血清閉鎖蛋白和閉鎖小帶蛋白1表達與老年急性腦梗死患者認知功能障礙的相關性

王景 董坤 陳海云 楊青蘭 (三亞中心醫院神經內科，海南 三亞 572000)

急性腦梗死是由腦組織內部缺血而引起的神經功能障礙性疾病，多發于老年人，發病率呈逐年上升的趨勢，發病突然、進展迅速、致殘致死率高，若未及時治療，往往可引發認知功能障礙、偏癱等并發癥〔1～3〕。因此，及時對老年急性腦梗死患者認知功能進行有效評估對該病的治療及預后改善具有重大的指導意義。炎癥與急性腦梗死的發生密切相關，臨床上常通過檢測炎性因子監測病情〔4,5〕。閉鎖蛋白(occludin)、閉鎖小帶蛋白(ZO)-1與細胞間緊密連接有關，在大多疾病的炎性反應及免疫反應中起重要作用，且與血管內皮功能關系密切〔6,7〕。但關于血清occludin、ZO-1與老年急性腦梗死患者認知功能障礙關系的研究鮮見報道。故本研究通過檢測老年急性腦梗死患者血清occludin、ZO-1水平，并初步探討其與認知功能的相互關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年7月至2020年10月三亞中心醫院神經內科就診的老年急性腦梗死患者70例(觀察組)，平均腦梗死面積(4.1±0.4)cm2，腦梗死部位額葉27例，顳葉24例，其他位置19例，年齡60～73歲，平均(67.20±4.52)歲，其中男36例，女34例，平均心率(92.35±4.56)次/min，平均動脈壓(97.54±4.82)mmHg，平均體重指數(21.85±2.35)kg/m2。另選取同期三亞中心醫院健康體檢者70例(對照組)，其中男39例，女31例，年齡60～72歲，平均(66.13±4.10)歲，平均心率(77.32±3.94)次/min，平均動脈壓(85.67±4.96)mmHg，平均體重指數(22.17±2.42)kg/m2。急性腦梗死后認知功能障礙：參照2006年美國國立神經疾病和腦卒中研究所-加拿大腦卒中網(NINDS-CSN)〔8〕建立的關于血管源性認知功能障礙的統一標準。納入標準：①患者均符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》〔9〕中的相關診斷標準。②臨床資料完整。③發病48 h內入院。排除標準：①急性腦梗死發病前即存在認知功能障礙患者。②合并嚴重心理障礙、語言功能障礙、軀體疾病患者。③合并嚴重心、肝、腎等器官或內分泌系統疾病患者。④合并其他影響中樞神經系統疾病或腦外傷史患者。⑤合并顱內出血或有出血傾向患者。⑥合并血液系統疾病患者。患者及其家屬知情同意，并簽署同意書。本研究經三亞中心醫院倫理委員會批準通過。兩組年齡、性別及平均體重指數比較，差異無統計學意義(P>0.05)。觀察組平均動脈壓、平均心率明顯高于對照組(P<0.001)。

1.2血清occludin、ZO-1水平檢測 所有研究對象采集靜脈血5 ml，2 500 r/min離心10 min，取上層血清，-80℃保存。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清occludin、ZO-1水平，實驗步驟嚴格按照occludin ELISA試劑盒(批號：JL19530-48T，上海江萊生物科技有限公司)、ZO-1 ELISA試劑盒(批號：ml058798，上海酶聯生物科技有限公司)說明書進行。

1.3認知功能障礙評估 研究對象均于發病48 h內進行認知功能障礙評估。神經功能缺損情況采用美國國立衛生研究院腦卒中量表(NIHSS)評估，分值越高，神經功能損傷越嚴重〔10〕。認知功能障礙情況采用蒙特利爾認知評價(MoCA)量表評估，總分30分，26分及以上為正常〔11〕。

1.4統計學方法 采用SPSS22.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗、Pearson相關分析，采用受試者工作特征(ROC)曲線分析血清occludin和ZO-1對老年急性腦梗死的診斷價值，采用Logistic回歸進行影響因素分析。

2 結 果

2.1觀察組與對照組血清occludin、ZO-1水平比較 觀察組血清occludin、ZO-1水平明顯低于對照組(P<0.05)。見表1。

2.2觀察組與對照組NIHSS評分、MoCA評分比較 觀察組NIHSS評分明顯高于對照組，MoCA評分明顯低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組與對照組血清occludin、ZO-1、NIHSS評分、MoCA評分水平比較

2.3老年急性腦梗死患者血清occludin、ZO-1水平與NIHSS評分和MoCA評分的相關性 老年急性腦梗死患者血清occludin水平與NIHSS評分呈負相關(r=-0.594，P<0.001)，與MoCA評分呈正相關(r=0.556，P<0.001)；血清ZO-1與NIHSS評分呈負相關(r=-0.560，P<0.001)，與MoCA評分呈正相關(r=0.551,P<0.001)。

