魚用鎮靜劑的種類及檢測方法

陳博豪，王立坤，張威，郭平，匡佩琳*

1.江西農業大學（南昌 330045）；2.江西省檢驗檢測認證總院食品檢驗檢測研究院（南昌 330046）

隨著時代和社會的不斷發展，廣大消費者對于魚類等水產品的需求日益增多，而新鮮與否成了決定其品質和價格的一個重要影響因素。由于我國地域遼闊，全國各地出產的水產品種類五花八門，為了滿足不同地區、不同年齡層人群的口味需求，鮮活魚在全國各地的流通運輸也成為常態，這也使得運輸過程中活魚聚集的數量更加密集。在運輸途中，工作人員搬運時的磕碰或車輛的劇烈振動可能會導致魚類受到驚嚇，產生活動加強、運動增加、躁動不安、翻滾彈跳等應激反應，經過一定時間后，魚類出現進食量減少或不進食等癥狀，從而致使魚體受損甚至死亡，影響銷售。為解決這一問題，大量商販會通過在這些水產品飼養、捕撈和運輸過程中加入鎮靜劑類藥物，降低其生理代謝活動，提高成活率。

鎮靜劑是一類可以減弱某些器官或組織的活性，其作用機理主要通過抑制生物的中樞神經系統來起到麻醉或者鎮靜作用的藥物。它具有抗驚厥、抗焦躁、鎮靜催眠等作用。此類藥物的代謝周期普遍較長，給動物服用后容易積留在體內，人在大量食用這種服用過鎮靜劑的動物后可能會對中樞神經系統造成不良影響。

在水產領域常用的鎮靜劑包括丁香酚、異丁香酚、苯佐卡因和間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（Tricaine methanesulfonate，MS-222）。近年來，一些具有成癮性的鎮靜劑類藥物被不法商販濫用，而鎮靜劑的殘留和檢測問題也成為社會廣泛關注的話題之一。本文對市場上常見的魚用鎮靜劑以及各類檢測方法進行了概述，以期為我國魚用鎮靜劑的規范使用和有關部門的監管執法等提供借鑒。

1 魚用鎮靜劑的種類

1.1 MS-222

MS-222，化學名稱為間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽，分子式C10H15NO5S。從外觀上來看，MS-222為白色的結晶或粉末狀，熔點149.5 ℃，易溶于淡水或海水中，其水溶液呈無色透明狀。作為經美國FDA批準的能夠在魚類運輸途中合理使用的鎮靜劑，MS-222的優點就是麻醉的速度快，在魚體內的藥物代謝快，并且殘留的藥物含量極少。

經過長期的試驗和觀察發現，MS-222的藥物殘留主要蓄積在魚的脾脹和肝臟中，在肌肉中的含量甚微。MS-222在水溶液中溶解后主要是通過魚體的皮膚和腮等部位傳導至其位于腦部的感受中樞，從而達到抑制魚體的反射及活動能力的效果，使魚體的動作遲緩、呼吸速率減慢、代謝速度降低、耗氧量減少，從而進入一種類似休眠的狀態。只要根據魚的種類、大小，以及季節和水溫等條件控制好MS-222的用量，無論是對魚和人來說都是較為安全的，因而可被用于大多數魚類的運輸中。

1.2 丁香酚

丁香酚，化學名稱為4-烯丙基-2-甲氧基苯酚，分子式為C10H12O2，是一種極為特殊的、具有天然丁香花氣味的無色或淡黃色液體，與水不互溶。最早在1972年，丁香酚這種物質在日本的遠藤地區被發現，經過長時間的研究證明其對魚類具有一定的麻醉作用后，丁香酚開始被廣泛地應用于魚類的麻醉中[1]。

其主要的作用機制是丁香酚最開始會抑制魚類的腦皮質，隨著時間的推移慢慢作用于魚類的基底核及小腦，最后作用于脊髓以達到麻醉魚類的效果[2]。除了用于魚類的麻醉以外，丁香酚由于其天然的丁香花味道，成為了許多淡香水和護膚品中不可或缺的香料成分，同時也可作為滅蟲劑、添加劑以及食品香料來使用，因為具有抑菌殺毒作用，丁香酚在醫學上也有較為廣泛的應用。

1.3 苯佐卡因

苯佐卡因，化學名稱為對氨基苯甲酸乙酯，分子式是C9H11NO2。苯佐卡因是一種有機化合物，它的外觀為無色斜方形結晶，難溶于水。在臨床上，苯佐卡因常被用于各種皮膚病的止癢以及傷口和潰瘍的止疼。當苯佐卡因被用于魚類的麻醉時，需要在乙醇的幫助下溶解使用[3]。其作用機制是與黏膜或皮膚的脂層相互結合，進而與皮膚黏膜的神經組織發生反應，阻斷神經沖動的傳導，這也會導致魚體各部位的感覺暫時喪失，感覺神經末梢被麻醉，魚體的機能變得遲緩，從而達到使魚類麻醉的作用。

