參竹降糖方對(duì)氣陰兩虛型高血糖大鼠免疫內(nèi)分泌及骨骼肌胰島素抵抗的影響

高晶 扈覲璽 劉佳琪 姜斯佳 馮穎童 王景霞 趙晉燕 曾亞力

2 型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)在中醫(yī)以“消渴”論治,臨床研究表明氣陰兩虛證在糖尿病中最為多見,并為糖尿病前期的常見證型[1],且有醫(yī)家認(rèn)為氣陰兩虛證可貫穿糖尿病的整個(gè)病程[2]。 T2DM 患者多因暴飲暴食、過(guò)食肥甘厚膩等致食積、濕熱蘊(yùn)結(jié)于脾胃,使脾胃受損,運(yùn)化失常,致清陽(yáng)不升、濁陰不降,若日久遷延不愈,燥熱之邪耗氣傷津,則發(fā)為氣陰兩虛之證[3]。 當(dāng)代名中醫(yī)施今墨先生指出:“血糖者,飲食所化之精微也,若脾失健運(yùn),血中之精就不能輸布臟腑。”[4]可見脾失健運(yùn)、精不正化是其關(guān)鍵,故當(dāng)以健脾益氣為主,顧護(hù)脾胃,兼以養(yǎng)陰生津,保全津液,達(dá)到止渴之效。“參竹降糖方”是根據(jù)中醫(yī)辨證保健理論組方而成[5],以人參健脾益氣,助中焦健運(yùn),津液生化有源,葛根升清降濁,恢復(fù)脾氣散精之能,輔以玉竹、桑葉、青錢柳養(yǎng)陰潤(rùn)燥,生津止渴,以及蜂膠補(bǔ)虛弱、止消渴,共奏益氣養(yǎng)陰,生津止渴之功,且益氣而不助熱,養(yǎng)陰而不滋膩。 前期研究顯示參竹降糖方能降低氣陰兩虛型高血糖模型大鼠的空腹血糖,調(diào)節(jié)脂代謝紊亂,緩解胰島素抵抗,提高胰島素敏感性及增強(qiáng)胰島β 細(xì)胞功能,改善體質(zhì)癥狀[6]。 本研究進(jìn)一步觀察參竹降糖方對(duì)氣陰兩虛型高血糖模型大鼠證候相關(guān)的免疫和內(nèi)分泌指標(biāo),及其對(duì)肌肉組織糖代謝的影響,并從骨骼肌胰島素信號(hào)通路探討其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

雄性 SD 大鼠90 只,體質(zhì)量(220±20)g,購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[許可證號(hào):SCXK(京)2016-0006],SPF 級(jí)大鼠維持飼料,由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供;特殊高脂飼料(豬油10%、蔗糖15%、蛋黃粉10%、酪蛋白5%、膽固醇1.2%、膽酸鈉0.2%、碳酸氫鈣 0.6%、石粉0.4%、鼠維持飼料52.6%)由北京斯貝福生物技術(shù)有限公司提供;動(dòng)物飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的屏障環(huán)境中,室溫為(24±2)℃,空氣相對(duì)濕度為(50±10)%,光照 12 小時(shí)/天,自由飲水。 動(dòng)物倫理審批號(hào):BUCM-4-2019110201-4032。

1.2 藥物

人 參 ( 批 號(hào): 20190501-1)、 桑 葉 ( 批 號(hào):20190501)、葛根(批號(hào):20190501)、玉竹(批號(hào):20190501)、青錢柳(批號(hào):20190518),以上飲片均購(gòu)于河北祁新中藥顆粒飲片有限公司;蜂膠粉(含70%蜂膠)購(gòu)于河南長(zhǎng)葛(批號(hào):20190618)。 制備方法:人參、玉竹、桑葉、葛根、青錢柳、蜂膠粉按以下比例 1.5 ∶3 ∶3 ∶4 ∶3 ∶0.5(單位:g),除去蜂膠粉以外中藥飲片均用水提濃縮而得,每次配藥時(shí)再按比例加入蜂膠粉。 十味消渴膠囊購(gòu)于天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司(批號(hào):09950063)。

