血清miR-214、miR-143在急性髓性白血病中的表達(dá)水平及與疾病復(fù)發(fā)的關(guān)系

羅婷，劉麗，饒琦，巫涵，沈愷

急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)是指髓系造血干細(xì)胞、祖細(xì)胞發(fā)生分化障礙，惡性克隆性增生導(dǎo)致的惡性腫瘤，具有高度異質(zhì)性[1-2]。AML一旦發(fā)生，病情惡化可能引發(fā)患者出現(xiàn)嚴(yán)重感染、出血和器官浸潤(rùn)等一系列癥狀，導(dǎo)致患者預(yù)后效果差，易出現(xiàn)復(fù)發(fā)等現(xiàn)象[3]。因此，探究AML復(fù)發(fā)的影響因素對(duì)提高患者預(yù)后生活質(zhì)量具有重要的意義。研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA(miRNA)調(diào)控機(jī)體約30%的基因表達(dá)，作為促癌基因或抑癌基因參與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展過程[4]。大量研究表明，miR-214在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)，如在乳腺癌、胃癌和胰腺癌等腫瘤中呈高表達(dá)，在宮頸癌和食管鱗癌等腫瘤中呈低表達(dá)[5-6]。miR-143在胃癌、乳腺癌等惡性腫瘤中亦有異常表達(dá)，參與并調(diào)控細(xì)胞因子及相關(guān)通路表達(dá)[7]。目前，miR-214和miR-143在AML中的作用研究較少，因此，本研究檢測(cè)AML患者血清miR-214、miR-143的表達(dá)水平，并分析二者與AML治療后復(fù)發(fā)的關(guān)系，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年1月—2021年4月四川大學(xué)華西醫(yī)院血液內(nèi)科治療的AML患者94例作為研究對(duì)象(AML組)，男48例，女46例，年齡44～73(58.37±12.41)歲。按照AML患者治療后1年內(nèi)是否復(fù)發(fā)分為AML緩解亞組60例和AML復(fù)發(fā)亞組34例，另選擇同期醫(yī)院體檢的健康者50例作為健康對(duì)照組，男28例，女22例，年齡45～78(59.18±12.59)歲。2組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(201811-21)，受試者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)診斷標(biāo)準(zhǔn)：復(fù)發(fā)診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)“復(fù)發(fā)難治性急性髓系白血病中國(guó)診療指南(2017年版)”中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[8]。(2)納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合世界衛(wèi)生組織關(guān)于AML的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；②AML患者之前未接受過放療、化療和分子靶向治療；③患者均首次診斷為AML，且臨床資料和隨訪資料完整。(3)排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有嚴(yán)重感染者；②伴有嚴(yán)重肝腎功能不全等患者；③伴有嚴(yán)重心力衰竭或免疫缺陷患者；④伴有惡性腫瘤等相關(guān)疾病的患者。

1.3 觀測(cè)指標(biāo)與方法

1.3.1 血清miR-214、miR-143表達(dá)水平檢測(cè)：健康對(duì)照組體檢時(shí)、AML患者入院時(shí)采集空腹肘靜脈血4～6 ml，離心留取血清置于-80℃保存?zhèn)溆谩２捎脤?shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)血清中miR-214、miR-143相對(duì)表達(dá)量。使用RNA提取試劑盒(北京百泰克生物技術(shù)有限公司)提取各組血清中總RNA，然后將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒(武漢默沙克生物科技有限公司)操作說明進(jìn)行操作。引物序列見表1，以U6作為內(nèi)參基因，采用2-△△Ct值表示相對(duì)表達(dá)水平。

表1 miR-214、miR-143 PCR反應(yīng)引物序列

1.3.2 實(shí)驗(yàn)室相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)：采用BC-5000全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)，檢測(cè)AML患者入院時(shí)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血紅蛋白(Hb)和血小板計(jì)數(shù)(PLT)。采用BS-830型全自動(dòng)生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)，檢測(cè)AML患者入院時(shí)總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)表達(dá)水平，檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自美康生物科技股份有限公司。

2 結(jié) 果

2.1 2組血清miR-214、miR-143表達(dá)水平比較 AML組患者血清miR-214表達(dá)水平高于健康對(duì)照組，miR-143表達(dá)水平低于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表2。