1.4 苯巴比妥

苯巴比妥的化學名稱為5-乙基-5-苯基-2,4,6-（1H,3H,5H）-嘧啶三酮，分子式是C12H12N2O3。從外觀上看，苯巴比妥是一種白色有光澤的結晶性粉末狀物質，其與水不互溶，溶于乙醇、氯仿以及乙醚。苯巴比妥屬于巴比妥類安眠鎮靜藥物，在魚類的飼養階段向水中添加一定濃度的苯巴比妥或者直接對魚體進行肌肉注射，在控制好用量的前提下，能夠達到麻醉魚體并且不導致其死亡的效果。在進行魚體的運輸過程中加入這類藥物可以降低魚體的死亡率，有效地提高經濟效益[4]。

1.5 2-苯氧乙醇

2-苯氧乙醇（2-phenoxyethanol）又稱乙二醇苯醚，可由乙二醇和苯酚醚化合成，分子式為C8H10O2。2-苯氧乙醇是一種無色并且帶有些許黏性的液體，具有獨特芳香氣味，微溶于水，易溶于乙醇及氫氧化鈉。由于價格低廉、使用方便、反應迅速及具有殺菌消毒等功能，2-苯氧乙醇被廣泛應用于魚體的麻醉中[5-6]。但經過研究證明，2-苯氧乙醇的藥效持續時間長，魚在復蘇后3 d體內仍殘存著一些藥物，如此若反復使用2-苯氧乙醇進行麻醉，魚體必然會產生耐藥性。此外，2-苯氧乙醇會產生一定的不良反應，它會刺激魚的細胞膜，降低其血液的pH，增加血液中的葡萄糖水平[7]。國際上尚未規定2-苯氧乙醇的最高殘留限量（MRL），歐盟不允許其用于魚類的麻醉[8]。

1.6 乙醚

乙醚的分子式為C2H5OC2H5，其外觀為無色透明狀的液體，聞起來有特殊的刺激性氣味且本身極容易揮發。乙醚作為一種吸入性的全身麻醉劑，它的麻醉機理相較于市面上較為常見的一些鎮靜劑來說比較特殊，主要是通過使神經細胞細胞膜上的脂質分子排列異常，從而導致膜蛋白失去正常功能進而產生麻醉效果。乙醚很早以前就被應用于魚類的麻醉中，張恒等[9]使用乙醚作為麻醉劑來麻醉活魚，經過反復試驗的驗證，乙醚對活魚的麻醉效果較為明顯，能夠提高活魚在運輸過程中的存活率。

2 魚用鎮靜劑的檢測方法

水產品中鎮靜類藥物的常用檢測方法有高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）[10-11]、氣相色譜-串聯質譜法（gas chromatography-tandem mass spectrometry，GC-MS/MS）[12]、液相色譜-串聯質譜法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）[13-14]和酶聯免疫吸附測定法（enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）。

2.1 高效液相色譜法

氣相色譜法的使用范圍很廣泛，但并不適用于揮發性較差及熱不穩定的化學物質的分離，而液相色譜正是用于這類化合物的有效手段。在傳統的液相色譜中，流動相是靠著溶劑自身的重力作用完成對樣品的分離過程，這也是液相色譜的缺點所在：分析速度慢，不能立即完成檢測。為了解決這一問題，20世紀60年代市面上開始出現利用高壓泵來輸送流動相，同時采用新型的柱填料和高靈敏度的檢測器的液相色譜儀，逐漸發展為現如今的高效液相色譜法[15]。

高效液相色譜法具有操作簡便、迅速、分離效能高、分析速度快等優點，實現色譜分離過程的自動化與高效化。王彩霞等[16]使用乙腈超聲提取，通過高效液相色譜法來測定鮰魚體內丁香酚的殘留量。檢出限為0.045 mg/kg，在添加濃度0.40～3.20 mg/kg的情況下，加標回收率達到78.67%～90.54%。黃武等[17]選用乙腈作為提取溶劑，經過超聲提取以及用正己烷除油脫脂重復凈化2次后，通過高效液相色譜法檢測羅非魚中丁香酚的殘留情況。檢出限為0.03 mg/kg，定量限為0.10 mg/kg，加標回收率達到80.5%～101.2%。焦亞琴等[18]采取甲醇和乙腈進行提取和過濾樣品，通過高效液相色譜法測定鯉魚血漿中的丁香酚含量。檢出限為0.828 ng/mL，定量限為1.656 ng/mL，加標回收率達到86.74%。