1.3 試劑與儀器

鏈脲佐菌素(streptozotoci,STZ,美國(guó) Sigma 公司,批號(hào):S0130);L-甲狀腺素鈉(美國(guó)BioRuler,批號(hào):r5703);肌糖原(批號(hào):20200309)、肝糖原(批號(hào):20200309)、游離脂肪酸(free fatty acid,FFA,批號(hào):20200110)、免疫球蛋白 G(immunoglobulin G,IgG,批號(hào):20200310)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M, IgM,批號(hào):20200310)、三磷酸腺苷酶(adenosine triphosphatase, ATP, 批 號(hào): 20200311)、 雌 二 醇(estradiol,E2,批號(hào):20200312),睪酮(testosterone,T,批號(hào):20200312)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD, 批 號(hào): 20200312 )、 丙 二 醛(malondialdehyde,MDA,批號(hào):20200110)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX,批號(hào):20200313)、白細(xì)胞介素6(interleukin 6,IL-6,批號(hào):20200110)、白細(xì)胞介素 1β(interleukin1β,IL-1β,批號(hào):20200110)、腫瘤壞死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α,批號(hào):20200311),以上試劑盒均夠自北京華英生物技術(shù)研究所;促甲狀腺激試劑盒(thyroidstimulatinghormone,TSH,優(yōu)爾生生物科技有限公司,批號(hào):L191114633);三磷酸腺苷試劑盒(adenosine triphosphate,ATP,批號(hào):20200309)、BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒(批號(hào):KGP902),均夠自南京建成生物工程有限公司;蛋白裂解液RIPA(美國(guó)Sigma 公司,批號(hào):r0278);抗兔 IgG HRP 辣根過(guò)氧化物酶(美國(guó)Cell Signaling 公司,批號(hào):ab6721);兔抗鼠胰島素受體抗體(insulin receptor,INsR,bioss 公司,貨號(hào):bs-7531R);兔抗鼠胰島素受體底物1 抗體(insulin receptor substrate1,IRS1,abcam 公司,貨號(hào):ab66153);兔抗鼠磷脂酰肌醇3 激酶抗體(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K,abclonal 公司,貨號(hào):A0265);兔抗鼠葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4 抗體(glucose transporter 4,GLUT4,abcam 公司,貨號(hào):ab188317)。

臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(Heal Force, 型號(hào):Neofuge 15R),渦旋混合器(Servicebio,型號(hào):MXF),全自動(dòng)研磨儀(賽維爾生物,型號(hào):KH-Ⅲ),全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)Rayto 公司,型號(hào):CHEMRAY 120),酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo 公司,型號(hào):1410101),紫外分光光度計(jì)(上海現(xiàn)科儀器有限公司,型號(hào):752-P 型),脫色搖床(北京六一儀器廠,型號(hào):WD-9405A),電泳儀(美國(guó)Bio-Rad 公司,型號(hào):1645050-OG),轉(zhuǎn)膜儀(美國(guó)Bio-Rad 公司,型號(hào):1704150),凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)UVP 公司,型號(hào):e142362)。

1.4 分組與模型制備

1.4.1 分組 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5 天后,禁食過(guò)夜12 小時(shí)后,使用便攜式血糖測(cè)定儀取尾靜脈血測(cè)量血糖值,測(cè)定給葡萄糖前(即0 小時(shí))血糖值,在測(cè)定給2.5 g/kg BW 葡萄糖后0.5、2 小時(shí)血糖值,作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)值[6]。 以0、0.5 小時(shí)血糖水平分6 個(gè)組,每組15 只,即空白組、模型組、陽(yáng)性藥組、參竹降糖方高、中、低劑量組。

