不同煙草普通花葉病毒OD比值煙苗的大田移栽試驗(yàn)

鄧征宇 敬禮恒 丁建冰 周向平

湖南省煙草公司永州市公司，湖南 永州 425000

0 引言

煙草花葉病毒為RNA 病毒，是煙草花葉病的病原體，在全國(guó)各大煙葉產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生［1］。目前，煙草花葉病毒在煙草上共分為普通株系、番茄株系、黃色花葉株系和壞死株系。除煙草外，煙草花葉病毒還可寄生茄科、豆科、車(chē)前科等科的多種植物［2］。煙草花葉病從新葉開(kāi)始發(fā)病，沿葉脈組織變成淡綠色，以后形成局部斑點(diǎn)、枯死或失綠的環(huán)斑，幾天后形成花葉，嚴(yán)重影響煙草正常生長(zhǎng)發(fā)育，給煙農(nóng)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失［3］。

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法是將含有已知抗體的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗滌一次后加待測(cè)抗原，若兩者是特異的，則發(fā)生結(jié)合，再加入與待測(cè)抗原呈特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體，使一單位的抗原同時(shí)結(jié)合兩單位的抗體形成“夾心”；之后加入該酶的底物，根據(jù)產(chǎn)生的有色酶解產(chǎn)物顏色的深淺來(lái)判斷待測(cè)抗原的含量。雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法是當(dāng)前煙草花葉病毒的主要檢測(cè)方法之一［4-6］。筆者將使用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法檢測(cè)出與陰性對(duì)照不同吸光度（Optical Density，OD）比值的煙苗進(jìn)行大田移栽，跟蹤煙苗移栽30 d后的發(fā)病情況，調(diào)查不同OD比值下煙苗的發(fā)病率和病情指數(shù)，探索與陰性對(duì)照不同OD比值煙苗大田普通花葉病的發(fā)病規(guī)律，為煙葉生產(chǎn)中育苗環(huán)節(jié)實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)消毒提供理論支撐，避免帶毒煙苗移栽進(jìn)入大田帶來(lái)經(jīng)濟(jì)損失。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

試驗(yàn)于2023 年在湖南省永州市江華瑤族自治縣濤圩鎮(zhèn)開(kāi)展。試驗(yàn)田塊為歷年煙草普通花葉病發(fā)生較輕或不發(fā)生的煙稻輪作水田，前茬作物為水稻，土壤肥力均勻、中等，土地平整，排灌方便。

1.2 試驗(yàn)品種

試驗(yàn)所用的烤煙品種為云煙87。

1.3 試驗(yàn)處理

各處理煙苗均為2023 年集約化育苗、煙草普通花葉病檢測(cè)呈陽(yáng)性的育苗池?zé)熋纭?duì)與陰性對(duì)照OD 值不同比值的煙苗按照以下5 個(gè)處理設(shè)計(jì)移栽到大田。T1，煙苗普通花葉病檢出OD 值∶陰性對(duì)照OD 值<1.2，設(shè)為空白對(duì)照；T2，煙苗普通花葉病檢出OD 值∶陰性對(duì)照OD 值為（1.5，2.0］；T3，煙苗普通花葉病檢出OD值∶陰性對(duì)照OD 值為（2.0，4.0］；T4，煙苗普通花葉病檢出OD 值∶陰性對(duì)照OD 值為（4.0，6.0］；T5，煙苗普通花葉病檢出OD值∶陰性對(duì)照OD值>6.0。

每個(gè)處理設(shè)3 次重復(fù)，每處理種煙35 株。整個(gè)生育期不使用藥劑防治煙草普通花葉病。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中農(nóng)事操作注意先健株后病株（含空白對(duì)照處理），避免農(nóng)事操作傳毒造成誤差。

1.4 調(diào)查方法

參考《煙草病蟲(chóng)害分級(jí)及調(diào)查方法》（GB/T 23222—2008），分別于移栽后10、20、30 d調(diào)查各小區(qū)煙草普通花葉病的發(fā)生情況，并統(tǒng)計(jì)發(fā)病率及病情指數(shù)。

按照病害嚴(yán)重度分級(jí)，以株為單位分級(jí)調(diào)查。具體調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)如下：0 級(jí)，全株無(wú)病；1 級(jí)，心葉脈明或輕微花葉，病株無(wú)明顯矮化；3 級(jí)，1/3 葉片花葉但不變形，或病株矮化為正常株高的3/4 以上；5 級(jí)，1/3～1/2葉片花葉，或少數(shù)葉片變形，或主脈變黑，或病株矮化為正常株高的2/3～3/4；7級(jí)，1/2～2/3葉片花葉或變形或主側(cè)脈壞死，或病株矮化為正常株高的1/2～2/3；9級(jí)，全株葉片花葉，嚴(yán)重變形或壞死，或病株矮化為正常株高的1/2以上。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 不同處理移栽后10 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

