無抗日糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物對肉雞生產(chǎn)性能的影響

常 紅，楊建功，張改霞

（1.舞陽縣動(dòng)物防疫檢疫中心，河南舞陽 462400；2.漯河市功能區(qū)畜牧服務(wù)中心，河南漯河 462000）

凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus coagulans）又稱芽孢乳酸菌（趙樹平等，2014），是一類桿菌類乳酸菌，具備芽孢桿菌屬和乳酸菌類的雙重優(yōu)勢（黃遵錫和程志斌，2015），能在腸道內(nèi)定居，可產(chǎn)生B族維生素、多種消化酶和抑制有害菌的凝固素（Coagulin）和L-乳酸，同時(shí)可抑制多種病原體（趙鈺等，2015）。本試驗(yàn)在肉雞無抗日糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物，旨在研究其對肉雞生產(chǎn)性能的影響，為無抗日糧開發(fā)及應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 15%金霉素購自華中正大有限公司。指示菌：大腸桿菌K88、K99、腸炎沙門氏菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌（雞源）均為本實(shí)驗(yàn)室保存。凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物為本實(shí)驗(yàn)室制備，活菌含量為9×108CFU/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選取900羽體重45 g左右的1日齡羅斯308肉雞，隨機(jī)分設(shè)3組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)為100羽。I組：基礎(chǔ)無抗日糧；II組：在I組日糧中添加金霉素75 mg/kg；III組：在I組日糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物1000 g/t；試驗(yàn)為期38 d。試驗(yàn)日糧設(shè)計(jì)參照羅斯308肉雞營養(yǎng)需要，日糧營養(yǎng)水平和原料組成如表1。

表1 試驗(yàn)日糧營養(yǎng)水平和組成

1.3 飼養(yǎng)管理 日常管理按飼養(yǎng)規(guī)程進(jìn)行，免疫防控按日常程序進(jìn)行；試驗(yàn)期不使用任何抗生素和其他添加劑。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 抑菌活性 采用牛津杯平板擴(kuò)散法測定抑菌活性，用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑，以抑菌圈直徑大小表示抑菌活性（鐘舒紅等，2022）。

1.4.2 生長性能 試驗(yàn)期每天記錄采食量，于7、38 d空料2 h后稱重，統(tǒng)計(jì)各組平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。

1.4.3 免疫指標(biāo) 試驗(yàn)38 d空料2 h后稱重，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取10羽，心臟采血，分離血清于-20℃保存待測。血清IgA、IgM、IgG均用ELISA酶聯(lián)免疫法測定；ND抗體水平采用血凝抑制法（HI）。按雞只編號解剖后摘取完整的胸腺、脾臟、法氏囊并稱重，免疫器官指數(shù)計(jì)算公式如下：

免疫器官指數(shù)=免疫器官重（g）/活體重（kg）。

1.4.4 消化酶活性 雞只稱取1 g空腸食糜至9 mL滅菌蒸餾水中，在冰面上勻漿5 min，1800 r/min離心5 min后吸取上清液用試劑盒測定淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性，操作方法按說明書執(zhí)行。

1.4.5 腸道形態(tài) 截取雞只小腸卵黃蒂前5 cm腸段用10%福爾馬林固定，切片經(jīng)伊紅（HE）染色，用生物顯微鏡觀察腸道形態(tài)，測量隱窩深度和絨毛高度，計(jì)算絨毛高度/隱窩深度（V/C）。

1.5 數(shù)據(jù)分析 數(shù)據(jù)經(jīng)Excel初步整理后用軟件SPSS 20.0單因素方差分析，采用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用平均值表示，P＜0.05表示組間差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 對抑菌活性的影響 由表1可知，凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物對大腸桿菌K88、K99、腸炎沙門氏菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌均有良好的抑菌活性，說明凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物內(nèi)富含抑菌代謝物。

