子癇前期孕婦血清FGF5、TF水平與妊娠不良結(jié)局的關(guān)系

崔張霞，張娜

子癇前期是妊娠期常見的妊娠疾病，臨床特征為高血壓、蛋白尿等，如不盡早治療，將發(fā)展為子癇，嚴(yán)重影響產(chǎn)婦及胎兒的生命[1]。相關(guān)研究報(bào)道，初產(chǎn)婦子癇前期發(fā)病率為3%～8%，存在子癇前期病史的經(jīng)產(chǎn)婦子癇前期再發(fā)生率為10%～65%[2]。子癇前期會(huì)導(dǎo)致孕婦血壓上升，引起孕婦發(fā)生抽搐、全身痙攣，甚至導(dǎo)致胎盤早剝、胎兒生長受限等，造成圍產(chǎn)期胎兒死亡[3]。因此，發(fā)現(xiàn)與子癇前期孕婦妊娠結(jié)局相關(guān)的指標(biāo)是臨床研究要點(diǎn)。子癇前期發(fā)病機(jī)制尚不清楚，有學(xué)者認(rèn)為子癇前期與胎盤灌注不足、血管內(nèi)皮功能障礙、凝血功能異常等密切相關(guān)[4]。成纖維細(xì)胞生長因子5(fibroblast growth factor 5，F(xiàn)GF5)是成纖維細(xì)胞生長因子之一，Ren等[5]研究報(bào)道，原發(fā)性高血壓患者外周血中FGF5表達(dá)水平顯著上升。組織因子(tissue factor，TF)是血管內(nèi)皮下層及周圍組織的組成成分，在降低血管損傷后出血反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[6]。趙會(huì)榮等[7]研究報(bào)道，TF在妊娠期高血壓患者血清中表達(dá)水平顯著上升。基于此，本研究探究子癇前期孕婦血清FGF5、TF水平與妊娠不良結(jié)局相關(guān)性，早期分析孕婦妊娠結(jié)局，有利于早期對(duì)孕婦行干預(yù)措施，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月—2022年3月在陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院產(chǎn)檢及分娩的子癇前期孕婦72例作為觀察組，均為單胎妊娠，參照“妊娠期高血壓疾病診治指南(2015)”[8]中對(duì)子癇前期病情嚴(yán)重程度判斷標(biāo)準(zhǔn)，將患者分為輕度亞組(n=40)和重度亞組(n=32)。另選擇同期醫(yī)院產(chǎn)科健康的單胎妊娠孕婦78例作為健康對(duì)照組，2組年齡、孕周、BMI、孕次、產(chǎn)次比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(2016-01205)，受試者及其家屬對(duì)本研究均知情同意并自愿簽署知情同意書。

表1 健康對(duì)照組與觀察組孕婦基本資料比較

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》關(guān)于子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；(2)孕前月經(jīng)周期規(guī)律；(3)在本院分娩。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有先兆流產(chǎn)史；(2)妊娠期糖尿病、原發(fā)性高血壓患者；(3)免疫性疾病、肝腎功能嚴(yán)重不全者；(4)人工授精或試管嬰兒的孕婦。

1.3 觀測指標(biāo)與方法

1.3.1 實(shí)時(shí)定量PCR法檢測血清中FGF5表達(dá)水平：子癇前期患者在入組次日，健康對(duì)照組孕婦在產(chǎn)檢當(dāng)日早上抽取空腹靜脈血4 ml，4 000 r/min離心，取血清保存于-80℃?zhèn)錅y。用RNA提取試劑盒(日本Takara公司)提取總RNA，依據(jù)PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(日本Takara公司)指導(dǎo)書反轉(zhuǎn)錄得到cDNA。采用StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國ABI公司)對(duì)血清中FGF5及內(nèi)參GAPDH進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。FGF5引物序列：上游引物5’-CCCACGAAGCCAGTGTGTTA-3’，下游引物5’-ATCGCGGACGCATAGGTATT-3’。GAPDH引物序列：上游引物5’-AAGGTCATCCCAGAGCTGAA-3’，下游引物5’-CTGCTTCACCACCTTCTTGA-3’。反應(yīng)條件：95℃ 5 min，95℃ 30 s，56℃ 30 s，72℃ 30 s，36個(gè)循環(huán)。FGF5相對(duì)表達(dá)量用2-△△CT法計(jì)算。

