PEAR1、PTGS1基因多態性與缺血性腦卒中患者復發的相關性

繆 陽 孟中如 卞海林 王紅霞

江蘇省鹽城市第一人民醫院藥學部，江蘇鹽城 224000

缺血性腦卒中是我國致死率最高的疾病之一，復發率高達17.7%，極大的威脅人民健康[1]。目前各國循證指南[2-3]均推薦阿司匹林等抗血小板藥物作為缺血性卒中二級預防的重要策略，然而實踐發現阿司匹林抵抗（aspirin resistance，AR）會顯著降低抗血小板治療的療效，提高缺血性卒中復發的風險[4]。血小板內皮聚集受體1（platelet-endothelial aggregation receptor 1，PEAR1）和前列腺素內過氧化物合酶1（prostaglandin-endoperoxide synthase 1，PTGS1）等 基因多態性不僅是導致AR的重要因素，還會引起抗血小板療效的差異[5-6]，但其與缺血性腦卒中復發的直接關聯尚不完全清楚[7]。為此，本研究回顧性分析我院缺血性腦卒中患者中PEAR1、PTGS1基因型的分布情況，并探討基因多態性與腦卒中復發之間的關聯性，以期能通過開展用藥前藥物基因組學檢測，指導臨床用藥決策，預防或減少腦卒中復發。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇鹽城市第一人民醫院神經內科2018年7月至2021年6月315例住院患者進行單中心、回顧性病例對照研究。以入院時既往是否發生過腦卒中將患者分為兩組：首發缺血性腦卒中組243例、復發缺血性腦卒中組72例。復發缺血性腦卒中組病例為既往有缺血性腦卒中病史，規律服用阿司匹林預防（每天1片，100 g/片，拜耳醫藥保健有限公司，國藥準字J20171021），再次出現遺留神經功能缺損癥狀加重或新發神經功能缺損癥狀，此次入院頭顱CT或MRI顯示存在新病灶的患者（CT結果有臨床影像一致的描述；MRI有責任病灶DWI高信號/ADC低信號的證據）。本研究經鹽城市第一人民醫院醫學倫理委員會通過。

納入標準：患者年齡≥18 歲，具有缺血性腦卒中相應體征，且經腦CT或MRI確診符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》[8]中診斷標準；均接受PEAR1和PTGS1基因型檢測。排除標準：心源性或出血性腦梗死患者；阿司匹林過敏患者；接受免疫抑制劑、抗凝藥物治療或服用影響血小板功能類藥物者；有惡性腫瘤，血液疾病，癲癇等神經系統疾病或消化性潰瘍病史者；有急慢性感染性疾病以及嚴重心、肝、腎等多臟器功能障礙或衰竭者。收集年齡、性別、BMI、吸煙史、飲酒史、既往史以及并發癥等資料。

1.2 檢測方法

采集2 ml患者靜脈外周血，置于EDTA抗凝管中進行檢測（PCR-熒光探針法）。取適量通用樣本稀釋液加入待測樣本中充分混合后備用。取2 μl待測樣本的稀釋液、陽性質控品、陰性質控品，分別加入裝有3種PCR反應液的反應管中，37℃溫浴3 min后6000 rpm離心40 s，再次渦旋3 s混勻，然后6000 rpm離心5 s后將反應管放置在Fascan48E儀器上進行測序。基因檢測采用西安天隆科技有限公司的Fascan 48E多通道熒光定量分析儀及配套測序反應通用試劑盒。

1.3 統計學方法

采用SPSS 23.0軟件對數據進行統計分析，符合正態分布的計量資料采用均值±標準差（）表示，不符合者采用中位數及四分位數間距[M（P25，P75）]表示；計數資料用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料比較符合正態分布者采用獨立樣本t檢驗，不符合者采用秩和檢驗；采用logistic回歸模型進行多因素分析。P＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者臨床資料單因素分析

兩組組比較，BMI、性別、高血壓病、糖尿病、冠心病、吸煙及飲酒史、TC、TG、HDL-C、Hcy、血小板等比較，差異無統計學意義（P＞ 0.05）。但復發組平均年齡和D-二聚體顯著高于首發組，LDL-C顯著小于首發組，差異有統計學意義（P＜ 0.05）。見表1。

表1 兩組患者單因素分析表

2.2 PEAR1和PTGS1基因的分布特征

315例缺血性腦卒中患者中， PEAR1等位基因變異發生率為34.92%；PTGS1等位基因變異發生率為25.87%。經χ2檢驗，發現各基因型分布頻率均符合Hardy-Weinberg平衡（P＞ 0.05），說明樣本具有群體代表性。見表2。

