STC1在肝細胞癌組織中的表達及對預后的影響*

張?zhí)鹛?劉 楊 唐小童 于寒冰 李玉梅 汪 蕊，2

1 蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，安徽省蚌埠市 233003； 2 癌癥轉(zhuǎn)化醫(yī)學安徽省重點實驗室

原發(fā)性肝癌是世界范圍內(nèi)癌癥相關(guān)死亡的第三大原因，其中肝細胞癌(HCC)是原發(fā)性肝癌中最為常見的病理類型[1]。盡管近些年隨著外科技術(shù)及新藥研發(fā)的發(fā)展，肝癌在診斷及治療方面均取得了較大的進步，但由于肝癌存在早期臨床癥狀隱匿、惡性程度高、生長速度快、易復發(fā)轉(zhuǎn)移等特點，肝癌患者整體預后情況仍不理想[2]。因此，探索肝癌發(fā)展機制及尋求潛在的治療靶點具有重要的臨床意義。人斯鈣素1(Stanniocalcin 1，STC1)是一種糖蛋白激素，可廣泛表達于脊椎動物多種組織中，除調(diào)節(jié)鈣/磷代謝外，還參與血管生成、炎癥、生殖、凋亡、妊娠、腦缺血等生理病理過程[3]。近些年，多項研究發(fā)現(xiàn)，STC1可在結(jié)直腸癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、白血病等多種惡性腫瘤中表達，且和腫瘤患者的臨床預后相關(guān)。在肝癌組織中STC1的表達水平及其臨床意義尚未有詳盡研究，因此本研究探討STC1在肝癌組織中的表達情況及與HCC患者臨床病理特征和預后的關(guān)系，以明確STC1在肝癌中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2016年1月—2018 年12月期間就診于蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院并接受手術(shù)治療的肝癌患者臨床病理資料，患者均經(jīng)病理學確診為肝細胞癌，且手術(shù)前未接受包括化療、放療和介入等任何抗腫瘤治療。所有的患者均具有充分的肝癌組織樣本和完整的臨床病理及隨訪資料，隨訪截止時間為 2020年5月。符合上述要求納入本研究的患者共75例，其中男61例，女14例；年齡22～76歲，中位年齡49歲；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例；肝硬化38例，無肝硬化37例；有脈管癌栓26例，無脈管癌栓49例；腫瘤分化Ⅰ～Ⅱ級57例，Ⅲ級及以上18例；TNM 分期依據(jù)第8版AJCC 標準確定，Ⅰ期35例，Ⅱ期20例，Ⅲ期20例。肝癌組織行常規(guī)HE染色，選取含有腫瘤組織的區(qū)域行免疫組化染色。同時，通過基因表達譜數(shù)據(jù)動態(tài)分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis，GEPIA)網(wǎng)站，分析STC1在肝癌和正常肝組織中RNA測序表達數(shù)據(jù)。

1.2 試劑及免疫組化染色(IHC) 兔抗人STC1抗體(Anti-Stanniocalcin 1)購買于美國Abcam公司；免疫組化檢測試劑盒(EliVisionTMplus)以及DAB 顯色試劑盒購買于中國福州邁新生物科技公司。所有標本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，EDTA高溫高壓修復抗原，DAB 顯色，蘇木精復染。STC1抗體稀釋濃度為1∶1 000，用已知陽性切片(PTC)作為陽性對照，用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)代替一抗作為陰性對照。采用 EnVision兩步法進行免疫組織化學染色，所有實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 IHC結(jié)果判讀 STC1陽性染色定義為細胞膜和細胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒染色。應用IHC 半定量法對染色結(jié)果分析，隨機選擇5個高倍鏡下視野(×400)，計算每個視野下細胞的染色強度(I)和陽性染色細胞(P)百分比，取其平均值，以H score = I×P 公式計算染色結(jié)果。STC1的I評分為：無顯色染色(0分)，淺黃色顯色染色(1分)，棕黃色顯色染色(2分)，棕褐色顯色染色(3分)。STC1的P評分為：0%(0分)，1%～25%(1分)，26%～50%(2分)，51%～75%(3分)，76%～100%(4分)。H score= 0分為陰性(-)，H score=1分為弱陽性(1+)，H score=2分為中等陽性(2+)，H score≥3分為強陽性。H score≥2分判定為STC1陽性染色。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS26.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料組間差異性分析采用χ2檢驗，若理論頻數(shù)<1采用Fisher確切概率法，生存資料單因素分析采用Long-rank檢驗，多因素分析采用COX回歸模型，檢驗水準為0.05，P<0.05認為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 STC1表達與肝癌臨床病理特征的關(guān)系 75例HCC組織中STC1的陽性表達率為60%(45/75),顯著高于癌旁組織中的36%(27/75)，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見圖1。另外，STC1的表達與患者的年齡、性別、有無肝硬化及腫瘤AJCC分期無關(guān)(P>0.05)，與脈管癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度有關(guān)(P<0.05)，見表1。

