鵝星狀病毒重組Capsid蛋白亞單位疫苗的免疫效果

榮雪路 魏榮榮 王鉅華 李甜甜 朱國強 丁國偉

摘 ?要：為了研究鵝星狀病毒重組Capsid蛋白亞單位疫苗對種鵝的免疫效果，試驗用鵝星狀病毒重組Capsid蛋白亞單位疫苗對種鵝進行接種，并對種鵝所產蛋孵出的雛鵝進行攻毒，采用瓊脂擴散試驗法檢測鵝血清中GoAs抗體的水平，記錄雛鵝攻毒結果。結果顯示：三批疫苗免疫28 d后試驗組種鵝均有抗體產生;對照組種鵝的抗體均為陰性。試驗組雛鵝攻毒后一切正常，存活率100%，無不良臨床癥狀。對照組雛鵝攻毒后第3天精神沉郁、厭食、站立不穩、離群、排稀灰白色或黃綠色糞便，存活率50%，死亡鵝剖檢可見關節腫大，關節內和內臟表面有石灰樣尿酸鹽沉積，腎臟腫大和充血，脾臟出血嚴重，有灰白色壞死灶。研究結果表明鵝星狀病毒重組Capsid蛋白亞單位疫苗免疫效果良好，能有效預防鵝星狀病毒的感染。

關鍵詞：重組Capsid蛋白;鵝星狀病毒;攻毒保護

中圖分類號：S855.3 文獻標志碼：A 文章編號：1001-0769（2020）10-0022-05

星狀病毒主要引起鵝發生嚴重的內臟型痛風和關節型痛風[1]。該病毒主要侵害2～25日齡的雛鵝，鵝感染后臨床癥狀表現為精神不振、采食減少、消瘦衰弱、呼吸困難、行動遲緩和排白色稀便。剖檢可見：雙腎腫大，有尿酸鹽沉積，嚴重的呈大理石樣;其他內臟被一層白色石灰樣薄膜包裹，關節周圍及關節腔有白色尿酸鹽沉積[2-3]。發病時間多為每年的11月到次年的5月，這個季節是我國中東部種鵝產蛋高峰期，其他時間發病較少。感染鵝的病死率受感染日齡、繼發感染等因素影響，發病率最高可達50%[4]，該病已經成為危害養鵝業健康發展的一種重要傳染病。目前，接種疫苗是預防、控制甚至消滅鵝星狀病毒的主要措施之一。星狀病毒的培養較為困難，限制了常規弱毒疫苗和滅活疫苗的研發。2009年，Sellers等[5]成功表達了雞星狀病毒的衣殼蛋白，用其免疫的雞群產生了高水平的抗體，表明衣殼蛋白有可能作為星狀病毒的亞單位疫苗。亞單位疫苗不含星狀病毒的核酸物質，安全性較好，給鵝接種后不會發生持續感染或潛伏感染，產生的免疫應答可以與星狀病毒的野毒株感染相區分，有利于疫病的控制和消滅。因此，研制一種生產成本低、生產效率高以及免疫效果好的鵝星狀病毒亞單位疫苗的生產方法具有重要的現實意義。

本試驗為有效預防鵝感染鵝星狀病毒，通過制備鵝星狀病毒重組Capsid蛋白亞單位疫苗，對種鵝進行接種，并對其所產鵝蛋孵出的雛鵝進行攻毒，研究該疫苗的保護效果，為鵝場鵝的健康和經濟效益提供保障。

1 ?材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 種毒來源

分離并鑒定臨床病料，將所得病毒命名為鵝星狀病毒GoAsV-LH株，用鵝胚尿囊液傳代，取F3代用于攻毒（尿囊液病毒含量104.03 ELD50/0.2 mL）。

1.1.2 試驗動物

試驗所用動物為四季鵝。

1.1.3 主要試劑及儀器

瓊脂購自Sigma公司，批號為WXBC9850V。生化培養箱購自上海一恒科學儀器有限公司，型號為LRH-150F。

1.1.4 試驗用疫苗

鵝星狀病毒重組Capsid蛋白亞單位疫苗由本公司提供，批號分別為rCapsid-001P、rCapsid-002P和rCapsid-003P，各批次疫苗抗原蛋白濃度為75 μg/mL。

1.2 疫苗性狀檢驗和無菌檢驗

按現行《中國獸藥典》[13]附錄進行疫苗性狀檢驗和無菌檢驗。

1.3 安全性檢驗

取3～5日齡雛鵝、7月齡開產種鵝各10羽，接種鵝星狀病毒重組Capsid蛋白亞單位疫苗，雛鵝每羽胸部肌肉注射0.2 mL，種鵝每羽胸部肌肉注射1 mL，每組均另取10羽相同來源、相同日齡的鵝，作為對照組。接種疫苗后7 d、14 d和21 d，每組取3羽鵝進行剖檢，檢查注射部位疫苗吸收情況和病理變化。

1.4 免疫效力試驗

將三批四季種鵝分為免疫組和對照組，在開產前5周，給免疫組種鵝接種三批鵝星狀病毒重組Capsid蛋白亞單位疫苗中的一批疫苗，接種劑量為1 mL/羽，對照組的種鵝不接種疫苗。接種后第2周至第 ? 4周，各組隨機取20羽鵝采集血液，采用瓊脂擴散試驗法檢測GoAs抗體;收集接種疫苗后第4周至第5周種鵝所產鵝蛋，每組40枚，其中10枚采用瓊脂擴散試驗法檢測GoAs抗體，余下的30枚放入38 ℃孵化箱中孵化。29 d～30 d后，各組任選20羽雛鵝，做好區分，飼養至 3日齡，采集雛鵝血液，分離血清，采用瓊脂擴散試驗法檢測GoAs抗體。同時進行攻毒試驗，用GoAsV-LH株F3代攻毒（尿囊液中病毒含量為104.03 ELD50/0.2 mL），每羽雛鵝口服0.5 mL，頸部皮下注射0.5 mL，每組攻毒10羽，剩余為對照組。各組鵝均分別隔離飼養，觀察14 d，記錄發病、死亡及保護情況。

2 ?結果與分析

2.1 疫苗性狀檢驗和無菌檢驗結果

三批疫苗均為乳白色油包水型乳劑。用清潔吸管吸取少量疫苗滴入冷水中，除第一滴外，均不擴散。將疫苗加入10 mL離心管中，以3 000 r/min離心15 min，管底析出水相未超過0.5 mL。無菌檢驗未發現菌落生長。

2.2 疫苗安全性檢驗結果

鵝群注射疫苗后，連續21 d，各組鵝的精神狀況、飲水和進食量均良好;免疫后 7 d、14 d和21 d，觸摸檢查試驗組鵝注射部位無紅腫等局部注射反應;剖檢注射部位，發現疫苗吸收良好，無病理變化。

2.3 鵝星狀病毒重組Capsid蛋白亞單位疫苗的免疫效力

2.3.1 種鵝接種疫苗后血清抗體檢測結果

試驗組鵝接種三批疫苗28 d后，用鵝星狀病毒瓊脂擴散法測得的抗體效價平均值均不低于3.6log2，對照組鵝的抗體均為陰性，具體結果見表1。