化妝品中糖皮質激素檢測方法研究進展

黃媛媛,王秀橋,高平,黃愛蓮

(湛江市食品藥品檢驗所,廣東 湛江 524022)

糖皮質激素類藥物屬甾體類化合物[1],不僅可以調節糖,還可以調節蛋白質及脂肪的代謝和生物合成。在醫學治療手段中,糖皮質激素是抗感染的藥物之一,使用含有該激素的藥物可以抑制纖維細胞的增殖生長,從而控制氧化曲普坦的形成量,可以讓皮膚變得光滑、白皙[2]。

由于其能夠抑制纖維細胞的增生,使用添加糖皮質激素的化妝品,不僅能夠改善皮膚狀況,還能夠祛痘淡斑、美白養顏、去除臉部血絲等[3]。但長期使用含糖皮質激素的化妝品會產生嚴重的副作用甚至危害人體的身心健康。正是由于糖皮質激素的美容美白功效,一些不法商家常常將其添加到各類化妝品中以獲取不正當的利益。且在一些功能性化妝品中,可能有非法添加的糖皮質激素,若不知情消費者長期使用,后果不堪設想。糖皮質激素是化妝品中的違禁物質[4],但該物質的非法添加時有發生,目前主要有GB/T 24800.2—2009以及《化妝品安全技術規范》中所涉及的激素種類的檢測方法[4-5]。市場上糖皮質激素的類型較多,非法添加的情況也較為嚴重。因此,研究化妝品中糖皮質激素的檢測方法,為政府實施衛生監督提供技術參考,以保障消費者的身體健康。

1 化妝品中非法添加糖皮質激素的危害

含激素類的化妝品對人體皮膚沒有任何好處可言,若是長期使用后果更為嚴重,不僅損害使用者的皮膚,更會損害人體的身心健康。因此,激素類化妝品應該要杜絕使用或生產,同時要注意避免長期使用含激素類的化妝品,保證消費者的皮膚和身心健康安全。

從使用的短期效果來看,添加了糖皮質激素的化妝品可以使皮膚變得光滑,白皙細膩。但是一旦長期使用上述所說“效果驚人”的化妝品,會對消費者的皮膚、身心健康等造成破壞性的影響,如內分泌失調,導致紊亂,影響發育健康,使皮膚的毛囊萎縮、有色斑形成或者毛細血管擴張,皮膚泛紅、有紅血絲等,依賴性皮炎也可能會形成。有些化妝品需要持續使用才能保持效果,當停下后,副作用就會隨之而來,如出現瘙癢、皮膚紅腫、長丘疹,難以治愈。輕者只是肌膚問題沒有任何改變,激素依賴性皮炎形成就是中度損害,更甚則傷及身體健康,后果嚴重,如高血壓、精神失常、類固醇性糖尿病、消化性潰瘍、眼部并發癥等等[6-7]。

2 化妝品中糖皮質激素的檢測方法

化妝品中糖皮質激素的檢測方法包括分光光度法、薄層色譜法、高效液相色譜法、超高液相色譜法、液相色譜-串聯質譜法、液相色譜-高分辨質譜法、毛細管電泳法和免疫分析法等。

2.1 分光光度法

目前,分光光度法應用在化妝品中甾體激素檢測較為少見而較多應用于藥物類檢驗。分光光度法是利用甾體激素化學顯色反應原理,但定量分析方法均存在局限性,容易被化妝品中某些成分干擾,因此在進行激素成分的檢驗測定時,應做好一定的前處理工作即提取待測物質,并進行分離和純化[8]。劉軍[9]采用Liebermann-Burchard法進行顯色反應測定醋酸氫化可的松、醋酸可的松兩種糖皮質激素的分光光度法,檢出限分別為0.02,0.36 mg,相對標準偏差(RSD)為3.23%,回收率分別為98.17%,101.80%。

2.2 薄層色譜法

操作簡單便捷、省錢經濟、選擇性能突出、受其他物質干擾少是薄層色譜法的特點,推廣較容易。其分離性能較強,可以一一分離樣品中各種激素物質和干擾物質,通過做出標準Rf值,再與樣品溶液跑出的斑點進行比較,來確認樣品的種類和性質,繼而判斷出樣品中該激素是否存在,限制就是定量困難[10]。但在實際日常檢驗中,使用該檢測方法測定很少,還是現行國標法為主。

