水杯壁微生物污染程度及預防措施分析

胡明翠

（安順職業(yè)技術學院，貴州 安順 561000）

在人們對健康意識有了更多關注和關心后，加之人們的生活和生產(chǎn)質(zhì)量更高，因此，對于飲用水的安全要求也提出了更高的要求。水是最普通的資源，但卻是人類生存的必需品。如果一個人連續(xù)不喝水的天數(shù)在3 天以上7 天以下，那么人體缺少的水量達到20%后，血液就會出現(xiàn)高度濃縮的狀態(tài)，以至于不能像正常人體一樣進行氧化、還原、分解、合成等生命活動，就會導致死亡。并且大量的專家、醫(yī)學學者也對人類每天的飲水需求做出了一個科學的指標，比如每天8 杯水的概念。在生活中為了飲水方便，大部分人飲水時會使用水杯，尤其在冬季時還會使用保溫杯，以及為了實現(xiàn)保健功能也會在日常使用保溫杯[1]。下文就水杯壁微生物污染程度及預防措施展開詳細分析。

本次研究的目的：通過研究水杯壁微生物的污染程度及比較流水沖洗法（A 組）、酒精浸泡法（B 組）、煮沸消毒法（C 組）三種不同消毒方法效果差異，為健康飲水的生活方式提供依據(jù)，為水杯的消毒方法提供參考，為新型水杯的設計提供新思路。

本次研究使用的方法：選取安順職業(yè)技術學院應用醫(yī)藥系醫(yī)學檢驗技術專業(yè)2021 級學生使用的60 個水杯為研究對象，按照完全隨機的方法選取60 個受試對象（水杯）進行細菌培養(yǎng)、鑒定；而后將其隨機分為3 組（A、B、C），每組20 個水杯，通過不同消毒方法消毒后，經(jīng)細菌培養(yǎng)72h 后測定菌落數(shù)，并對消毒后微生物陽性率進行比較，比較每組的清洗消毒效果。

本次研究所獲得結果：（1）清洗消毒前微生物陽性率：A、B、C 三組清洗消毒前細菌陽性率最高為100.0%，最低為90.0%，陽性率分別為95.0%、100.0%、90.0%，通過X2 檢驗得出，三組陽性率比較差別并沒有統(tǒng)計學上的明顯意義（P ＞0.05）。（2）在采集檢測的60 份樣品中，革蘭陽性菌葡萄球菌污染45 個，染菌率為75.00%；革蘭陰性菌大腸桿菌污染32 個，染菌率為53.33%；革蘭陰性菌變形桿菌污染21 個，染菌率為35%；革蘭陽性鏈球菌污染9 個，染菌率為15.00%。（3）清洗消毒前微生物陽性率：A、B、C 三組清洗消毒前細菌陽性率最高為60.0%，最低為5.0%，陽性率分別為65.0%、50%、15.0%，通過X2 檢驗得出，三組陽性率比較差別有統(tǒng)計學上的明顯意義（P ＞0.05）。（4）三組受檢對象清洗消毒后水杯微生物菌落計數(shù)結果分別為15.34cfu/cm2、1.03cfu/cm2、2.24cfu/cm2，A 組清洗消毒無效，B、C 兩組清洗消毒有效。

本次研究得出的結論：超過九成的醫(yī)學生水杯上會攜帶常見微生物。水杯這種日常用品已經(jīng)被醫(yī)學生帶入了特殊實驗室環(huán)境，可能成為引起交叉污染的傳染源。通過實驗數(shù)據(jù)顯示在清洗消毒方法上，酒精消毒、高溫滅菌的方式對水杯上殘留的微生物進行殺滅，具有良好的消毒效果。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取安順職業(yè)技術學院應用醫(yī)藥系醫(yī)學檢驗技術專業(yè)2021 級學生使用的60 個水杯為研究對象，并且靈活使用完全隨機法，將60 個研究對象分成了A、B、C 三組，并且每組的數(shù)量都保持20 個。