1.4.2 模型制備 采用胰島素抵抗糖/脂代謝紊亂模型,結(jié)合中醫(yī)氣陰兩虛證候的造模方法,建立由勞倦傷脾、T4 皮下注射、高脂飼料喂養(yǎng)合并STZ 注射造成的氣陰兩虛型高血糖大鼠模型[6-8]。 適應(yīng)性喂養(yǎng)5 天后,開始造模,造模周期維持33 天。 操作方法:(1)第一周各組給予維持飼料飼養(yǎng),一周后模型組、陽(yáng)性藥組及參竹降糖方高、中、低劑量組更換高熱能飼料,喂養(yǎng)3 周。 (2)負(fù)重游泳力竭運(yùn)動(dòng):在實(shí)驗(yàn)的8 ~21 天灌胃給藥結(jié)束1 小時(shí)后進(jìn)行負(fù)重力竭游泳運(yùn)動(dòng),在大鼠尾根部負(fù)荷其體質(zhì)量10%的鉛塊作為重物,放入0.8 m×0.8 m×1 m 的游泳桶內(nèi),水深0.7 m,水溫(20±5)℃,保證大鼠在水中不能用尾巴接觸桶底,每桶放置2 只[9]。 力竭標(biāo)準(zhǔn):①游泳動(dòng)作明顯失調(diào),不能再堅(jiān)持。 ②大鼠鼻尖沒(méi)過(guò)水面超過(guò)3 秒不能回到水面。 停止游泳運(yùn)動(dòng),及時(shí)撈起,吹干毛發(fā)。 (3)T4 皮下注射:在實(shí)驗(yàn)第22 ~28天下午14:00 進(jìn)行上頸部皮下注射T4 混懸液(L-甲狀腺素鈉,0.2 mg/kg)。 (4)在實(shí)驗(yàn)第 28 天 T4 注射結(jié)束后,模型組、陽(yáng)性藥(十味消渴膠囊)組及參竹降糖方高、中、低劑量組禁食24 小時(shí)(不禁水),在實(shí)驗(yàn)第29 天給予2%STZ 溶液(30 mg/kg)一次性腹腔注射(現(xiàn)用現(xiàn)配,取適量STZ,錫紙避光于冰塊之中避光保存,用0.1 mol/L 檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液在冰浴中配置溶液,pH=4.5),注射量為1 mL/100 g體質(zhì)量。 注射后繼續(xù)給予高熱能飼料喂飼5 天,實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.5 給藥方法

適應(yīng)性喂養(yǎng)結(jié)束后,從實(shí)驗(yàn)開始第一天給每組動(dòng)物進(jìn)行預(yù)防給藥,灌胃時(shí)間連續(xù)33 天(給藥體積:1 mL/100 g)。 空白對(duì)照組不做處理,模型組給予同體積溶劑,陽(yáng)性藥組給予十味消渴膠囊1.32 g/kg(相當(dāng)于成人7.92 g/天)、參竹降糖方高、中、低劑量組分別灌胃參竹降糖方混懸液7.5 g/kg、2.5 g/kg、1.25 g/kg(相當(dāng)于成人 45 g/天、15 g/天、7.5 g/天),灌胃體積為 10 mL/kg。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.6.1 血清中肌糖原、肝糖原、FFA、IgG、IgM、激素等指標(biāo)的檢測(cè) 大鼠巴比妥鈉腹腔注射麻醉腹主動(dòng)脈取血,3000 r/分鐘、離心半徑2 cm,離心10 分鐘,取上清液,4℃保存待測(cè)。 采用比色法在全自動(dòng)生化儀檢測(cè)各組大鼠血清中肝糖原、肌糖原、FFA、IgG、IgM、ATP、ATP 酶水平。 采用酶聯(lián)免疫法按照試劑盒說(shuō)明檢測(cè)血清中E2、T、TSH 水平。

1.6.2 骨骼肌中 SOD、MDA、GSH-PX、IL-6、IL-1β、TNF-α 的檢測(cè) 大鼠巴比妥鈉腹腔注射麻醉,剪開大鼠后肢內(nèi)側(cè)皮膚,暴露股四頭肌,順著股骨方向用眼科剪剪下肌肉組織,并放入凍存管,迅速液氮凍存,并保存在-80℃冰箱中備用。 采用比色法按試劑盒說(shuō)明在全自動(dòng)生化儀上檢測(cè)各組大鼠肌肉中SOD、MDA、GSH-PX 的含量。 采用酶聯(lián)免疫法按照試劑盒說(shuō)明檢測(cè)骨骼肌中 IL-6、IL-1β、TNF-α 的含量。