2.3 高效液相色譜法

高效液相色譜法是現在分離檢測分析中常用的技術方法,因其工作效率較高、分離效果好以及較為簡單快速而被關注和使用。該法的優點是操作便捷簡單、測試分析時間較短,采用該方法對于檢測潑尼松龍等九種糖皮質激素在化妝品當中的含量十分有效。高衛東等[11]建立了高效液相色譜法測定化妝品中地塞米松、醋酸地塞米松、醋酸潑尼松和氫化可的松等糖皮質激素及雌激素、雄性激素和孕激素等共11種激素的分析方法。其以甲醇為提取溶劑,采用超聲提取方法來處理不同形態的化妝品樣品,以LUBEX Kromasil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)分離,乙腈和水為流動相。該法的平均回收率為97.68%～108.95%,RSD為0.27%～3.2%,該法簡便準確、重現性好,可很好地應用于上述化妝品中11種激素的檢測。

潑尼松、氫化可的松、地塞米松、醋酸可的松、曲安奈德和丙酸氟替卡松等是糖皮質激素的常見種類,李娟等[12]建立了固相萃取-高效液相色譜法測定化妝品中上述6種糖皮質激素的方法,樣品提取后,經Oasis HLB固相萃取柱凈化,甲醇-乙腈和水作為流動相,采用Nucleodur C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),使6種糖皮質激素得到有效分離。平均加標回收率為81.8%～96.1%,RSD為3.3%～6.4%,檢出限為0.78～1.12 μg/L。

2.4 超高液相色譜法

周江等[13]建立了超高效液相色譜法同時測定祛痘、美白化妝品中4種糖皮質激素倍他米松雙丙酸酯、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、氫化可的松含量的方法。提取被測物質后,Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)分離。采用該方法測定的回收率為85.3%～102.8%,RSD為2.1%～5.0%(n=6)。該方法采用的前處理較為簡單便捷,檢測速度快,分離效果好,且靈敏度高。

2.5 液相色譜-串聯質譜法(LC-MS/MS)

溫家欣等[14]提出了Captiva EMR固相萃取結合LC-MS/MS同時測定41種糖皮質激素含量的方法。采用含1%甲酸的乙腈溶液提取目標化合物,再將提取成分過Captiva EMR固相萃取柱凈化。分離采用Thermo Accoure PFP色譜柱(100 mm×2.1 mm,2.6 μm),乙腈溶液(含0.1%乙酸)-0.1%乙酸溶液為流動相;正離子(ESI+)掃描,選擇多反應監測(MRM)模式檢測,外標法定量。該法的樣品提取處理比較簡潔、方便、快速,萃取柱凈化效果明顯,靈敏度高,能更好地為化妝品高通量檢測提供技術支持。

楊光勇等[15]為測定化妝品中45種糖皮質激素(GCs)含量,建立采用QuEChERS進行前處理,再通過超高效合相色譜-串聯質譜(UPLC-MS/MS)測定的方法。分離柱為Torus 2-PIC色譜柱(100 mm×3.0 mm,1.7 μm);后經正離子掃描、多反應監測模式下進行測定,外標法定量。該方法下測定的45種GCs的檢出限為0.05～0.10 μg/kg,定量限為0.15～0.30 μg/kg;回收率為74.4%～110.7%,RSD為2.9%～11%。該法的操作方便簡單、專屬性好、靈敏度高、綠色環保,比傳統方法極具優勢,可以測定化妝品中的多種糖皮質激素。

楊飄飄等[16]建立了采用超高效液相色譜-串聯質譜法檢測化妝品中氯倍他索乙酸酯的方法,五種常見的化妝品基質適用于這種新方法:面霜、凝膠、黏土、面膜和乳液。樣品經乙腈渦旋分散、超聲提取,然后用UPLC-MS/MS檢測,Waters CORTECS C18色譜柱(150 mm×2.1 mm,2.7 μm)分離被測物質,選擇正離子掃描(ESI)方式,模式使用多反應監測(MRM)。定量則用矩陣匹配標準曲線進行。檢出限為0.03 μg/g,定量限為0.09 μg/g,回收率范圍為83.2%～103.2%,相對標準偏差(RSD)范圍為1.4%～5.6%,該方法簡單、靈敏、可靠,適用于高通量定性和定量篩選以及不同基質類型的化妝品分析。

