普宣傳的方式加強(qiáng)對(duì)學(xué)生的健康教育，將棘球蚴病防治知識(shí)的宣傳教育和普及納入中小學(xué)生的健康教育內(nèi)容，從而全面提高棘球蚴病防控能力。

3.3 加強(qiáng)基層防疫隊(duì)伍建設(shè)

加強(qiáng)基層畜牧獸醫(yī)站的建設(shè)，有效改善基層辦公環(huán)境。不僅使人員能留下來(lái)，還要想方設(shè)法提高基層人員的業(yè)務(wù)素質(zhì)，落實(shí)生物安全措施，科學(xué)化、正規(guī)化地開展棘球蚴病防治工作。同時(shí)積極爭(zhēng)取縣級(jí)財(cái)政支持，提高村級(jí)防疫員勞動(dòng)報(bào)酬，調(diào)動(dòng)其工作積極性。

3.4 認(rèn)真做好犬驅(qū)蟲工作

要建立定期對(duì)家牧犬的驅(qū)蟲制度，驅(qū)除犬體內(nèi)的棘球絳蟲。各鄉(xiāng)鎮(zhèn)確定驅(qū)蟲日，每月對(duì)家牧犬采用含誘食劑的吡喹酮咀嚼片進(jìn)行“月月驅(qū)蟲，犬犬投藥”，吡喹酮對(duì)細(xì)粒棘球絳蟲驅(qū)蟲率可達(dá)100%。服藥前12h 將犬拴住禁食可以提高藥物吞服率。

3.5 中間畜主的免疫預(yù)防

目前，國(guó)家對(duì)棘球蚴病疫苗研發(fā)已取得突破性成就，通過(guò)接種疫苗對(duì)于棘球蚴病的防控意義重大。

3.6 加強(qiáng)家畜屠宰檢疫

在牛羊肉屠宰市場(chǎng)，檢疫人員嚴(yán)格檢疫程序，對(duì)檢疫出的病畜監(jiān)督進(jìn)行無(wú)害化處理，同時(shí)，開展流行病學(xué)調(diào)查，詳細(xì)了解牛羊產(chǎn)地來(lái)源以及飼養(yǎng)方式等情況，為進(jìn)一步防控工作奠定基礎(chǔ)[3]。

3.7 確保經(jīng)費(fèi)投入

力爭(zhēng)將棘球蚴病防控工作經(jīng)費(fèi)納入靖遠(yuǎn)縣年度財(cái)政預(yù)算，保證棘球蚴病監(jiān)測(cè)、檢疫、無(wú)害化處理、安全防護(hù)、人員培訓(xùn)、宣傳教育、督導(dǎo)評(píng)估等配套工作經(jīng)費(fèi)，確保此項(xiàng)工作順利進(jìn)行。

3.8 持續(xù)開展流行病監(jiān)測(cè)工作

建議靖遠(yuǎn)縣以鄉(xiāng)鎮(zhèn)為單位，建立中間畜主、終末畜主、以及高危人群為監(jiān)測(cè)對(duì)象的監(jiān)測(cè)體系，隨時(shí)掌握全縣棘球蚴病流行情況。

3.9 加強(qiáng)宣傳滅鼠工作

鼠類亦是棘球蚴病傳播的中間畜主，因此對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)以及周邊環(huán)境進(jìn)行滅鼠意義重大，建議農(nóng)牧部門聯(lián)合林草部門組織轄區(qū)鄉(xiāng)鎮(zhèn)進(jìn)行滅鼠工作。

4 加強(qiáng)組織領(lǐng)導(dǎo)

棘球蚴病防控工作必須各部門聯(lián)合行動(dòng)，各部門密切配合，發(fā)動(dòng)全社會(huì)力量。從學(xué)校的小學(xué)生到觀念落后的農(nóng)牧民，從機(jī)關(guān)領(lǐng)導(dǎo)到一般干部，必須改變傳統(tǒng)的生活習(xí)慣，真正了解棘球蚴病的傳播途徑及危害性。

通過(guò)此次棘球蚴基因型分析，確定靖遠(yuǎn)縣牛羊細(xì)粒棘球蚴均為G1 基因型；通過(guò)基因序列分析，發(fā)現(xiàn)同一宿主可感染不同的蟲卵。另外，經(jīng)文獻(xiàn)檢索，這是迄今為止在靖遠(yuǎn)縣首次發(fā)現(xiàn)綿羊感染多房棘球蚴的報(bào)道。但是經(jīng)組織形態(tài)學(xué)鑒定，包囊中未含原頭節(jié)，與綿羊不是多房棘球絳蟲的適宜宿主的情況相一致。這些發(fā)現(xiàn)提示，屠宰羊曾經(jīng)感染多房棘球絳蟲，羊活動(dòng)場(chǎng)所及其周圍環(huán)境對(duì)人類健康構(gòu)成生物安全風(fēng)險(xiǎn)，其傳染源需要進(jìn)一步調(diào)查。這也是此次流行病學(xué)調(diào)查極為重要的新發(fā)現(xiàn)之一。基因檢測(cè)屬于一種實(shí)用性較強(qiáng)，在棘球蚴病的控制和預(yù)防中工作中應(yīng)用十分廣泛，通過(guò)此次棘球蚴病基因序列測(cè)定，為下一步研制出更多的基因工程奠定基礎(chǔ)，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)棘球蚴病的有效防治。