圖1 免疫組織化學檢測STC1蛋白在肝癌及癌旁組織中的表達

表1 STC1表達與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2.2 STC1的表達與肝癌患者預后的關(guān)系 在75例肝癌患者中，與STC1陽性表達患者(n=45)比較，STC1陰性表達患者(n=30)表現(xiàn)出更長的mOS，且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見圖2。

圖2 STC1表達與肝癌患者總生存之間的關(guān)系

2.3 肝癌患者預后的多變量COX回歸分析 COX回歸多因素分析結(jié)果顯示：AJCC分期、STC1表達及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響肝癌患者生存狀態(tài)的獨立危險因素，見表2。

表2 肝癌患者預后的COX回歸分析

3 討論

STC1是一種糖蛋白激素，最早發(fā)現(xiàn)于硬骨魚類腎臟的內(nèi)分泌腺Stannius小體中，其生理主要作用是調(diào)節(jié)血清鈣和磷的平衡。人類STC1位于染色體8p11.2～p21，作為一種分泌型蛋白發(fā)揮作用[4]。近年來，越來越多的證據(jù)表明 STC1與腫瘤細胞生長和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。STC1是一種與內(nèi)源性缺氧誘導因子(Hypoxia-inducible factots, HIF)1α密切相關(guān)的一種糖蛋白激素，研究證實 HIF-1α是缺氧條件下誘導STC1 mRNA 表達增強的一個關(guān)鍵因子，STC1通過促進缺氧區(qū)域的血管生成和提高腫瘤細胞的缺氧耐受性，來維持腫瘤細胞的能量代謝、新血管形成及腫瘤增殖[5]。在人類多種腫瘤樣本中，可觀察到STC1表達的顯著升高，且STC1表達水平的升高多與患者預后不良相關(guān)。如Fang等[6]通過檢測胃癌患者腫瘤組織及血清中STC1的表達及生存預后分析，發(fā)現(xiàn)STC1在胃癌中高表達，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期和 3年無進展生存率明顯相關(guān)，且在胃癌診斷方面血清中STC 蛋白比CEA和CA199更加敏感。Bai等[7]研究發(fā)現(xiàn)，STC1通過影響細胞周期相關(guān)蛋白，促進前列腺癌細胞的增殖，可作為前列腺癌診斷新的分子標志物。以上研究提示，STC1參與了腫瘤進展過程，與腫瘤患者預后相關(guān)，有可能作為腫瘤新的標志物。因此，STC1也被有些學者建議作為癌癥進展的分子標記。

本文通過免疫組化染色檢測了STC1在HCC組織中的蛋白表達情況，并分析了STC1的表達與HCC患者臨床病理參數(shù)及預后之間的關(guān)系,結(jié)果顯示肝癌組織中STC1陽性表達率為60%，STC1的表達與脈管癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度差有關(guān)(P<0.05)。盡管Yeung等[8]研究結(jié)果也證實了STC1在HCC組織中高表達，但發(fā)現(xiàn)STC1的表達與腫瘤大小呈負相關(guān)。然而，Chan等[9]研究發(fā)現(xiàn)血清中STC1高表達與肝癌更大的腫瘤直徑和更差的5年無病生存相關(guān)，并且分泌型STC1通過激活JNK信號通路增強肝癌的轉(zhuǎn)移潛能，揭示STC1可能作為HCC的預后血清生物標志物和治療靶點。同時我們觀察到STC1陽性表達的患者相比較于陰性表達的患者mOS縮短，差異有統(tǒng)計學意義。另外，本研究通過多變量Cox回歸分析發(fā)現(xiàn)：AJCC分期、STC1表達及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響肝癌患者生存狀態(tài)的獨立危險因素。Chan等[9]研究也證明，STC1的單克隆抗體可作為一種HCC患者TACE術(shù)后的潛在治療方法，可通過對抗不良反應來增強TACE的治療效果。可見，STC1不僅可提示HCC患者的疾病進程和預后，還可能成為HCC治療的新靶點。本研究為單中心回顧性研究，未獲取治療前血清學樣本，且組織樣本缺乏癌旁組織對照，因此STC1是否可作為HCC診斷及預后的生物學指標還需進行前瞻性的研究。

綜上所述，STC1在HCC中高表達，并和HCC患者不良預后相關(guān)，STC1在HCC中可能扮演著癌基因角色，有望成為HCC新的診斷及預后判斷標記物，未來針對STC1靶點的治療有可能為HCC患者帶來新的治療策略。