1.3.2 血清TF水平檢測：上述血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清TF水平，試劑盒購于英國abcam公司，利用酶標(biāo)儀(美國Thermo Scientific公司)于450 nm處測定吸光度，計(jì)算血清TF水平。

1.3.3 凝血功能指標(biāo)檢測：收集子癇前期患者在入組次日清晨空腹靜脈血3 ml。采用全自動(dòng)血凝儀(美國Beckman Coulter公司)檢測血漿中活化部分凝血酶原時(shí)間(activated partial thromboplastin time，APTT)、纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)ib)、凝血酶原時(shí)間(prothrombin time，PT)、血小板(platelets，PLT)水平。

1.3.4 隨訪情況：隨訪所有子癇前期患者至妊娠結(jié)束，記錄圍生兒預(yù)后情況，不良妊娠結(jié)局包括孕婦不良結(jié)局及胎兒、新生兒不良結(jié)局。孕婦不良結(jié)局：發(fā)展為子癇、重要器官衰竭、胎盤早剝、死亡等；胎兒不良結(jié)局：生長受限、羊水過少、死胎等；新生兒不良結(jié)局：新生兒窒息、死亡等。

2 結(jié) 果

2.1 2組血清FGF5、TF水平比較 與健康對(duì)照組比較，觀察組血清FGF5、TF水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表2。

表2 健康對(duì)照組與觀察組血清FGF5、TF水平比較

2.2 輕度亞組與重度亞組血清FGF5、TF水平比較 與輕癥亞組比較，重癥亞組血清FGF5、TF水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表3。

表3 輕度亞組與重度亞組血清FGF5、TF水平比較

2.3 不良妊娠結(jié)局亞組和妊娠結(jié)局良好亞組臨床資料比較 本組子癇患者中，不良妊娠結(jié)局22例，妊娠結(jié)局良好50例。與妊娠結(jié)局良好亞組比較，不良妊娠結(jié)局亞組APTT、PT、PLT水平降低(P<0.01)，F(xiàn)ib、FGF5、TF表達(dá)水平升高(P<0.01)，見表4。

表4 妊娠結(jié)局良好亞組和不良妊娠結(jié)局亞組臨床資料比較

2.4 子癇前期孕婦血清FGF5、TF與血漿凝血指標(biāo)相關(guān)性分析 Pearson分析顯示，子癇前期患者血清中FGF5、TF與APTT、PT、PLT呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)，與Fib呈正相關(guān)(P<0.01)，見表5。

表5 血清FGF5、TF與血漿凝血指標(biāo)相關(guān)性分析

2.5 Logistic回歸分析影響不良妊娠結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素 將子癇前期患者妊娠結(jié)局作為因變量(妊娠結(jié)局良好=0，不良妊娠結(jié)局=1)，將FGF5、TF、APTT、PT、Fib、PLT作為自變量，Logistic回歸分析顯示，F(xiàn)GF5高、TF高、Fib高、PLT低是子癇前期孕婦不良妊娠結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表6。

表6 Logistic回歸分析影響不良妊娠結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素

3 討 論

子癇前期早期表現(xiàn)為全身血管痙攣，血管阻力和血壓迅速上升，隨時(shí)可能危害孕婦生命安全，若病情嚴(yán)重時(shí)未立即終止妊娠，易導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局，如胎兒生長受限、死產(chǎn)等[10]。子癇前期孕婦由于體內(nèi)血管內(nèi)皮損傷及小血管痙攣引起凝血功能發(fā)生顯著變化，機(jī)體處于高凝狀態(tài)[11-12]。孕婦凝血系統(tǒng)異常最直接的表現(xiàn)是凝血指標(biāo)異常，凝血系統(tǒng)異常易引起整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)出現(xiàn)不同程度的供血障礙，機(jī)體組織器官也發(fā)生供血障礙，組織血氧供應(yīng)不足，給孕婦帶來較大的危險(xiǎn)[13]。因此，尋找可靠的檢測指標(biāo)預(yù)測子癇前期孕婦妊娠結(jié)局，有利于早期對(duì)孕婦行干預(yù)措施。

