乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA表達(dá)與血小板參數(shù)及D-二聚體的相關(guān)性

袁航 徐燁 黃波

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染所導(dǎo)致的一種以肝細(xì)胞變性、壞死、炎癥反應(yīng)為主要特點(diǎn)的疾病，而中國作為乙型肝炎高發(fā)地區(qū)，目前HBV 攜帶者已有1.3 億之多，HBV 總感染率也已達(dá)到60%[1]。在臨床中，乙型肝炎患者在疾病發(fā)展過程中的長期肝細(xì)胞受損、充血水腫及纖維組織的增生，可導(dǎo)致其發(fā)生肝硬化[2]。根據(jù)臨床研究指出，肝臟作為維持人體抗凝、凝血及纖溶系統(tǒng)穩(wěn)定最為主要的臟器，乙型肝炎肝硬化的發(fā)生可導(dǎo)致患者肝臟凝血相關(guān)物質(zhì)的合成及代謝受到損害，表現(xiàn)為血小板數(shù)量的減少及凝血功能的異常[3]。既往研究認(rèn)為門靜脈高壓狀態(tài)下的脾功能亢進(jìn)、脾大是導(dǎo)致乙型肝炎肝硬化患者凝血功能異常的主要原因[4]，但根據(jù)近期研究指出，非脾功能亢進(jìn)的肝硬化患者同樣存在血小板數(shù)量減少、凝血功能異常的問題[5]。因而對(duì)于臨床乙型肝炎肝硬化患者凝血功能異常的機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。同時(shí)另有研究指出，HBV 對(duì)骨髓巨核細(xì)胞具有抑制作用，影響血小板的合成及凝血功能[6]。目前。臨床關(guān)于乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA 表達(dá)與其血小板參數(shù)、D-二聚體（D-D）的相關(guān)性研究較少。基于此，本次研究選取80 例于2019 年1 月-2022 年1 月在宜春市人民醫(yī)院接受治療的乙型肝炎肝硬化患者作為研究對(duì)象，探究乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA 表達(dá)與其血小板參數(shù)、D-D 的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 便利抽取80 例于2019 年1 月-2022 年1 月在本院接受治療的乙型肝炎肝硬化患者作為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合2019 年中華醫(yī)學(xué)會(huì)《肝硬化診治指南》中的乙型肝炎肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)，（1）乙型肝炎表面抗原陽性，或乙型肝炎表面抗原陰性、乙型肝炎核心抗體陽性且有明確慢性HBV 感染史；（2）病理學(xué)檢查或影像學(xué)診斷發(fā)現(xiàn)存在門靜脈高壓、無創(chuàng)性檢測肝臟硬度測定值（LSM）≥17.0 kPa[7]。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）非乙型肝炎導(dǎo)致的肝硬化；（2）存在凝血功能障礙或可導(dǎo)致血小板減少的疾病；（3）臨床資料缺損。另選取25 例同期在本院進(jìn)行常規(guī)體檢的健康人作為對(duì)照組。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。患者知情并同意。

1.2 方法 觀察組予以HBV-DNA 檢測，觀察組及對(duì)照組均予以血小板參數(shù)、D-D 檢測。具體檢測方法如下：抽取待檢測人群空腹靜脈血5 mL，分別放置于促凝管、枸櫞酸鈉抗凝管及EDTA-2K 抗凝管中并充分搖勻，其中促凝管、枸櫞酸鈉抗凝管均以3 000 r/min 速率離心10 min，待離心結(jié)束后，提取上層血清及血漿用于HBV-DNA 和D-D 檢測。EDTA-2K 抗凝管血樣用于血小板參數(shù)檢測[血小板計(jì)數(shù)（PLT）、血小板體積分布寬度（PDW）及平均血小板體積（MPV）]。HBV-DNA 檢測采用HBVDNA 檢測試劑盒（中山大學(xué)達(dá)安基因公司）及ABI-7300 熒光定量PCR 儀檢測，血小板參數(shù)、D-D檢測分別采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、全自動(dòng)血凝儀及配套試劑盒。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)HBV-DNA 定量，將80 例乙型肝炎肝硬化患者分為低（HBV-DNA＜ 103IU/mL）、中（≥103IU/mL 且＜105IU/mL）、高載毒量組（105～106IU/mL）。對(duì)比觀察組、對(duì)照組及不同HBV-DNA 載毒量組之間的血小板參數(shù)、D-D水平的差異性，并分析乙型肝炎肝硬化患者HBVDNA 表達(dá)與其血小板參數(shù)、D-D 的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本次研究采用Excel 錄入保存數(shù)據(jù)，SPSS 20.0 分析處理數(shù)據(jù)。對(duì)于符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；采用Pearson 相關(guān)性分析探究乙型肝炎肝硬化患者HBVDNA 表達(dá)與其血小板參數(shù)、D-D 的相關(guān)性。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 觀察組男49 例，女31 例；平均年齡（49.78±5.27）歲；對(duì)照組男17 例，女8 例；平均年齡（50.28±5.36）歲。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

