HIF-1α、pVHL在卵巢透明細胞癌的表達及意義*

房惠瓊 張月華 張淦梅 肖 妮 張良運

廣東省佛山市第一人民醫院病理科 528000

卵巢透明細胞癌(OCCC)是女性生殖系統常見的惡性腫瘤,發病率僅次于高級別漿液性癌。卵巢透明細胞癌因其鏡下形態的多樣性和復雜性導致常出現誤診和漏診,是婦科病理學中的診斷難點之一。本文通過對30例卵巢透明細胞癌及40例其他類型卵巢癌(高級別漿液性癌、子宮內膜樣癌、黏液性癌)進行HIF-1α、pVHL免疫組化標記,觀察不同類型卵巢癌之間的表達差異,探討HIF-1α、pVHL在卵巢透明細胞癌診斷及鑒別診斷中的應用意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2015—2019年收治的卵巢透明細胞癌30例作為實驗組,并隨機抽取同期收治的高級別漿液性癌20例、子宮內膜樣癌10例、黏液性癌10例作為對照組。所有病例病理診斷明確,經3名高年資病理醫生閱片并做出一致性診斷,診斷標準參照WHO腫瘤分類。排除疑似病例、無免疫組化資料等難以明確診斷的病例。實驗組30例,年齡23～55歲,平均年齡38歲;對照組40例,年齡31～68歲,平均年齡48歲。

1.2 方法 所有標本經常規脫水、石蠟包埋、3μm切片、脫蠟后,采用免疫組化方法進行HIF-1α、pVHL檢測。

免疫組化采用二步法,組織切片常規脫蠟至水,檸檬酸高溫修復;滴加一抗37℃1h;滴加二抗,室溫孵育10min; DAB顯色,蘇木素復染、脫水、透明、封片。主要反應步驟在Dako Omnis全自動免疫組化染色機進行,用PBS溶液代替一抗作陰性對照,用已知陽性表達的腫瘤組織作陽性對照。一抗兔抗人低氧誘導因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)單克隆抗體(克隆號EP118,批號21824552)、二步法通用檢測試劑盒(鼠兔通用型二抗)購自北京中杉金橋生物技術公司,一抗兔抗人VHL多克隆抗體(pVHL,克隆號CC66171,批號XS20201211016)購自Bioworld生物技術有限公司。

1.3 結果觀察和判定 免疫組化采用DAB顯色,HIF-1α以細胞核出現棕黃色顆粒為陽性,pVHL以細胞漿或細胞膜出現棕黃色顆粒為陽性。

免疫組化結果采用半定量分析法,對細胞陽性百分比和染色強度進行評分。每張切片隨機選取5個高倍鏡視野,觀察50個目標細胞,以5個視野陽性細胞平均百分數作為該切片的陽性細胞百分比進行計分：0%～5%為0分,6%～25%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分,>75%為4分。染色強度評分以陽性細胞著色強弱進行計分,細胞未著色(陰性)為0分,染色呈淡黃色(弱)為1分,染色呈棕黃色(中)為2分,染色呈棕褐色(強)為3分。以兩項評分的總分進行結果判定,0～1分為陰性(-),2～3分為弱陽性(+),4～5分為中等陽性(++),6～7分為強陽性(+++)。

1.4 統計學方法 實驗數據采用SPSS13.0統計軟件包處理,進行χ2檢驗,選取檢驗水準α=0.05,雙側檢驗。

2 結果

30例卵巢透明細胞癌中,HIF-1α的陽性率為83.3%(25/30),中等陽性為主,其他類型卵巢癌分別為高級別漿液性癌10%(2/20)、子宮內膜樣癌10%(1/10)、黏液性癌0%(0/10),弱陽性為主。經統計學檢驗,HIF-1α在透明細胞癌中陽性率高于其他類型卵巢癌,差異具統計學意義(P<0.05)。而pVHL在4種卵巢癌的表達分別為透明細胞癌73.3%(22/30)、高級別漿液性癌75.0%(15/20)、子宮內膜樣癌60.0%(6/10)、黏液性癌60.0%(6/10),且均為局灶弱陽性,差異不明顯,不做統計學分析。