入選標準：（1）一律采用帶蓋水杯；（2）水杯使用超過兩個月；（3）水杯無破損。

1.2 實驗方法

1.2.1 對水杯壁微生物污染程度進行確認

對60 個水杯的水杯壁進行樣本采集，用消毒棉簽沾取無菌生理鹽水反復涂抹水杯壁（約1cm2）周圍五次，放入1ml 的生理鹽水中，進行稀釋，并將稀釋的菌懸液（1ml）傾倒在瓊脂平板上，然后將其保持在恒溫的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；當培養(yǎng)到僅用肉眼觀察到的菌落時，就要第一時間進行計數(shù)，正式計數(shù)前要提前挑取菌落并對其進行革蘭染色，首先是要細致觀察它的形態(tài)，其次要仔細鑒定它的菌屬，若發(fā)現(xiàn)其呈現(xiàn)出藍紫色的狀態(tài)，那么可以將其命名為“革蘭陽性菌”，如果呈現(xiàn)出紅色，則稱其為“革蘭陰性菌”。另外，通過觀察，還可以見葡萄球菌種，也是水杯壁微生物的主要組成[2]。細菌總數(shù)計數(shù)方法按照衛(wèi)生部《消毒技術規(guī)范》要求進行檢測，評價標準為≤10CFU/cm2。最終計算出每平方厘米水杯的菌落數(shù)CFU/cm2。[3]

1.2.2 各組操作方法

1.流水沖洗法（A 組）。對20 個水杯進行流水（自來水）沖洗2min，在相應的時間取樣進行細菌懸液的制備，并進行稀釋，在瓊脂平板上將稀釋的菌懸液（1ml）傾倒在上面，要保持在恒溫的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；當培養(yǎng)到可以用肉眼看到的菌落時，要第一時間進行計數(shù)，但在正式計數(shù)之前，要提前挑取菌落進行革蘭染色，要注意兩點：第一點是對它的形態(tài)細致觀察，第二點是對它的菌屬做好鑒定。

2.酒精浸泡法（B 組）。對20 個水杯進行酒精（75%濃度的消毒酒精）浸泡2min，在相應的時間取樣進行細菌懸液的制備，進行稀釋，將稀釋的菌懸液（1ml）傾倒在瓊脂平板上，保持所培養(yǎng)的培養(yǎng)箱是恒溫的；當培養(yǎng)到菌落用肉眼就可以觀察到時，就要第一時間進行計數(shù)，要注意的是在正式計數(shù)前，要提前挑取菌落進行革蘭染色，一方面要細致觀察它的形態(tài)，另一方面要仔細鑒定它的菌屬。

3.煮沸消毒法（C 組）。對20 個水杯進行煮沸消毒2min，在相應的時間取樣進行細菌懸液的制備，進行稀釋，將稀釋的菌懸液（1ml）傾倒在瓊脂平板上，要讓其在恒溫的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；當培養(yǎng)到可以用肉眼看到菌落的程度時，要第一時間進行計數(shù)，要提前挑取菌落進行革蘭染色之后才能進行計數(shù)，既要細致觀察它的形態(tài)外，同時還要注意仔細鑒定它的菌屬。

1.2.3 采樣時間

A、B、C 三組受試對象要在清理消毒之前進行一次采樣，清洗消毒后采樣一次，在采樣過程中，采取的水杯都要實行隨機采樣。

1.2.4 采樣方法

按照《消毒技術規(guī)范》規(guī)定的采樣方法進行采樣：用浸有無菌生理鹽水的棉拭子在水杯壁內(nèi)側面往返涂擦2 次（面積約1cm2）……標本在統(tǒng)一編號后立即送檢。

1.2.5 細菌檢測方法

將采樣管在混勻器上振蕩20s 或用力振打80 次……計數(shù)菌落數(shù)（colony forming unit，cfu）。水杯清洗消毒后仍存在的細菌按照革蘭染色法進行菌屬鑒定。

菌落數(shù)計算公式：細菌總數(shù)（cfu/cm2）=平板上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)/采樣面積（cm2）

1.2.6 判斷標準

消毒效果：參照《消毒技術規(guī)范》消毒后細菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌等為消毒合格。