表2 健康對(duì)照組與AML組血清miR-214、miR-143表達(dá)水平比較

2.2 2亞組血清miR-214、miR-143表達(dá)水平比較 復(fù)發(fā)亞組AML患者血清miR-214表達(dá)水平高于緩解亞組，miR-143表達(dá)水平低于緩解亞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表3。

表3 AML緩解亞組和復(fù)發(fā)亞組血清miR-214、miR-143表達(dá)水平比較

2.3 緩解亞組和復(fù)發(fā)亞組AML患者臨床資料比較 復(fù)發(fā)亞組AML患者WBC高于緩解亞組，Hb、PLT水平低于緩解亞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，2亞組患者性別、年齡、體質(zhì)量、病程、吸煙史、飲酒史、家族遺傳史、基礎(chǔ)病、疾病分型、脾腫大、TC、TG、HDL-C和LDL-C等指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表4。

2.4 血清miR-214、miR-143水平與AML患者復(fù)發(fā)的關(guān)系分析 Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示，AML患者復(fù)發(fā)與血清miR-214表達(dá)呈正相關(guān)，與血清miR-143表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r/P=0.584/<0.001,-0.428/<0.001)。

2.5 多因素Logistic回歸分析AML患者治療復(fù)發(fā)的影響因素 以AML患者復(fù)發(fā)為因變量(復(fù)發(fā)=1，緩解=0)，以上述單因素分析中具有顯著性差異的指標(biāo)為自變量，WBC、Hb、PLT、miR-214和miR-143水平均為連續(xù)變量。多因素Logistic回歸分析顯示，WBC高、miR-214高為AML患者復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，而Hb高、PLT高、miR-143高為其保護(hù)因素(P<0.05)，見表5。

表5 多因素Logistic回歸分析AML患者復(fù)發(fā)的影響因素

2.6 血清miR-214、miR-143水平預(yù)測(cè)AML復(fù)發(fā)的價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清miR-214、miR-143及二者聯(lián)合預(yù)測(cè)AML復(fù)發(fā)的曲線下面積為0.765、0.886、0.938，二者聯(lián)合預(yù)測(cè)AML復(fù)發(fā)的效能優(yōu)于血清miR-214、miR-143單獨(dú)預(yù)測(cè)(Z/P=3.318/0.002, 2.342/0.019)，見表6、圖1。

表6 血清miR-214、miR-143水平預(yù)測(cè)AML復(fù)發(fā)的價(jià)值比較

圖1 血清miR-214和miR-143水平對(duì)AML患者復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)效能

3 討 論

AML是最為常見的急性白血病之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，成年人患急性白血病類型中80%～90%為AML[10]。AML發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、發(fā)病急、病情進(jìn)展快且易復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響患者預(yù)后生活質(zhì)量[11]。AML主要發(fā)病特點(diǎn)是患者造血干細(xì)胞功能出現(xiàn)障礙，臨床癥狀主要表現(xiàn)為乏力、貧血、細(xì)菌感染和發(fā)熱等，嚴(yán)重者還會(huì)出現(xiàn)肝、脾和淋巴結(jié)腫大[12]。目前，AML患者主要采用化療和干細(xì)胞移植的手段進(jìn)行治療，但大約有70%的患者在治療后會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)現(xiàn)象，隨著病情惡化發(fā)展為難治性白血病，威脅患者生命健康[13]。因此，尋找AML復(fù)發(fā)的影響因素進(jìn)行及時(shí)干預(yù)治療對(duì)改善患者預(yù)后生活質(zhì)量具有重要的意義。沈宏宇等[14]研究顯示，AML復(fù)發(fā)患者血清WBC水平顯著高于緩解患者，Hb、PLT水平顯著低于緩解患者。本研究顯示，與緩解亞組比較，AML復(fù)發(fā)亞組患者WBC水平更高，Hb、PLT水平更低，與上述研究結(jié)果一致。