2.4血清occludin和ZO-1對老年急性腦梗死的診斷價值 血清occludin診斷老年急性腦梗死的曲線下面積為0.885(95%CI：0.824～0.945，P<0.001)，截斷值為41.152 ng/ml，敏感度為92.9%，特異度為77.1%。血清ZO-1診斷老年急性腦梗死的曲線下面積為0.666(95%CI：0.574～0.758，P<0.001)，截斷值為33.670 ng/ml，敏感度為81.4%，特異度為55.7%。血清occludin、ZO-1聯合診斷老年急性腦梗死的曲線下面積為0.928(95%CI：0.885～0.970，P<0.001)，敏感度為90.0%，特異性為84.3%。見圖 1。

圖1 血清occludin和ZO-1對老年急性腦梗死的診斷價值

2.5影響老年急性腦梗死患者認知功能障礙的Logistic回歸分析 以血清occludin和ZO-1均值為

界限，分為高表達和低表達，以血清occludin和ZO-1表達水平為自變量，以老年急性腦梗死患者是否發生認知功能障礙為因變量，進行Logistic回歸分析，經校正混雜因素后結果顯示，血清occludin和ZO-1低表達均為影響老年急性腦梗死患者認知功能障礙的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 影響老年急性腦梗死患者認知功能障礙的Logistic回歸分析

3 討 論

腦梗死多發于老年群體，致病原因復雜。急性腦梗死是多種外界、自身因素共同作用的結果，發病率、病死率、致殘率均較高，且隨著疾病的進展，會引起一定程度的神經功能損傷和認知功能減退，患者預后差，極大地降低了生活質量〔12，13〕。劉琦等〔14〕研究指出，與健康者比較，老年急性腦梗死患者NHISS評分明顯升高、MoCA評分明顯降低，患者認知功能障礙程度較高。本研究結果提示老年急性腦梗死患者可能存在較嚴重的認知功能障礙。

炎性反應與急性腦梗死后繼發神經損傷密切相關，炎性因子水平表現為明顯的升高趨勢，在認知功能障礙發生及發展中發揮重要作用〔15,16〕。occludin、ZO-1均是緊密連接蛋白的主要成分。occludin能夠參與機體內的炎性反應和免疫反應。ZO-1在調節細胞物質轉運、細胞增殖分化等過程中發揮重要作用〔17,18〕。吳晌犢〔19〕研究表明，潰瘍性結腸炎患者血清occludin和ZO-1水平明顯降低，在該疾病的炎性反應及免疫反應中起重要作用。緊密連接是由跨膜蛋白、外周膜蛋白和細胞骨架蛋白等多種蛋白組成的復合體，構成環繞細胞的線狀結構，維持緊密連接的結構和功能。緊密連接具有復雜架構的動態結構，是形成血液與大腦之間血腦屏障的主要結構成分〔20〕。occludin可調控緊密連接的通透性、維持細胞極性，表達于各種細胞和組織中，且表達量較其他血管內皮細胞明顯升高，并具有調節血腦屏障功能的作用〔21〕。ZO-1表達于各種組織和細胞中，主要作用是維持細胞組織的連接性，與其同源異構體ZO-2、ZO-3一起維持和調節上皮屏障功能，與血腦屏障損傷有著較為密切的關系，可作為血腦屏障破壞的標志性蛋白〔22，23〕。相關研究指出，occludin、ZO-1相互作用有助于緊密連接屏障的調節，能夠調節血腦屏障的通透性，且二者表達量多少與血管的通透性增加與否密切相關〔24〕。

本研究結果表明血清occludin、ZO-1可能通過在機體炎性反應和免疫反應中發揮作用，進而參與老年急性腦梗死的發病機制，并發揮其調節血腦屏障功能的作用，在老年急性腦梗死繼發認知功能障礙的過程中承擔重要角色。本研究ROC曲線分析結果表明血清occludin、ZO-1水平對老年急性腦梗死具有一定的診斷價值，能夠在一定程度上提示該疾病的發生。二者聯合檢測對老年急性腦梗死的診斷價值更高。本研究Pearson相關分析結果表明血清occludin、ZO-1水平變化與老年急性腦梗死患者發生認知功能障礙存在一定相關性，其水平降低提示老年急性腦梗死患者發生認知功能障礙的風險較大，二者可能作為老年急性腦梗死診斷和評估認知功能障礙的輔助指標。本研究經校正混雜因素后，Logistic回歸分析結果也進一步說明血清occludin和ZO-1表達水平與老年急性腦梗死患者認知功能障礙密切相關。