CATA結(jié)合蛋白-6、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因在垂體瘤組織中的表達(dá)及與臨床病理特征關(guān)系

馮樂霄，李 晶

(1.咸陽(yáng)市中心醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 咸陽(yáng) 712000;2.咸陽(yáng)市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，陜西 咸陽(yáng) 712000)

垂體瘤為顱內(nèi)常見良性腫瘤，其發(fā)生率約占全部顱內(nèi)腫瘤的10.00%。目前臨床上對(duì)于該病發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，認(rèn)為它的發(fā)生可能與激素分泌失常、腫瘤相關(guān)基因表達(dá)變化等因素有關(guān)[1]。針對(duì)垂體瘤分析，發(fā)現(xiàn)隨瘤體組織的增大，極易引起局部壓迫和激素分泌異常，并伴有頭痛、惡心、嘔吐、視力減退等一系列臨床表現(xiàn)[2]。因此盡早診治顯得十分重要。近年來(lái)，隨著臨床對(duì)垂體瘤發(fā)生機(jī)制的研究，發(fā)現(xiàn)CATA結(jié)合蛋白-6(GATA-binding protein-6，GATA-6)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)在該類患者的中呈異常表達(dá)，且其表達(dá)水平會(huì)隨著垂體瘤侵襲性生長(zhǎng)而發(fā)生改變[3]。本研究選取82例垂體瘤患者作為研究對(duì)象，旨在探討GATA-6和bFGF在垂體瘤組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2019年5月至2021年于本院實(shí)施手術(shù)治療的82例垂體瘤患者作為研究對(duì)象，收集手術(shù)切除的瘤組織與瘤旁正常組織，其中瘤組織設(shè)立為垂體瘤組，瘤旁正常組織設(shè)立為瘤旁正常組。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床確診為垂體瘤，經(jīng)切除術(shù)治療；②首次發(fā)病；③認(rèn)知功能正常；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有其他部及組織器官的良惡性腫瘤；②凝血功能障礙；③妊娠或哺乳階段。

1.2 研究方法

1.2.1 GATA-6、bFGF mRNA表達(dá)水平檢測(cè)：將手術(shù)切除的瘤組織與瘤旁正常組織儲(chǔ)存于液氮中，采用Trizol法從100 mg瘤組織與瘤旁正常組織中提取總RNA，經(jīng)L9紫外分光光度計(jì)檢測(cè)其純度合格后，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(System Bio-sciences公司生產(chǎn))將總RNA反轉(zhuǎn)為cDNA，再采用SYBR-Green熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒(美國(guó)賽默飛世爾科技有限公司)檢測(cè)GATA-6 mRNA、bFGF mRNA表達(dá),引物序列見表1。反應(yīng)條件：GATA-6：95 ℃、5 min，95 ℃、15 s，95 ℃、45 s，72 ℃、30 s，共進(jìn)行30個(gè)循環(huán)，最后在72 ℃下延伸7 min；bFGF：94 ℃、4 min，94 ℃、50 s，55 ℃、50 s，72 ℃、60 s，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后在72 ℃下延伸10 min；采用閾值循環(huán)(Ct)的值確定GATA-6 mRNA、bFGF mRNA表達(dá)，以GAPDH基因作為內(nèi)參照，使用2-ΔΔCt方法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。

表1 GATA-6、bFGF引物序列

1.2.2 調(diào)查內(nèi)容及其方法：設(shè)計(jì)統(tǒng)一的病例調(diào)查表，由專業(yè)醫(yī)師收集垂體瘤患者的臨床資料，包括年齡、性別、激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)、生長(zhǎng)類型、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為等。Hardy-Wilson分級(jí)：1級(jí)：垂體腫瘤直徑<10 mm，并位于鞍內(nèi)；2級(jí)：垂體瘤直徑達(dá)到10 mm，向鞍上擴(kuò)展，充填鞍上池；3級(jí)：垂體瘤向鞍上擴(kuò)展10～20 mm，影響第三腦室；4級(jí)：垂體瘤向鞍上擴(kuò)展20～30 mm，充填第三腦室前部；5級(jí)：垂體瘤擴(kuò)展>30 mm，到達(dá)側(cè)腦室室間孔區(qū)域。生物學(xué)行為：侵蝕性腺瘤與非侵蝕性腺瘤；其中侵蝕性垂體瘤是指瘤體生長(zhǎng)突破包膜，侵犯硬腦膜視神經(jīng)骨質(zhì)等結(jié)構(gòu)組織，其組織形態(tài)學(xué)為良性，但生物學(xué)為惡性。

2 結(jié) 果

2.1 垂體瘤組與瘤旁正常組GATA-6、bFGF mRNA表達(dá)水平比較 垂體瘤組的GATA-6、bFGF mRNA表達(dá)水平高于瘤旁正常組(均P<0.05)，見表2。

表2 垂體瘤組與瘤旁正常組GATA-6、bFGF mRNA表達(dá)水平比較

2.2 GATA-6、bFGF mRNA水平表達(dá)與垂體瘤組患者臨床臨床病理特征的關(guān)系 垂體瘤組患者的激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)、生長(zhǎng)類型、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為等不同臨床特征的GATA-6、bFGF mRNA水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表3。

表3 GATA-6、bFGF mRNA表達(dá)水平與垂體瘤組患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3 不同臨床病理特征GATA-6 mRNA水平分層回歸分析 將“激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)、生長(zhǎng)類型、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為”作為自變量，將“GATA-6 mRNA”作為因變量進(jìn)行分層回歸分析，得出激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)并不會(huì)對(duì)GATA-6 mRNA產(chǎn)生影響關(guān)系(均P>0.05)；生長(zhǎng)類型、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為會(huì)對(duì)GATA-6 mRNA產(chǎn)生顯著的負(fù)向影響關(guān)系(均P<0.05)。見表4。