miRNA是一類內(nèi)源性非編碼的小分子單鏈RNA，在機(jī)體內(nèi)廣泛且穩(wěn)定存在，具有高度保守性、表達(dá)階段特異性和組織特異性等特點(diǎn)[15-17]。miRNA在體內(nèi)的主要作用方式是其與靶基因mRNA的3'-UTR互補(bǔ)配對(duì)，降解mRNA或抑制翻譯過程，另一方面，miRNA可以與5'-UTR、編碼序列及基因啟動(dòng)子的mRNA序列相互作用[18-20]。正常情況下，miRNA穩(wěn)定存在于機(jī)體各個(gè)組織部位，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)編碼基因的表達(dá)，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎性反應(yīng)、腫瘤、心腦血管疾病等各類疾病時(shí)，相應(yīng)的miRNA就會(huì)出現(xiàn)異常表達(dá)，可作為相關(guān)疾病診斷治療的臨床生物性指標(biāo)[21]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，miRNA的異常表達(dá)參與并影響AML的發(fā)生與發(fā)展，AML屬于遺傳學(xué)高度異質(zhì)性疾病，體內(nèi)約有200種染色體異常，miRNA的異常表達(dá)與染色體異常密切相關(guān)[22]。miR-214在多種腫瘤組織中異常表達(dá)，可能參與腫瘤疾病的發(fā)展，miR-214在不同類型疾病中存在異質(zhì)性，既可作為致癌基因發(fā)揮作用，也可作為抑癌基因緩解疾病的發(fā)展[23]。miR-214在機(jī)體內(nèi)可調(diào)控細(xì)胞的凋亡過程，影響細(xì)胞增殖并對(duì)細(xì)胞的耐藥性產(chǎn)生影響[24]。王中平等[25]研究發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌(ESCC)患者血漿miR-214水平較健康者明顯上調(diào)，其水平變化與ESCC分期密切相關(guān)，ROC曲線分析顯示其可作為ESCC診斷的分子標(biāo)志物。本研究顯示，與健康人群比較，AML患者血清miR-214表達(dá)明顯上調(diào)，其變化趨勢(shì)與ESCC疾病中miR-214表達(dá)變化一致，此外研究還發(fā)現(xiàn)，miR-214表達(dá)與AML患者復(fù)發(fā)呈正相關(guān)，與緩解亞組比較，復(fù)發(fā)亞組miR-214表達(dá)明顯上升，提示miR-214水平變化與AML患者治療后復(fù)發(fā)情況密切相關(guān)。

miR-143位于5q33染色體上，具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體，在多種腫瘤組織中呈低表達(dá)狀態(tài)，如直腸癌、乳腺癌和卵巢癌等[26]。miR-143通過參與細(xì)胞增殖、分化和凋亡等過程發(fā)揮作用，影響多種疾病的發(fā)生發(fā)展[27]。姚金曉等[28]研究顯示，AML患者血漿和細(xì)胞系中miR-143表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)，miR-143過表達(dá)可顯著抑制人髓性白血病細(xì)胞HL60細(xì)胞的遷移和侵襲能力。本研究顯示，與健康人群比較，AML患者血清miR-143表達(dá)水平明顯下調(diào)，與既往研究結(jié)果一致。此外研究還發(fā)現(xiàn)，miR-143表達(dá)與AML患者復(fù)發(fā)呈負(fù)相關(guān)，與緩解亞組比較，復(fù)發(fā)亞組miR-143表達(dá)明顯下調(diào)，提示miR-143可能作為抑癌因子參與AML的發(fā)生與發(fā)展，其水平變化與AML患者復(fù)發(fā)情況密切相關(guān)。

綜上所述，AML患者血清miR-214水平上調(diào)，miR-143水平下調(diào)，兩者均與AML患者復(fù)發(fā)有關(guān)，二者聯(lián)合檢測(cè)可提高對(duì)AML患者復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值，有利于臨床判斷AML患者預(yù)后情況。但本研究未深入探討兩者影響AML復(fù)發(fā)的作用機(jī)制，后續(xù)需進(jìn)一步設(shè)計(jì)試驗(yàn)進(jìn)行研究。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

羅婷：設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過程，論文撰寫；劉麗、沈愷：實(shí)施研究過程，資料搜集整理，論文修改;饒琦：提出研究思路，論文審核;巫涵：分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理