表2 PEAR1和PTGS1基因多態性頻率分布

2.3 PEAR1和PTGS1基因多態性比較

PEAR1基因多態性的分布在兩組之間差異有統計學意義（P=0.031），復發組中野生型GG占比29.16%，雜合突變性GA占比54.17%，純合突變型AA占比16.67%；首發組中GG占比44.03%，GA占比47.33%，AA占比8.64%。野生型GG/突變型（GA+AA）在兩組間分布差異有統計學意義（χ2=5.089，P=0.024）。見表3。PTGS1基因多態性的分布在兩組之間差異無統計學意義（P＞ 0.05），復發組中野生型AA占比51.39%，雜合突變型AG占比38.89%，純合突變型GG占比9.72%；首發組中AA占比58.44%，AG占比33.33%，GG占比8.23%。

表3 PEAR1和PTGS1基因型分布及等位基因比較

2.4 相關因素分析

以是否再發缺血性腦卒中為因變量，以單因素分析中有顯著差異的3個因素（年齡、D-二聚體、LDL-C）及PEAR1突變（GA+AA）為自變量，進行相關因素的logistic回歸分析，得到年齡（OR=1.028）、D-二聚體（OR=1.170）、LDL-C（OR=0.642）是缺血性卒中復發的獨立相關因素，見表4。

表4 再發缺血性腦卒中相關因素的logistic回歸分析

3 討論

根據文獻報道，年齡、性別、有吸煙或飲酒史、冠心病、遺傳因素以及血壓、血糖、血脂、同型半胱氨酸水平升高等都是影響缺血性腦卒中復發的相關因素[9]。本研究分析結果表明年齡、D-二聚體、LDL-C是缺血性腦卒中患者復發的獨立相關因素。但復發組低LDL-C水平與既往研究中缺血性腦卒中復發的已知危險因素相矛盾[10]，這可能由于本研究中復發組患者入院前大多服用降脂藥進行卒中二級預防有關。

近年來研究證實再發缺血性腦卒中的獨立危險因素之一就是AR，而PEAR1、PTGS1等基因多態性會影響蛋白的結構或構象，使得阿司匹林抗血小板作用在不同個體間產生差異，誘發AR，進而導致患者再發缺血性腦卒中[4-6]。PEAR1是一種血小板跨膜蛋白，參與血小板激活及血栓形成，其磷酸化加強了GPIIb/IIIa纖維蛋白原受體的激活，從而促進血小板聚集。研究表明，PEAR1基因與血小板功能及抗血小板藥物的作用都有很強的相關性[11]，突變基因型GG是AR的危險因素[12]。本研究結果顯示復發的缺血性腦卒中患者中PEAR1突變型（GA+AA）比例顯著高于首發患者（P＜ 0.05），但多因素回歸分析結果顯示PEAR1突變對缺血性腦卒中復發的影響無統計學意義（P＞ 0.05）。一方面可能由于本研究納入的樣本量有限，另一方面原因可能是PEAR1基因多態性會影響AR發生，但與缺血性腦卒中復發并無直接關聯。

阿司匹林通過抑制環氧合酶-1（COX-1）的作用，而COX-1主要由PTGS1基因編碼，從而減少花生四烯酸轉化為血栓素（TX）A2，阻斷血小板的聚集。基于既往PTGS1基因的研究，其突變與AR發生相關[13-14]，也與心肌梗死的復發有顯著關聯性[15]。本研究通過比較首發及復發腦卒中患者的PTGS1各基因型的分布，結果表示兩組間無顯著差異，且分布頻率均符合Hardy-Weinberg平衡，說明樣本具有群體代表性，所以PTGS1基因多態性與缺血性卒中復發無關聯性。腦卒中復發是多種危險因素交互作用下的結果，各因素相互之間有協同或拮抗作用。PTGS1突變對AR的作用可能為其他因素拮抗，導致其與腦卒中復發不相關。

總之，本研究中缺血性腦卒中患者基因多態性發現大部分患者PEAR1和PTGS1基因為野生型，且復發患者中PEAR1基因突變型（GA+AA）顯著高于首發患者。但PEAR1和PTGS1基因突變與缺血性腦卒中復發無統計學相關性，可能由于導致缺血性腦卒中的再發因素較為復雜，未來需要大規模的研究進一步驗證。