目前，大部分學(xué)者認(rèn)為子癇前期發(fā)病的基礎(chǔ)是妊娠期孕婦凝血功能的改變[14]。APTT、PT水平低表示子癇前期孕婦處于高凝狀態(tài)，易發(fā)生微血栓、微血管堵塞。Fib直接參與凝血過程，其水平升高說明機(jī)體纖溶活性降低，形成血栓的風(fēng)險(xiǎn)增加；另外，F(xiàn)ib可促進(jìn)血小板聚集﹑黏附，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷[13]。妊娠合并血小板減少通常會(huì)引起患者貧血、胎兒早產(chǎn)、新生兒貧血等不良后果，嚴(yán)重時(shí)威脅母嬰生命[15]。本研究顯示，與妊娠結(jié)局良好亞組相比，不良妊娠結(jié)局亞組血漿APTT、PT、PLT水平降低，血漿Fib水平升高，提示子癇前期患者存在凝血功能亢進(jìn)、抗凝血功能降低，患者處于血管內(nèi)凝血的高凝期[16]。

本研究顯示，觀察組血清FGF5、TF水平顯著高于健康對(duì)照組，重度亞組血清FGF5、TF水平明顯高于輕度亞組，提示血清FGF5、TF可能影響子癇前期發(fā)生及發(fā)展。本研究顯示，不良妊娠結(jié)局亞組血清FGF5、TF水平顯著高于妊娠結(jié)局良好亞組，提示血清FGF5、TF可能影響子癇前期妊娠結(jié)局。TF是組織凝血活酶或凝血因子Ⅰ，是生理性凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)的主要啟動(dòng)因子，血管內(nèi)皮損傷時(shí)可大量釋放入血，啟動(dòng)凝血過程，促使血栓形成[17]。TF在生理和病理性止血過程中作為機(jī)體內(nèi)最強(qiáng)的促凝物質(zhì)之一，在外源性凝血途徑中，與凝血因子Ⅵ、凝血因子Ⅹ結(jié)合并使其激活，促進(jìn)凝血酶原生成凝血酶，進(jìn)而啟動(dòng)血液凝固級(jí)聯(lián)反應(yīng)[18]。趙會(huì)榮等[7]研究顯示，妊娠高血壓患者血清中TF與APTT、PT呈密切負(fù)相關(guān)。FGF5屬于成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)家族，F(xiàn)GF5由268個(gè)氨基酸組成，具有28個(gè)高度保守的氨基酸殘基，其中10個(gè)高度保守的氨基酸殘基可與FGF受體結(jié)合[19]。全基因組關(guān)聯(lián)分析報(bào)告顯示，F(xiàn)GF5基因內(nèi)部是原發(fā)性高血壓的易感區(qū)域[20]。另外有研究報(bào)道，F(xiàn)GF5可促進(jìn)人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(HAEC)的血管生成，且HAEC中的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-A可刺激FGF5表達(dá)水平顯著升高[21]。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，子癇前期患者FGF5、TF與APTT、PT、PLT、Fib密切相關(guān)，提示血清FGF5、TF可能通過影響子癇前期患者體內(nèi)凝血功能進(jìn)而影響子癇前期孕婦妊娠結(jié)局。Logistic回歸分析顯示，F(xiàn)GF5高、TF高、Fib高、PLT低是子癇前期孕婦不良妊娠結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示除Fib、PLT外，F(xiàn)GF5、TF也是子癇前期孕婦不良妊娠結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

綜上所述，子癇前期孕婦血清FGF5、TF水平顯著升高，是子癇前期孕婦不良妊娠結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

崔張霞：研究設(shè)計(jì)，論文撰寫；張娜：資料收集，數(shù)據(jù)分析，論文修改