3 討論

3.1 OCCC的臨床特征與病理診斷 OCCC的發病率占所有卵巢惡性腫瘤的5%～25%,僅次于高級別漿液性癌(70%)[1],早期(FIGO I期)的患者預后較好,但晚期(FIGO Ⅱ期及Ⅱ期以上)患者較其他類型的卵巢癌預后更差,復發率高,多伴有盆腔的廣泛轉移;對傳統鉑類化療藥物高度耐受,化療不敏感。

OCCC鏡下形態多樣,包括組織結構的多樣性,如腺管樣、乳頭樣、實性片狀等,和細胞形態的多樣性,如胞質透亮富含糖原的多邊形透明細胞、細顆粒狀胞質的嗜酸性細胞、特征性的核大深染凸出于腔緣的鞋釘樣細胞和囊性擴張腺腔襯附的扁平細胞。目前臨床常用于診斷OCCC的免疫組化抗體是HNF-1β和NapsinA,HNF-1β在OCCC的陽性率可達85%～100%[2],但在子宮內膜樣癌、黏液性癌中的陽性率也分別達到25%～60%、50%～60%;NapsinA在OCCC的陽性率60%～100%[3-6],也可表達于一些子宮內膜樣癌。還有一些新的抗體,如AMACR/P504S、glypican-3、HIF-1α均有報道在OCCC的陽性率高于其他類型卵巢癌[6-9]。

3.2 HIF1-α與OCCC 缺氧誘導因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)是細胞處于低氧及模擬低氧環境條件下產生的一種蛋白轉錄調控因子, HIF-1α是 HIF-1特有的一種活性亞基結構,參與低氧狀態下血管生成的全過程,一方面促進血管形成以及新陳代謝,另一方面促進腫瘤的增殖和轉移。因此,阻斷HIF-1α能夠抑制腫瘤的生長。

已有研究發現HIF-1α與許多上皮性腫瘤發生、發展及預后密切相關,如腎癌、胃癌、膽管癌、食管鱗癌、膀胱尿路上皮癌[10-11]等。Lee S等[7]研究發現,HIF-1α在OCCC的表達顯著高于其他類型卵巢癌(P=0.001)。Miyazama M等[8]的研究發現,HIF-1、HIF-1α在OCCC 的表達高于其他類型卵巢癌,對36例卵巢上皮性腫瘤(包括漿液性腺癌、透明細胞癌、子宮內膜樣腺癌、黏液性腺癌、交界性和良性黏液性腫瘤)的胞核HIF-1、胞漿HIF-1α表達水平進行定量分析,發現OCCC患者兩指標的表達均最高。本研究也證實了HIF-1α在OCCC的表達明顯高于其他類型卵巢癌。因此,HIF-1α既可以是OCCC的輔助診斷性抗體,也可以成為OCCC靶向治療的新靶點。

3.3 pVHL與OCCC pVHL是VHL基因的產物,是一個多功能的腫瘤抑制因子,與腫瘤的生物學行為密切相關。Lin F等[12]報道在19例卵巢和子宮透明細胞癌中,17例pVHL陽性,陽性率約90%。彭燕等[13]研究發現,OCCC的pVHL陽性率(18/20,90%)遠遠高于高級別漿液性腺癌(3/20,15%)和子宮內膜樣腺癌(2/14,14.3%),具有統計學意義(P<0.01)。本次研究pVHL在4種卵巢癌中的表達并無明顯差異,多呈局灶弱陽性,結果并不理想,可能是與選用抗體的克隆號在人體石蠟組織中敏感度較低有關。

3.4 pVHL、HIF-1α與OCCC 關于pVHL、HIF-1α在OCCC的表達相關性也有少量報道,結論并不一致。Lee S等[7]的研究認為,HIF-1α和VHL在漿液性腺癌和子宮內膜樣腺癌的表達存在負相關性,但在OCCC中不存在相關性。而Osada R等[9]的報道認為pVHL的表達與HIF-1α細胞核的表達存在負相關。國內尚未檢索到兩指標在OCCC的相關性研究,有待更進一步的研究探索。

OCCC是女性生殖系統常見的惡性腫瘤,發病率僅次于高級別漿液性癌,診斷上除了常用免疫組化抗體HNF-1β和NapsinA,也可以采用抗體HIF-1α輔助診斷。HIF-1α在OCCC的高表達,也為靶向治療提供了新靶點。