1.6.3 骨骼肌中 IRS1、INsR、PI3K、GLUT4 蛋白表達(dá)的檢測(cè) 用RIPA 蛋白裂解液抽提蛋白質(zhì)。 BCA法測(cè)定蛋白含量,總蛋白20 μg 上樣,經(jīng)10% SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,電轉(zhuǎn)移至 NC 膜上,用含5%脫脂奶粉的TBST 封閉后加入1 ∶1 000 稀釋的相應(yīng)的一抗,4℃搖床孵育過(guò)夜,TBST 漂洗3 次,加入1 ∶2 000辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗,室溫孵育1小時(shí),TBST 漂洗3 次后,用 Western Blot 熒光檢測(cè)試劑盒顯影、定影。 結(jié)果用圖象分析儀分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SAS 9.4 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 數(shù)值用均值±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布及方差齊性檢驗(yàn),組間數(shù)據(jù)比較用單因素方差(One-way ANOVA)分析,各組方差齊時(shí)采用Levene 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;方差不齊采用Welch 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P<0.05 表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清肝糖原、肌糖原、FFA 水平比較

與空白組進(jìn)行比較,模型組大鼠肝糖原、肌糖原水平顯著降低(P<0.01),FFA 水平顯著升高(P<0.01)。 與模型組進(jìn)行比較,陽(yáng)性藥組和參竹降糖方高、中、低劑量大鼠肝糖原、肌糖原顯著升高(P<0.01),FFA 顯著降低(P<0.01)。 見表 1。

表1 各組大鼠血清肝糖原、肌糖原、FFA 水平的比較()

表1 各組大鼠血清肝糖原、肌糖原、FFA 水平的比較()

注: 與空白組比較, aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01。

組別 鼠只 肝糖原(mg/g) 肌糖原(mg/g) FFA(mmol/L)10 26.66±2.94 2.77±0.34 0.38±0.01模型組 10 15.78±2.04b 1.58±0.21b 0.58±0.03b陽(yáng)性藥組 10 25.43±1.36d 2.60±0.16d 0.32±0.02d參竹降糖方低劑量組 10 22.83±2.59d 2.38±0.29d 0.35±0.02d參竹降糖方中劑量組 10 19.12±3.38d 1.96±0.30d 0.33±0.06d參竹降糖方高劑量組 10 19.37±1.91d 2.07±0.15d 0.31±0.03空白組d

2.2 各組大鼠血清 IgG、IgM、ATP、ATP 酶水平的比較

與空白組進(jìn)行比較,模型對(duì)照組大鼠IgG、IgM、ATP、ATP 酶顯著降低(P<0.01)。 與模型組進(jìn)行比較,陽(yáng)性藥組大鼠IgG、IgM、ATP、ATP 酶升高(P<0.01),參竹降糖方高、中、低劑量組 IgG、IgM、ATP、ATP 酶顯著升高(P<0.05,P<0.01)。 見表2。

表2 各組大鼠血清IgG、IgM、ATP、ATP 酶水平的比較()

表2 各組大鼠血清IgG、IgM、ATP、ATP 酶水平的比較()

注: 與空白組比較, aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01。

組別 鼠只 IgG(g/L) IgM(g/L) ATP(μmol/L) ATP 酶(U/mL)10 7.03±0.75 0.61±0.09 1.74±0.17 0.53±0.08模型組 10 5.24±1.03b 0.42±0.08b 1.31±0.30b 0.24±0.03b陽(yáng)性藥組 10 5.78±0.62 0.53±0.08d 1.79±0.09d 0.45±0.16d參竹降糖方低劑量組 10 6.70±0.16d 0.57±0.16c 1.83±0.21d 0.35±0.05d參竹降糖方中劑量組 10 6.68±1.02d 0.60±0.06d 1.83±1.68d 0.35±0.09d參竹降糖方高劑量組 10 6.45±1.38c 0.55±0.13c 1.61±0.12c 0.35±0.04空白組d