2.2 觀察組和對(duì)照組血小板參數(shù)、D-D 水平比較 對(duì)比兩組血小板參數(shù)、D-D 水平，觀察組PLT 水平低于對(duì)照組，MPV、PDW、D-D 水平均高于對(duì)照組（P＜0.05）。見表1。

表1 觀察組和對(duì)照組血小板參數(shù)、D-D水平比較（）

表1 觀察組和對(duì)照組血小板參數(shù)、D-D水平比較（）

2.3 三組不同載毒量組血小板參數(shù)、D-D 水平比較 對(duì)比三組不同載毒量組血小板參數(shù)、D-D 水平，差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 三組不同載毒量組血小板參數(shù)、D-D水平比較（）

表2 三組不同載毒量組血小板參數(shù)、D-D水平比較（）

2.4 乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA 表達(dá)與血小板參數(shù)及D-D 的相關(guān)性分析 乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA 表達(dá)與PLT 呈負(fù)相關(guān)，與MPV、PDW及D-D 水平均呈正相關(guān)（P＜0.05），見表3。

表3 乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA表達(dá)與血小板參數(shù)及D-D的相關(guān)性

3 討論

肝臟作為機(jī)體多種凝血因子合成的主要場所，具備合成、滅活抗纖溶物質(zhì)、纖維蛋白溶解物質(zhì)的功能，對(duì)于維持人體凝血、抗凝及纖維蛋白溶解的動(dòng)態(tài)平衡具有重要作用[8]。血液中血小板在正常情況下具有特定的形態(tài)、結(jié)構(gòu)及較為恒定的數(shù)量，在促進(jìn)傷口愈合、止血、血栓形成等生理病理過程中均具有重要的臨床意義，血小板數(shù)量、體積不僅可以準(zhǔn)確反映人體骨髓巨核細(xì)胞的代謝、增生情況以及血小板合成情況，也可以在一定程度上反映血小板功能正常與否，其中PLT、MPV、PDW 等是臨床血小板情況的重要觀測參數(shù)。

肝硬化作為乙型肝炎患者病情發(fā)展至后期階段的常見疾病轉(zhuǎn)歸，本次研究結(jié)果顯示，相較于健康人群，乙型肝炎肝硬化患者其PLT 明顯更低（P＜0.05），與李志英等[9]的研究結(jié)果具有一致性。既往研究認(rèn)為，其原因可能在于：第一，乙型肝炎肝硬化患者由于肝功能受損，其毒素清除能力顯著下降，導(dǎo)致內(nèi)毒素大量在體內(nèi)堆積，引起血小板的損傷，數(shù)量減少。第二，乙型肝炎肝硬化患者多伴有門靜脈高壓，導(dǎo)致脾功能亢進(jìn)，單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)大量吞噬和破壞血小板。第三，骨髓中血小板的合成依賴于肝臟血小板生成素的調(diào)節(jié)，但肝硬化可導(dǎo)致患者蛋白質(zhì)合成功能下降，從而使得肝臟生成血小板生成素的能力下降，進(jìn)而導(dǎo)致了血小板數(shù)量的減少[10-12]。此外，本次研究中乙型肝炎肝硬化患者血小板其他參數(shù)也發(fā)生了相應(yīng)改變，觀察組MPV、PDW 水平相較于對(duì)照組更高（P＜0.05）。其原因可能在于：乙型肝炎肝硬化患者對(duì)于PLT 破壞增加，導(dǎo)致骨髓巨核細(xì)胞增生代謝受到抑制，正常大小的血小板生成減少。在此狀態(tài)下，為滿足血小板減少時(shí)機(jī)體對(duì)血小板的需求，機(jī)體代償性地增加功能、活性及代謝能力更為強(qiáng)大的大血小板，而在臨床中一般認(rèn)為MPV、PDW 水平越高，患者血液內(nèi)大血小板與小血小板的數(shù)量分布差異越大[13]。此外，也有研究認(rèn)為由于肝功能的損傷，導(dǎo)致患者血清白蛋白合成受阻，纖維蛋白大量與血小板結(jié)合，使得血小板黏附聚集能力增強(qiáng)，導(dǎo)致了正常大小的血小板數(shù)量減少，而大血小板數(shù)量增多[14]。