表4 不同臨床病理特征GATA-6 mRNA水平分層回歸分析

2.4 不同臨床病理特征bFGF mRNA水平分層回歸分析 將“激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)、生長(zhǎng)類型、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為”作為自變量，將“bFGF mRNA”作為因變量進(jìn)行分層回歸分析，得出垂體瘤形態(tài)、生長(zhǎng)類型并不會(huì)對(duì)bFGF mRNA產(chǎn)生影響關(guān)系(均P>0.05)；激素分泌功能、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為會(huì)對(duì)bFGF mRNA產(chǎn)生顯著的負(fù)向影響關(guān)系(均P<0.05)。見表5。

表5 不同臨床病理特征bFGF mRNA水平分層回歸分析

3 討 論

垂體瘤為中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見良性腫瘤，可表現(xiàn)出包繞頸內(nèi)動(dòng)脈、破壞鞍底、入侵海綿竇等行為[4]。經(jīng)流行病學(xué)[5]調(diào)查，其發(fā)病率約為10%～20%，僅次于神經(jīng)表皮性腫瘤和腦膜瘤。目前臨床針對(duì)該病常采用手術(shù)方法治療，譬如神經(jīng)內(nèi)鏡引導(dǎo)經(jīng)鼻蝶入路切除術(shù)，通過摘除腫瘤組織，保護(hù)垂體并維持其正常功能[6]。但經(jīng)臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)手術(shù)難以完全切除，術(shù)后易復(fù)發(fā)，可能與垂體瘤可表現(xiàn)出惡性腫瘤的某些生物學(xué)特性有關(guān)，呈侵襲性生長(zhǎng)[7]；然而這些生物學(xué)特征與垂體瘤侵襲性生長(zhǎng)之間的關(guān)系尚未完全闡明。GATA-6是一種致癌基因，位于染色體18q11.1～q11.2，具備調(diào)控595個(gè)氨基酸作用[8]。有研究[9]指出，其在腫瘤的發(fā)生、增殖、侵襲中具有重要作用。譬如結(jié)直腸癌，可通過抑制15-脂氧合酶H表達(dá)，促使癌細(xì)胞增殖；而在垂體瘤患者中，可能是通過誘導(dǎo)垂體腺瘤組織生長(zhǎng)，使瘤體向鞍上、第三腦室及側(cè)腦室室間孔等區(qū)域擴(kuò)展，通過腫瘤占位引起局部壓迫癥狀及激素分泌異常[10-11]。bFGF屬腫瘤血管新生和活化的標(biāo)志物。據(jù)臨床研究[12-13]發(fā)現(xiàn)，其在血管形成和促進(jìn)組織再生中具有重要作用。針對(duì)bFGF作用機(jī)制分析，可能與以下幾點(diǎn)有關(guān)：①通過刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生大量的蛋白酶及內(nèi)皮遷移，進(jìn)而形成新生毛細(xì)血管[14]；②通過促進(jìn)垂體表皮和內(nèi)皮細(xì)胞再生，加速兩者分裂，并誘導(dǎo)其脫離基膜及刺激內(nèi)皮細(xì)胞向腫瘤組織趨化，形成管狀結(jié)構(gòu)[15-16]；③通過促進(jìn)垂體腺瘤轉(zhuǎn)化基因表達(dá)，刺激細(xì)胞增殖及其分化[17-18]。在本研究結(jié)果中可見，垂體瘤組的GATA-6、bFGF mRNA表達(dá)顯著高于瘤旁正常組，表明其參與了垂體瘤的發(fā)生發(fā)展。

針對(duì)垂體瘤患者的病理特征分析，發(fā)現(xiàn)GATA-6、bFGF mRNA表達(dá)會(huì)隨著病理特征而發(fā)生改變，即功能性垂體瘤者GATA-6、bFGF mRNA表達(dá)高于無(wú)功能性垂體瘤者，大腺瘤者高于微腺瘤者，浸潤(rùn)型者高于擴(kuò)張型者，Hardy-Wilson 4～5級(jí)者高于2～3級(jí)及1級(jí)者，侵襲性垂體腺瘤者高于非侵襲性垂體腺瘤者，以上結(jié)果均說明GATA-6、bFGF mRNA表達(dá)升高可能與垂體瘤侵襲性生長(zhǎng)有關(guān)[19-20]。

本文為了進(jìn)一步論證GATA-6、bFGF mRNA表達(dá)與上述病理特征的關(guān)系，將激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)、生長(zhǎng)類型、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為納入分層回歸模型，結(jié)果顯示，生長(zhǎng)類型、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為會(huì)對(duì)GATA6 mRNA產(chǎn)生負(fù)向影響關(guān)系；激素分泌功能、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為會(huì)對(duì)bFGF mRNA產(chǎn)生負(fù)向影響關(guān)系。由此可見，生長(zhǎng)類型、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為是影響GATA-6 mRNA表達(dá)的重要因子，而激素分泌功能、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為是bFGF mRNA表達(dá)的重要因子。同時(shí)，這一結(jié)果也提示，GATA-6、bFGF mRNA參與了垂體瘤的發(fā)生發(fā)展和侵襲性生長(zhǎng)，因此認(rèn)為檢測(cè)GATA-6、bFGF mRNA表達(dá)有望作為診治垂體瘤的重要指標(biāo)。

綜上所述，GATA-6、bFGF mRNA在垂體瘤組織中呈異常表達(dá)，且其表達(dá)水平會(huì)受生長(zhǎng)類型、Hardy-Wilson分級(jí)、生物學(xué)行為、激素分泌功能等臨床病理特征的影響。