2.6 液相色譜-高分辨質譜法

徐振東等[17]建立了化妝品中41種糖皮質激素的分析方法,采用了基于在線凈化液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質譜技術。提取被測樣品中的物質,通過Cyclone P在線凈化柱凈化,C18柱分離,以Full Scan/dd MS2模式進行檢測。該法的加標回收率為71.3%～108.5%,RSD為2.7%～7.9%。該法樣品的前處理過程簡潔快捷,上手快速,實驗結果檢測效率高,檢測速度快,對測定和快速篩查化妝品中的糖皮質激素適用。

楊飄飄等[18]依據GB/T 24800.2—2009,在化妝品糖皮質激素的測定過程中,發現了一種與標準中倍他米松醋酸酯具有相同子離子的疑似糖皮質激素。在沒有標準品的情況下,使用高分辨質譜(UHPLC-LTQ/Orbitrap MS)確定了該物質的精確相對分子質量及分子式,并結合該物質與類似化合物進行的一系列解析驗證,結果證實了待驗證物質確實是預先猜測的結果。提取物質后,HLB固相萃取柱凈化,色譜柱為Waters Acquity UPLC BEH C18色譜柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm),經正離子掃描后;采用多反應監測模式分離可疑物,再通過(UHPLC-LTQ/Orbitrap MS)確證可疑物質。該法發現了新型的糖皮質激素——氯倍他索乙酸酯,該物質是標準當中并未提及檢測的激素物質。因此,現有的檢驗方法未能全面覆蓋檢測組分,導致檢測組分不全,促使檢測機構和單位快速建立篩查方法,該法可實現對未知化合物的快速篩查定性。

2.7 毛細管電泳法

孫雪婷等[19]建立了在線富集檢測化妝品中6種糖皮質激素的分析方法,主要采用反向微乳毛細管電色譜電動進樣聯用場放大堆積。這6 種激素的富集倍數為100～186倍。使用該方法的檢出限為20～60 μg/L,添加50 μg/L的標準加入量時,回收率85.9%～103.8%,RSD均小于5.8%。該法樣品用量少、操作過程簡單、經濟快速,具有良好的靈敏度和分離度。

為測定化妝品中倍他米松、潑尼松龍、氫化可的松和潑尼松這4種糖皮質激素,郭成方等[20]建立了微乳毛細管電動色譜(MEEKC)在線富集-大體積進樣(LVSI)與非勻強電場掃集(REFS)聯用的方法。富集倍數在最優條件下為853～933倍,檢出限為4～8 μg/L。回收率為93.7%～103.8%,RSD≤4.4%。該方法重現性好,前處理簡單方便,靈敏度在一定程度上有所提高,可用于化妝品中糖皮質激素的痕量分離測定。

2.8 免疫分析法

ELISA的反應機理,即抗體抗原的特異性免疫反應。該法的優點是與之前的單個免疫分析相比,檢測通量得到極大的提高,同時樣本量的需求有所減低,一定程度上節約了時間和操作成本,這可作為一種快速檢測技術在實驗室當中進行廣泛應用。目前應用在化妝品中糖皮質激素的研究較少。譚攀等[21]研究建立了應用酶聯免疫分析法測定地索奈德的方法。通過該法原理,檢測的靈敏度有所提高。對化妝品、保健食品的回收率為82%～105%。同樣其他糖皮質激素藥物免疫檢測靈敏度可用該法提升,能有效快速篩查食品和化妝品中的地索奈德。

3 總結與展望

化妝品作為人民生活中不可缺失的一部分,其安全問題也極度受到關注,為確保消費者的使用安全,消除安全隱患,檢測其違禁添加的物質極為重要,也是市場監督中最重要的一環。目前,化妝品中糖皮質激素含量的檢測方法有很多,但各方法都有其優點和缺點,選擇檢測方法時應關注樣品類型、檢測需求及其效益性。因此,對于化妝品中可能存在的非法添加物糖皮質激素的含量及其種類,檢測方法和手段應當結合樣品的相關性質、實驗室條件、儀器、成本及工作需求來挑選,做到更好地監督、監管化妝品的使用安全、維護消費者身心利益。