本次研究還探究了健康人群、不同HBV-DNA載量肝硬化患者之間D-D 表達(dá)的差異性，研究結(jié)果顯示，相較于健康人群，乙型肝炎肝硬化患者其D-D 水平更高，且在不同HBV-DNA 載量患者之間，患者HBV-DNA 載量越高，D-D 水平越高。其中D-D 水平是機(jī)體凝血反應(yīng)狀態(tài)下凝血酶作用于纖維蛋白而形成的一種特異性降解蛋白，對(duì)于機(jī)體凝血狀態(tài)及纖維蛋白溶解具有較強(qiáng)的敏感性，其與肝功能狀態(tài)具有密切的聯(lián)系。在蒙增萍等[15]、孫艷虹等[16]的研究中，也指出患者肝功能受損程度越重，患者體內(nèi)D-D 水平越高，與本次研究結(jié)果具有相似之處。

在本次研究中，Pearson 分析結(jié)果顯示乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA 表達(dá)與PLT 呈負(fù)相關(guān)，與MPV、PDW 及D-D 水平呈正相關(guān)。分析其原因在于：HBV 為一種吞噬性病毒，可對(duì)骨髓造血干細(xì)胞及骨髓巨核細(xì)胞產(chǎn)生直接抑制作用，且HBV 病毒載量越高，其對(duì)于骨髓造血干細(xì)胞及骨髓巨核細(xì)胞的抑制作用越強(qiáng)，使得血小板數(shù)量減少，影響凝血功能，從而導(dǎo)致了D-D 水平的升高[17]。在另一方面，HBV 還可通過影響機(jī)體的正常造血微環(huán)境，使得T 細(xì)胞功能失調(diào)，從而殺傷造血干細(xì)胞，引發(fā)骨髓抑制。也有學(xué)者認(rèn)為，HBV 病毒載量越高，病毒復(fù)制程度越高，其傳染性更強(qiáng)，對(duì)于患者肝細(xì)胞的損傷越大，而肝臟作為血小板生成素合成的主要器官，肝功能受損，則意味著凝血功能下降，D-D 水平升高[18]。在張曼華等[19]的研究中，對(duì)乙型肝炎肝硬化患者抗病毒治療前后的D-D 水平變化進(jìn)行了探究，其研究結(jié)果顯示，乙型肝炎肝硬化患者治療前D-D 水平顯著高于治療后，這能夠在一定程度上反映乙型肝炎肝硬化患者HBV 病毒載量與D-D 水平之間的相關(guān)性。此外在董麗嫻等[20]的研究中，也指出了乙肝肝硬化患者其HBV-DNA 與血小板生成素水平之間存在相關(guān)性。

綜上所述，乙型肝炎肝硬化患者其HBV-DNA載量與其血小板參數(shù)及D-D 存在相關(guān)性，患者HBV-DNA 載量越高，其凝血纖溶功能失衡更加明顯，提示在臨床干預(yù)中，應(yīng)當(dāng)注重對(duì)乙型肝炎肝硬化患者的抗病毒干預(yù)，減少病毒復(fù)制以維持凝血纖溶功能的平衡。