1.2.7 統(tǒng)計學方法

在數(shù)據(jù)分析時使用統(tǒng)計學方法，如果P＜0.05，則意味著其差異具有統(tǒng)計學上的顯著意義。

2 結果

2.1 一般資料

本次研究受試對象共60 個飲水杯，其中玻璃杯25個，占41.7%，保溫杯35 個，占58.4%，男生使用水杯30 個，占50%，女生使用水杯30 個，占50%。

2.2 清洗消毒前微生物陽性率比較

A、B、C三組清洗消毒前細菌陽性率最高為100.0%，最低為90.0%，通過X2檢驗得出，三組陽性率比較差別無統(tǒng)計學意義（P=0.3490＞0.05），組間比較沒有差別，具有可比性，結果見表1。

表1 清洗消毒前微生物陽性率比較

2.3 清洗消毒前水杯微生物污染情況

在采集檢測的60 份樣品中,革蘭陽性菌葡萄球菌污染45 個，染菌率為75.00%；革蘭陰性菌大腸桿菌污染32 個，染菌率為53.33%；革蘭陰性菌變形桿菌污染21 個，染菌率為35%；革蘭陽性鏈球菌污染9 個，染菌率為15.00%，見表2。

表2 清洗消毒前水杯微生物污染情況

2.4 清洗消毒后水杯微生物陽性率比較

A、B、C 三組清洗消毒后細菌陽性率最高為60.0%，最低為5.0%，通過X2檢驗得出，三組陽性率比較差別有統(tǒng)計學意義（P=0.0153＜0.05），結果見表3。

表3 清洗消毒后微生物陽性率比較

2.5 清洗消毒后水杯微生物菌落計數(shù)結果

A、B、C 三組清洗消毒后菌落計數(shù)結果及效果評價，結果見表4。

表4 清洗消毒后各組菌落計數(shù)

3 討論

3.1 水杯微生物污染狀況

以2021 級醫(yī)學檢驗技術專業(yè)學生使用的水杯為研究對象，采用隨機抽樣的方法進行樣本采樣，在培養(yǎng)皿上進行分離培養(yǎng)，通過鑒定，檢測是否存在微生物污染的現(xiàn)象，利用細菌革蘭染色結果的不同，鑒定細菌為革蘭陰性或者革蘭陽性菌，根據(jù)實驗結果以及調(diào)查報告不難看出，飲水杯的污染較為嚴重，大部分水杯未得到有效的清洗消毒，微生物污染陽性率較高，其中以葡萄球菌最為嚴重，水杯污染個數(shù)為45 個，染菌率為75%；其次是大腸桿菌，水杯污染個數(shù)為32 個，染菌率為53.33%；變形桿菌和鏈球菌污染較少，但也存在一定程度的污染。

3.2 三種消毒方法的結果可行性

通過對三種清洗消毒法進行實驗，從結果不難發(fā)現(xiàn)A 組（流水沖洗法）的效果不明顯，原因可能在于自來水中存在微生物，用該法清洗還是會導致微生物污染，使得菌落計數(shù)＞10cfu/cm2，而B 組和C 組分采用的是酒精浸泡法和煮沸消毒法，通過酒精消毒、高溫滅菌的方式對水杯上殘留的微生物進行殺滅，具有良好的消毒效果。

4 結論

綜上所述，水杯這一日常生活用品已經(jīng)被部分醫(yī)學生攜帶進了特殊的實驗室環(huán)境，90%以上的醫(yī)學生的水杯上會攜帶一些常見微生物，比如葡萄球菌等，這便是交叉污染的一個傳染源[4]。結合這些過程與結論，要更加積極地深化相關健康知識的普及，逐步提高國人的健康防護意識，摒棄不良的生活行為習慣，倡導科學健康的飲水習慣，選擇更有效、更科學的清洗消毒方法。要進一步加強對水杯清潔衛(wèi)生的學習培訓，讓學生對自己所用的水杯進行生物檢測，親手取樣、檢測，直觀地了解病原體的形狀及不同病原體對身體的影響與危害，從思想源頭上提升學生的健康意識與清潔意識[5]。通過上文實驗數(shù)據(jù)顯示，在清洗消毒方法上，酒精消毒以及高溫滅菌的方式對水杯上殘存的微生物進行殺滅，具有更好的消毒效果。