2.2 氣相色譜-串聯質譜法

氣相色譜-串聯質譜法發展較早，技術也發展得較為成熟，是分析殘留物質的較為理想的檢測手段之一。自20世紀50年代開始發展，氣相色譜-串聯質譜法是迄今為止發展最完善并且也是應用最為廣泛的技術，非常適用于高靈敏度、廣適用范圍、復雜基質的多殘留物質的測定。但氣相色譜-串聯質譜法一個很大的限制就是其要求被檢測的樣品需要具有一定的蒸氣壓，而在常見的檢測樣品中只有20%左右的樣品可以不提前經過相應的處理而直接進行檢測，在大多數情況下被檢測的樣品都需要經過一定的人工處理，使之具有一定的蒸汽壓后才能進行分析。

氣相色譜-串聯質譜法兼具氣相色譜優良的分離性和質譜鑒定的高選擇性，結果準確可靠。田麗等[19]采用正己烷-二氯甲烷的混合溶液作為提取液，通過基于三重四極桿的氣相色譜-串聯質譜法測定了金槍魚中的多氯聯苯，檢出限為0.02～0.10 μg/kg，平均回收率達到80.0%～114.0%。王正全等[20]用二氯甲烷和正己烷進行萃取，通過氣相色譜-串聯質譜法測定水產品運輸水和暫養水中的丁香酚殘留，方法的檢出限為0.5 μg/L，定量限為1.5 μg/L，加標回收率達到82.3%～109.9%。陸添文等[21]采用正己烷提取，苯基固相萃取柱凈化，通過基于三重四極桿的氣相色譜-串聯質譜法測定池塘養殖水中3種丁香酚類的麻醉劑，丁香酚、異丁香酚及甲基丁香酚的檢出限分別為0.05，0.13和0.03 μg/L，定量限分別為0.17，0.43和0.10 μg/L，回收率分別達到98.5%～101.6%，98.4%～101.3%和98.5%～104.6%。

2.3 液相色譜-串聯質譜法

液相色譜-串聯質譜法雖然起步較晚，在20世紀70年代才開始研究，但經過比氣相色譜-串聯質譜法更長時間的實踐后，其成為具有更廣闊應用前景的技術。它結合液相色譜儀的強大分離效能及質譜儀優秀的組分鑒定能力，可將混合物先分離成單一組分，再進行解析檢測。對極性或熱不穩定性太強的農藥來說，選用液相色譜-串聯質譜法的優點就是其儀器的檢測靈敏度遠超其他分析方法。正因為液相色譜-質譜聯用儀具有靈敏度高、選擇性好等優點，目前市面上常見的鎮靜劑的檢測主要就是通過液相色譜-串聯質譜法進行的。

胡海山等[22]使用乙腈提取樣品，經過Oasis HLB固相萃取柱凈化后收集，通過液相色譜-串聯質譜法測定動物源性食品中5種鎮靜劑藥物殘留量，檢出限為0.07～0.11 μg/kg，經檢測，樣品的加標回收率能夠達到94.5%～110.4%。何曉明等[23]通過選用經過氨化的乙腈作為提取劑提取樣品，選用增強型已去除脂類基質的吸附劑進行凈化，通過高效液相色譜-串聯質譜儀測定草魚、梭子蟹等水產品中的13種鎮靜劑，方法的檢出限為0.010 3～0.147 0 μg/kg，定量限為0.034 0～0.485 0 μg/kg，平均加標回收率達到70.7%～108.0%。

3 結語

我國地大物博，魚類物種資源豐富，隨著市場消費水平的不斷提高，許多問題也隨之而來。無論是在養殖過程或是運輸途中鎮靜劑類藥物的濫用問題一直都是一個不可避免的話題。盲目、不合理地使用鎮靜劑，不僅會導致魚體的個體狀況惡化，嚴重的甚至還會影響到消費者的身體健康。我國對于魚用鎮靜劑的監管及相關標準、法律法規等尚不完善，這也給一些投機取巧、心懷僥幸心理的商販可乘之機。現有的魚用鎮靜劑檢測方法主要以各種儀器分析為主，受人員、設備、前處理方法等多方面掣肘，很可能達不到執法人員現場監管及推廣普及的效果。正是因為存在如此多的困難，開發適用于多類魚用鎮靜劑的快速檢測技術方法有著廣闊的前景和市場潛力。除此之外，如何研發出一種對人體無毒無害的魚用鎮靜劑也是一個值得思考的方向。