2.3 各組大鼠血清E2、T、TSH 水平比較

與空白組進(jìn)行比較,模型組大鼠血清中T 水平顯著降低(P<0.01),E2、TSH 顯著升高(P<0.01)。與模型組進(jìn)行比較,陽(yáng)性藥組和參竹降糖高、中、低劑量組大鼠T 水平顯著升高(P<0.05,P<0.01)、E2、TSH 顯著降低(P<0.01)。 見表 3。

表3 各組大鼠血清E2、T、TSH 水平比較()

表3 各組大鼠血清E2、T、TSH 水平比較()

注: 與空白組比較, aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01。

組別 鼠只 E2(pg/mL) T(ng/mL) TSH(pg/mL)10 41.93±3.08 2.28±0.58 711.13±171.42模型組 10 46.38±2.48b 0.82±0.10b 1251.04±175.51b陽(yáng)性藥組 10 36.62±8.06d 1.25±0.46d 820.10±254.78d參竹降糖方低劑量組 10 34.10±2.53d 1.85±0.63d 748.51±209.72d參竹降糖方中劑量組 10 35.03±7.36d 1.45±0.31d 600.58±117.43d參竹降糖方高劑量組 10 37.66±4.66d 1.30±0.61c 762.57±93.96空白組d

2.4 各組大鼠骨骼肌 SOD、MDA、GSH-PX 水平比較

與空白組進(jìn)行比較,模型組大鼠MDA 顯著升高(P<0.01),SOD、GSH-PX 顯著降低(P<0.01)。與模型組進(jìn)行比較,陽(yáng)性藥組和參竹降糖方高、中、低劑量組大鼠 MDA 顯著降低(P<0.01),SOD、GSH-PX顯著升高(P<0.01)。 見表 4。

表4 各組大鼠骨骼肌SOD、MDA、GSH-PX 水平的比較()

表4 各組大鼠骨骼肌SOD、MDA、GSH-PX 水平的比較()

注:與空白組比較, aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01。

組別 鼠只 SOD(U/mL) MDA(nmol/mL) GSH-PX(U/mL)10 10.39±0.46 0.56±0.02 191.00±8.45模型組 10 7.85±0.95b 0.99±0.04b 82.81±9.78b陽(yáng)性藥組 10 11.92±1.11d 0.69±0.05d 133.80±18.15d參竹降糖低劑量組 10 11.27±0.89d 0.61±0.05d 126.90±15.31d參竹降糖中劑量組 10 10.81±2.67d 0.63±0.03d 101.50±4.43d參竹降糖高劑量組 10 13.16±1.49d 0.73±0.10d 109.40±8.85空白組d

2.5 各組大鼠骨骼肌炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平的比較

與空白組進(jìn)行比較,模型組大鼠炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α 顯著升高(P<0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 與模型組進(jìn)行比較,陽(yáng)性藥組和參竹降糖方高劑量組、中劑量組、低劑量組大鼠IL-6、IL-1β、TNF-α顯著降低(P<0.05,P<0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表5。

表5 各組大鼠骨骼肌IL-6、IL-1β、TNF-α 水平的比較()

表5 各組大鼠骨骼肌IL-6、IL-1β、TNF-α 水平的比較()

注: 與空白組比較, aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01。

組別 鼠只 IL-1β(pg/mL) IL-6(pg/mL) TNF-α(pg/mL)10 1.74±0.18 8.77±0.54 5.99±0.65模型組 10 3.41±0.29b 16.42±3.54b 12.10±2.18b陽(yáng)性藥組 10 2.31±0.17d 8.82±0.69d 6.41±0.48d參竹降糖低劑量組 10 2.76±0.32d 9.36±1.10d 7.36±1.18d參竹降糖中劑量組 10 2.23±0.28d 13.21±1.23c 6.91±0.30d參竹降糖高劑量組 10 2.78±0.17d 12.50±1.82d 5.68±0.57空白組d