不同處理移栽后10 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況如表1 所示。由表1 可知，移栽后10 d，各處理均沒(méi)有表現(xiàn)出較重的發(fā)病癥狀，T1、T2、T3處理均未出現(xiàn)5、7、9病級(jí)煙苗，除T5（OD 比值大于6）外，各組發(fā)病率均低于40%。其原因可能是移栽后受低溫、干燥等因素影響，煙苗生長(zhǎng)緩慢，普通花葉病毒侵染率較低。

表1 不同處理移栽后10 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

2.2 不同處理移栽后20 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

不同處理移栽后20 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況如表2所示。由表2可知，移栽后20 d，各處理組出現(xiàn)較為明顯區(qū)別，其中處理組T5發(fā)病率最高（平均85.71%），是對(duì)照處理T1的15倍，病情指數(shù)高達(dá)47.20。T1、T2、T3均未出現(xiàn)9級(jí)病株，T4、T5已經(jīng)出現(xiàn)較為嚴(yán)重的普通花葉病癥狀，葉脈部分葉肉顏色變黃，出現(xiàn)明脈，葉片開(kāi)始皺縮扭曲。

表2 不同處理移栽后20 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

2.3 不同處理移栽后30 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

隨著氣溫上升及雨水增多，病毒侵染更為迅速，不同處理移栽后30 d 煙苗普通花葉病發(fā)生情況如表3 所示。由表3 可知，移栽后30 d，各處理組表現(xiàn)出明顯差異，隨著OD比值的增大，煙苗普通花葉病發(fā)病率及發(fā)病指數(shù)均大幅增長(zhǎng)，T5的發(fā)病率高達(dá)94.29%，發(fā)病指數(shù)為93.44，已經(jīng)沒(méi)有正常煙株，感染煙株生長(zhǎng)停滯、矮小、葉片黃綠相間，且出現(xiàn)較多壞死斑點(diǎn)。而T1對(duì)照處理的發(fā)病率僅為8.57%。

表3 不同處理移栽后30 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

3 討論與結(jié)論

筆者利用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法，對(duì)檢測(cè)樣品OD 值與陰性對(duì)照OD 值不同比值的煙苗進(jìn)行大田移栽試驗(yàn)，通過(guò)跟蹤煙苗的發(fā)病情況，探究待測(cè)煙苗和陰性對(duì)照不同OD 比值與煙苗大田普通花葉病發(fā)病率的關(guān)系。結(jié)果表明，隨著OD 比值增大，煙苗攜帶的花葉病毒越多，移栽后病毒侵染速度越快，煙苗普通花葉病發(fā)病率越高。OD 比值為（1.5，2.0］的煙苗，最終平均發(fā)病率為22.86%，需要在育苗期間加強(qiáng)消毒處理，有效降低帶毒量，檢測(cè)合格后方可移栽；對(duì)于OD比值大于2.0 的煙苗，建議直接進(jìn)行無(wú)害銷(xiāo)毀，以避免交叉感染，同時(shí)加強(qiáng)對(duì)于育苗薄膜、育苗池、剪葉機(jī)等相關(guān)物資及場(chǎng)地的消毒，避免健康煙苗被感染，從源頭降低大田普通花葉病發(fā)病率。

目前，育苗期間煙苗攜帶普通花葉病毒的途徑主要有3條。一是基質(zhì)攜帶病毒。在育苗過(guò)程中當(dāng)基質(zhì)攜帶普通花葉病毒時(shí)，易導(dǎo)致大規(guī)模感染。二是煙草種子攜帶病毒。在煙草種子包衣加工過(guò)程中如果消毒不到位，極可能導(dǎo)致部分包衣種子本身攜帶普通花葉病毒。三是育苗期間人為操作感染。育苗期間人員頻繁出入育苗棚，通過(guò)手觸摸感染或是在田里攜帶泥土進(jìn)入育苗棚，均有可能將普通花葉病病毒傳染給煙苗。因此，為保證煙葉生產(chǎn)安全，建議加強(qiáng)基質(zhì)及種子消殺，避免出現(xiàn)大規(guī)模感染；及時(shí)取樣進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)于OD比值為（1.5，2.0］的煙苗進(jìn)行消毒，待OD比值小于1.2后方可移栽；加強(qiáng)苗期人員管理，進(jìn)入育苗棚前用消毒液對(duì)鞋進(jìn)行浸泡消毒處理，進(jìn)入大棚后減少用手觸碰煙苗，相應(yīng)農(nóng)事操作遵循先健株后病株的原則，對(duì)剪葉機(jī)等機(jī)器在每次使用前用消毒液充分浸泡。