表2 對大腸桿菌、沙門氏菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的抑菌活性

2.2 對生長性能的影響 由表3可知，1～7 d，III組死亡率比II組降低13.04%（P＞0.05），比I組死亡率顯著降低33.3%（P＜0.05），ADG顯著提高6.81%（P＜0.05）。8～38 d，III組比I組ADG顯著提高4.68%（P＜0.05），F(xiàn)/G降低4.02%（P＞0.05），死亡率顯著降低48.6%（P＜0.05）。1～38 d，III組比I組ADG顯著提高4.86%（P＜0.05），F(xiàn)/G降低4.09%（P＞0.05），死亡率顯著降低41.7%（P＜0.05），比II組死亡率降低26.38%（P＞0.05）。

表3 凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物對肉雞生長性能的影響

2.3 對免疫指標(biāo)的影響 由表4可知，III組比I組、II組血清IgA、IgM含量和ND抗體水平提高22.16%、23.17%、11.04%、15.03%和15.04%、9.68%，差異顯著（P＜0.05）；ND抗體離散度降低36.84%（P＜0.05）和29.41%（P＜0.05）。III組胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)相比I組提高9.43%（P＜0.05）和62.5%（P＜0.05）。

表4 凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物對肉雞免疫指標(biāo)的影響

2.4 對消化酶活性的影響 由表5可知，III組相比I組空腸淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性分別顯著提高25.98%、42.43%、36.09%（P＜0.05）；III組相比II組空腸淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性分別顯著提高13.8%、34.63%、25.05%（P＜0.05）。

表5 凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物對肉雞消化酶的影響 U/g

2.5 對腸道形態(tài)的影響 由表6可知，III組空腸絨毛高度比I組、II組分別提高19.83%（P＜0.05）和4.35%（P＞0.05），而絨毛高度/隱窩深度比降低8.46%（P＜0.05）和5.87%（P＜0.05）。圖1為空腸切片圖。

圖1 空腸形態(tài)結(jié)構(gòu)圖

表6 凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物對肉雞腸道形態(tài)的影響

3 分析與討論

促生長類抗生素作用機(jī)理的主流觀點(diǎn)是通過抑制有害菌，改善腸道健康，進(jìn)而達(dá)到促進(jìn)動(dòng)物生長的目的（張顯東，2017）。凝結(jié)芽孢桿菌產(chǎn)生的凝固素（Coagulin）是由44個(gè)氨基酸殘基組成，帶正電荷，有陽離子特性，兩性區(qū)或疏水區(qū)能穿過細(xì)胞膜而殺死靶細(xì)胞（李雄彪等，2006）。本試驗(yàn)對大腸桿菌K88、K99、腸炎沙門氏菌、A型產(chǎn)氣莢膜梭菌（雞源）的抑菌測定表明，凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物有良好的抑菌活性。

研究表明，凝結(jié)芽孢桿菌300 mg/kg可提高21 d櫻桃谷肉鴨小腸淀粉酶、胰蛋白酶活性（曾麗莉等，2015）；小腸絨毛的高度和隱窩深度是反映小腸細(xì)胞發(fā)育情況和消化吸收功能的主要指標(biāo)（齊博等，2016）；本試驗(yàn)III組比I組、II組空腸絨毛高度顯著增加，空腸食糜中淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性顯著提高，表明凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物可提升腸道食糜消化能力，增強(qiáng)小腸消化吸收能力。全程，III組ADG和ADFI顯著提高，F(xiàn)/G和死亡率顯著降低，且血清IgA、IgM、IgG含量和ND抗體水平顯著提高，ND抗體離散度顯著降低，生產(chǎn)成績顯著提升，其機(jī)制是凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物作用的綜合體現(xiàn)，通過抑制有害菌生長來保障腸道健康，提高小腸絨毛高度，增加吸收面積，提升消化酶活性，促進(jìn)營養(yǎng)物吸收，進(jìn)而提高機(jī)體免疫力，降低死亡率，最終提升生產(chǎn)成績。

4 結(jié)論

無抗日糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物1000 g/t可提升肉雞生產(chǎn)成績，且添加凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物效果優(yōu)于金霉素。