2.6 各組大鼠骨骼肌 INsR、IRS1、PI3K、GLUT4 蛋白表達(dá)水平的比較

與空白組進(jìn)行比較,模型組大鼠 IRS1、INsR、PI3K、GLUT4 蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01)。 與模型組進(jìn)行比較,陽(yáng)性藥組大鼠IRS1、PI3K、GLUT4 顯著升高(P<0.01),低劑量組 IRS1、PI3K、GLUT4 顯著升高(P<0.01),高、中劑量組 IRS1、INsR、PI3K、GLUT4 顯著升高(P<0.01,P<0.05)。 見表 6、圖 1。

圖1 各組大鼠骨骼肌IRS1、INsR、PI3K、GLUT4 蛋白條帶對(duì)比圖

表6 各組大鼠骨骼肌IRS1、INsR、PI3K、GLUT4 蛋白表達(dá)水平的比較()

表6 各組大鼠骨骼肌IRS1、INsR、PI3K、GLUT4 蛋白表達(dá)水平的比較()

注: 與空白組比較, aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01。

0.50±0.07 0.44±0.03 0.71±0.14 0.46±0.05模型組 6 0.33±0.06b 0.26±0.01b 0.42±0.02b 0.23±0.02b陽(yáng)性藥組 6 0.39±0.07 0.34±0.06d 0.59±0.10d 0.31±0.02d參竹降糖低劑量組 6 0.39±0.07 0.34±0.05d 0.57±0.07d 0.28±0.01d參竹降糖中劑量組 6 0.44±0.06d 0.31±0.04d 0.57±0.08d 0.30±0.04d參竹降糖高劑量組 6 0.42±0.07c 0.31±0.05c 0.59±0.11d 0.33±0.04 INsR IRS1 GLUT4 PI3K空白組組別 鼠只6 d

3 討論

糖原是葡萄糖在機(jī)體內(nèi)的主要儲(chǔ)存形式,主要包括肝糖原和肌糖原,二者可影響機(jī)體血糖水平調(diào)控,糖尿病胰島素抵抗影響葡萄糖進(jìn)入肝及骨骼肌細(xì)胞合成糖原,造成血糖水平升高。 本研究模型組大鼠肝糖原、肌糖原顯著下降,表明其血糖調(diào)控能力下降,參竹降糖方各劑量組能顯著增加肝糖原和肌糖原指數(shù),表明本方可增加糖原含量,調(diào)控血糖水平。 前期研究顯示,參竹降糖方不僅能調(diào)控血糖血脂水平,還能使氣陰兩虛型高血糖模型大鼠進(jìn)食量、飲水量、排便量、排尿量、肛溫降低,體質(zhì)量增加,毛色恢復(fù)光澤,情緒穩(wěn)定,說(shuō)明本方對(duì)氣陰兩虛證候表征也有明顯的改善作用[6]。 氣陰兩虛證候外在表現(xiàn)的癥狀和體征是由其內(nèi)在的生物學(xué)病理狀態(tài)所導(dǎo)致的,研究其內(nèi)在生物學(xué)指標(biāo)有助于闡明證候的科學(xué)內(nèi)涵。

