五味子及其炮制品揮發(fā)油成分差異研究

李曉霞，劉忠英，劉舒，孫嚴(yán)彤，劉曉，汪戎錦※

（1.吉林大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130021；2.中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所，吉林省中藥化學(xué)與質(zhì)譜重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林 長(zhǎng)春 130022）

五味子[Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.]為木蘭科的一種藥用植物，多以其干燥成熟果實(shí)入藥[1]。藥理學(xué)研究表明，五味子具有肝臟、神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的保護(hù)作用，能夠調(diào)節(jié)血糖和血脂[2]、增強(qiáng)免疫力起到抗癌和抗病毒等藥理作用[3-6]。五味子的現(xiàn)代炮制方法多以蒸制、鹽制、蜜制、醋制和酒制等應(yīng)用于臨床[7,8]。五味子中化學(xué)成分復(fù)雜，在炮制過程中會(huì)受到不同因素的影響從而使多種化學(xué)成分發(fā)生改變[9-12]。作為五味子最主要的活性成分之一，五味子揮發(fā)油因其具有良好的鎮(zhèn)咳作用及中樞神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用而被廣泛應(yīng)用[13,14]。研究表明，五味子果實(shí)和種子中含有的揮發(fā)油主要為萜類及少量的酸、醇等含氧成分[15]，經(jīng)過炮制后可能會(huì)產(chǎn)生一定的含量及成分差異，而目前研究者對(duì)五味子及其炮制品中揮發(fā)油類成分差異研究較少。因此，本文采取優(yōu)化的五味子炮制工藝，制備蒸五味子、鹽五味子和蜜五味子，并采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法對(duì)五味子及其3種炮制品中的揮發(fā)油類成分進(jìn)行初步研究，為闡明中藥功效、提升五味子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和臨床合理用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材、試劑及儀器

五味子（吉林省北藥藥材加工有限公司，批號(hào)：20180821）；甲醇（天津新通精細(xì)化工有限公司）；蜂蜜（北京同仁堂蜂產(chǎn)品有限公司）；精制食用鹽（上海市鹽業(yè)有限公司）。DFT-200手提式高速萬能粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）；SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；Milli-Q Gradient A10超純水系統(tǒng)（美國(guó)Millipore Inc.）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；TSQ8000三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)Thermo）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 五味子炮制品制備對(duì)五味子炮制方法進(jìn)行優(yōu)化，并制備蒸五味子、鹽五味子及蜜五味子炮制品。蒸五味子：取五味子待炮制品10 g，加入清水10 mL，拌勻、潤(rùn)透，置于適宜的蒸制容器內(nèi)，蒸汽加熱蒸制3 h，取出，稍晾，拌回蒸液，干燥；鹽五味子：將食鹽加適量水溶解為1%鹽水，濾過，備用。取五味子待炮制品10g，加入備好的1%鹽水10 mL，拌勻，悶潤(rùn)1 h，置于炒制容器內(nèi)，80℃，炒制60 s，取出，放涼；蜜五味子：將煉蜜加適量沸水稀釋為10%蜜水，備用。取五味子待炮制品10g，加入備好的10%蜜水10mL，拌勻，悶潤(rùn)1h。置于炒制容器內(nèi)，80℃，炒制60 s，取出，放涼。

1.2.2 五味子揮發(fā)油類成分提取方法精密稱取供試品100 g，粉碎，過50目篩，置燒瓶中，以1:10的液料比，加入蒸餾水1 000 mL，振搖混合后，將揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管連接。從冷凝管上端加水使其將揮發(fā)油測(cè)定器的具有刻度部分充滿至溢入燒瓶時(shí)為止。置于電熱套中緩緩加熱至沸騰，并保持微沸狀態(tài)約5 h，直至揮發(fā)油測(cè)定器中提取出的揮發(fā)油的量不再增加，停止加熱，靜置片刻后開啟揮發(fā)油測(cè)定器下端活塞，緩緩將水放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面5 mm處為止。放置1h以上，再開啟活塞使油層下降至其上端剛好與0刻度線平齊，讀取揮發(fā)油總量，并計(jì)算供試品中揮發(fā)油的含量（%）。

1.2.3 揮發(fā)油類成分測(cè)定方法GC-MS色譜條件：選用TG-5MS（30 m 0.25 mm，0.25m）色譜柱；升溫程序：柱起始溫度40℃，并保持5 min，以2℃/min程序升溫至200℃，保持1 min，再以程序升溫至250℃；總分析時(shí)間為90 min；進(jìn)樣口溫度230℃；載氣為高純N2；載氣流速為1.3 mL/min；進(jìn)樣量為0.4L；分流比為20:1。

GC-MS質(zhì)譜條件：EI電離源：離子源溫度230℃；四極桿溫度150℃；電離電壓70eV；倍增器電壓1341V；發(fā)射電流34.6A；質(zhì)譜接口溫度280℃；溶劑延遲6 min；全掃描模式：質(zhì)量掃描范圍為m/z:20~500 Da。

將提取后的五味子揮發(fā)油用甲醇稀釋5 000倍后，采用GC-MS法進(jìn)行測(cè)定。利用G1701BA化學(xué)工作站，結(jié)合檢索NIST08標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫及相關(guān)文獻(xiàn)確定揮發(fā)性成分。