有學(xué)者認(rèn)為中醫(yī)所講的脾主運(yùn)化之功與線粒體物質(zhì)能量代謝過(guò)程具有相似性,線粒體內(nèi)脂肪、糖及蛋白質(zhì)通過(guò)三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化生成ATP,為生命活動(dòng)供能,類似于脾運(yùn)化水谷精微并將之輸布全身[9]。 脾氣虛則機(jī)體運(yùn)化失常,線粒體能量代謝損傷,ATP 酶活性下降,氧化磷酸化產(chǎn)生的ATP 減少,產(chǎn)能減少,推動(dòng)機(jī)體的各項(xiàng)生命運(yùn)動(dòng)能力下降,導(dǎo)致免疫器官萎縮,免疫功能低下[10-12]。陰虛存在內(nèi)分泌激素分泌增加和產(chǎn)熱相對(duì)增加的病理狀態(tài)[13]。 TSH 可促進(jìn)甲狀腺素分泌,從而調(diào)控機(jī)體能量代謝,促進(jìn)糖的吸收,加速肝糖原等能量物質(zhì)的氧化分解。 研究發(fā)現(xiàn)在2 型糖尿病各證型患者中,氣陰兩虛證患者血清TSH 含量明顯增加[14]。高孕酮?dú)怅巸商撟CT2DM 男性患者胰島功能最差,E2 水平明顯升高[15]。 藥理研究顯示,腎陰虛雄性小鼠的血清E2、E2/T 升高,該結(jié)果與臨床研究相契合[16]。 在本實(shí)驗(yàn)中,模型組大鼠血清中ATP 含量,ATP 酶活力,IgG、IgM 含量均顯著降低,TSH 含量顯著升高,T 含量顯著降低,E2 含量顯著升高,說(shuō)明氣陰兩虛型高血糖大鼠機(jī)體內(nèi)能量代謝異常,供給不足,免疫功能下降,且甲狀腺激素、性激素均出現(xiàn)紊亂。 給與參竹降糖方,則能使模型大鼠的 ATP 含量,ATP 酶活力,IgG、IgM 含量均顯著升高,使TSH顯著降低,T 顯著升高,E2 顯著降低。

研究顯示,骨骼肌胰島素信號(hào)通路蛋白表達(dá)降低是胰島素抵抗產(chǎn)生的重要原因。 在正常狀態(tài)下[17],胰島素與細(xì)胞膜上的結(jié)合后,引起IRS1 酪氨酸化,進(jìn)而進(jìn)一步激活下游通路蛋白PI3K,被激活的PI3K 可加速GLUT4 從細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移至細(xì)胞膜,以增加葡萄糖的攝取[18]。 而病理狀態(tài)下,過(guò)量的FFA可促發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng),誘導(dǎo)炎癥因子釋放,進(jìn)而影響胰島素通路蛋白表達(dá)和信號(hào)傳遞[19-20]。 在本實(shí)驗(yàn)中,模型組大鼠血清FFA、骨骼肌MDA 水平顯著升高,SOD、GSH-Px 水平顯著降低,且 IL-6、IL-1β、TNF-α 炎癥因子水平顯著升高,IRS1、INsR、PI3K、GLUT4 蛋白表達(dá)水平顯著降低,表明氣陰兩虛高血糖大鼠糖脂代謝紊亂,引起氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng),骨骼肌胰島素信號(hào)通路蛋白表達(dá)異常。 而參竹降糖方能顯著降低血清FFA 含量,骨骼肌MDA 水平和 IL-6、IL-1β、TNF-α 炎癥因子水平,顯著升高SOD、GSH-Px水平,以及胰島素信號(hào)通路蛋白水平,表明參竹降糖顆粒可抑制骨骼肌氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng),調(diào)節(jié)胰島素通路蛋白水平,從而提高胰島素敏感性,以調(diào)控血糖穩(wěn)定。

綜上所述,參竹降糖方可通過(guò)抑制骨骼肌的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng),恢復(fù)骨骼肌胰島素信號(hào)通路的傳導(dǎo),緩解胰島素抵抗,達(dá)到調(diào)控血糖血脂穩(wěn)定的作用。 且本方可通過(guò)健脾益氣,養(yǎng)陰生津,調(diào)節(jié)氣陰兩虛型高血糖大鼠的能量代謝、免疫功能、激素分泌等多個(gè)環(huán)節(jié),達(dá)到綜合治療的目的。 本研究為指導(dǎo)參竹降糖方臨床防治糖尿病提供了一定的依據(jù),但尚需開展中醫(yī)辨證分型的人體試驗(yàn)進(jìn)一步研究。