2 結(jié)果與分析

2.1 五味子及其炮制品揮發(fā)油提取率測(cè)定

采用水蒸氣蒸餾法提取五味子揮發(fā)油，并對(duì)提取的揮發(fā)油進(jìn)行提取率計(jì)算。五味子、蒸五味子、鹽五味子和蜜五味子中揮發(fā)油的提取率分別為1.40%、0.85%、1.27%和1.31%。其中，蒸五味子揮發(fā)油提取率最低。

2.2 五味子及其炮制品揮發(fā)油成分分析

采用GC-MS對(duì)五味子及其3種炮制品的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，圖1表示各樣本中提取揮發(fā)油的總離子流圖。為了更加直觀清晰地觀察揮發(fā)油組分GC-MS總離子流圖中每一個(gè)色譜峰，將圖1分成圖2（0~45min）和圖3（45~90 min），并在圖中注明峰號(hào)。

圖1 五味子揮發(fā)油組分的總離子流圖Fig.1 Total ion current chromatograms of volatile oil components of Schisandra chinensis and its processed products

圖2 五味子揮發(fā)油組分0~45 min的總離子流圖Fig.2 Total ion current chromatograms of volatile oil components of Schisandra chinensis and its processed products in the retention time of 0~45 min

圖3 五味子揮發(fā)油組分45~90 min的總離子流圖Fig.3 Total ion current chromatograms of volatile oil components of Schisandra chinensis and its processed products in the retention time of 45~90 min

表1為GC-MS檢測(cè)出的五味子及其炮制品中揮發(fā)油成分的分類。結(jié)果表明，在五味子原藥材揮發(fā)油中共檢測(cè)出64個(gè)色譜峰，鑒定出45種化合物，占總峰面積的83.37%。其中萜類化合物27種，占總峰面積的70.81%；芳香族化合物7種（芳香醚2種，占1.99%，芳香烴5種，占3.61%）；脂肪族類化合物2種，占0.92%；酯類3種，占1.05%；酮類化合物6種，占5%。蒸五味子揮發(fā)油中共檢測(cè)出55個(gè)峰，鑒定出38種化合物，占總峰面積的85.33%。其中萜類化合物和芳香烴類化合物較五味子各少2種；酮類化合物較五味子少3種。鹽五味子揮發(fā)油中共檢測(cè)出56個(gè)峰，鑒定出41個(gè)化合物，占總峰面積的86.37%。其中萜類化合物和酮類化合物比五味子各少1種；芳香烴類化合物較五味子少2種。蜜五味子揮發(fā)油中共檢測(cè)出57個(gè)峰，鑒定出42個(gè)化合物，占總峰面積的86.37%。其中芳香烴類化合物較五味子少2種；酮類化合物較五味子少1種。五味子及其炮制品揮發(fā)油中含量最高的化合物為依蘭烯。五味子及其炮制品中揮發(fā)油成分分析表如表2所示，共列出45種從五味子及其炮制品中提取的揮發(fā)油類成分鑒定結(jié)果，包括各成分的分子式、結(jié)構(gòu)式、保留時(shí)間及相對(duì)含量等。由此表可知，五味子藥材經(jīng)過炮制后，多種揮發(fā)油類成分相對(duì)含量發(fā)生變化，且一些揮發(fā)油類成分不能在炮制品中檢測(cè)到，推測(cè)3種炮制工藝均對(duì)五味子藥材中的揮發(fā)油成分具有一定的影響，使其成分和含量發(fā)生改變。

表1 五味子及其炮制品中揮發(fā)油分類Table 1 Classification of volatile oil in Schisandra chinensis and its processed products %

表2 五味子及其炮制品中揮發(fā)油成分分析表Table 2 Information of volatile oil in Schisandra chinensis and its processed products

續(xù)表

續(xù)表

續(xù)表

3 討論

為了探討五味子及其炮制品中揮發(fā)油類成分的含量差異，本研究采用水蒸氣蒸餾法對(duì)五味子及其3種炮制品中揮發(fā)油進(jìn)行提取，并利用GC-MS法對(duì)其進(jìn)行成分分析。在五味子揮發(fā)油中共檢測(cè)出64個(gè)峰，鑒定出45種化合物，占總峰面積的83.37%。蒸五味子揮發(fā)油中共檢測(cè)出55個(gè)峰，鑒定出38種化合物，占總峰面積的85.33%。鹽五味子揮發(fā)油中共檢測(cè)出56個(gè)峰，鑒定出41種化合物，占總峰面積的86.37%。蜜五味子揮發(fā)油中共檢測(cè)出57個(gè)峰，鑒定出42種化合物，占總峰面積的85.53%。本研究共鑒定出45種存在于五味子及其炮制品中的揮發(fā)油類成分，其中萜類化合物27種，約占總揮發(fā)油的70%以上，芳香族類化合物7種，脂肪族類化合物2種，酯類化合物3種以及酮類化合物6種。由于炮制方式不同，不同炮制品中揮發(fā)油類成分也存在一定差異。

綜上所述，本研究通過對(duì)五味子及其炮制品進(jìn)行成分分析，明確了五味子揮發(fā)油的組成以及五味子炮制前后揮發(fā)油類成分的含量差異，為五味子及其炮制品發(fā)揮特定的藥理作用提供理論依據(jù)。