高效液相色譜法、膠體金快速定量法測定新收獲小麥中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的對比

任曉曦

（煙臺市食品藥品檢驗檢測中心，山東煙臺 264003）

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇具有細胞毒性和致癌性，易引起嘔吐、厭食、胃腸炎、腹瀉、免疫抑制和血液病[1-4]，也稱為嘔吐毒素，被國際癌癥研究機構列為第3類致癌物[5]。嘔吐毒素對人體有很強的毒性，能引起嘔吐、腹瀉、皮膚刺激等病癥，嚴重者會出現神經紊亂的癥狀，非常危險。嘔吐毒素常存在于小麥、玉米等常見糧食作物中。為了保證人們的身體健康也為了保障糧食安全，準確檢測糧食中嘔吐毒素至關重要。本文主要對2022年本地新收獲小麥所含嘔吐毒素進行檢測，并通過高效液相色譜儀、真菌毒素檢測定量設備兩種檢測設備驗證對比高效液相色譜法與膠體金快速定量法的 優劣。

1 材料與方法

1.1 試劑和材料

1.1.1 試劑

小麥粉中嘔吐毒素分析質控樣品（0.844± 0.190）mg·kg-1，pribolab；甲醇，色譜純；乙腈，色譜純；聚乙二醇8000；氯化鈉；磷酸氫二鈉；磷酸二氫鉀；氯化鉀；鹽酸；娃哈哈純凈水。

1.1.2 標準品

乙腈中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準品，國家糧食和物資儲備局科學研究院。

1.1.3 儀器和設備LC-20AD高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器，日本島津；真菌毒素檢測定量設備，美國Charm Rosa；電子天平，上海天美天平儀器有限公司；vortex genie2渦旋振蕩器，奧然科技；回旋振蕩器，金壇市恒豐儀器廠；氮吹儀，天津市旗美科技有限公司；臺式離心機，上海安亭科學儀器廠；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和柱，華安麥科；DON快檢試劑條，美國Charm Rosa。

1.2 樣品前處理

1.2.1 高效液相色譜儀法

稱取（25±0.01）g小麥磨碎試樣放入具塞三角瓶（100 mL）中，然后加入5 g聚乙二醇，加水 100 mL，高速均質（≥10000 r·min-1）1 min。離心機 10000 r·min-1離心5 min。先后用快速定性濾紙、玻璃纖維濾紙過濾，收集濾液為上樣液。將免疫親和柱恢復至室溫，將注射器的射器筒與親和柱連接，放在氣控操作架上進行性固定，去掉免疫親和柱下方堵頭，待原有液體流盡后，移取2 mL上樣液于一次性注射器中，按照每秒1～2滴的流速緩緩流出。待液體排凈后，按每次10 mL分兩次共加入20 mL水淋洗免疫親和柱，流速約為每秒1～2滴，棄去廢液。準確加入2 mL甲醇洗脫親和柱，控制每秒1滴的速度，收集洗脫液，在50～60 ℃加熱條件下用N2吹干，加入1 mL上機所用流動相并渦旋30 s復溶，經0.45 μm濾膜過濾后轉移至進樣瓶中用于HPLC儀器分析。

1.2.2 真菌毒素檢測定量設備法

稱取過20目篩的5 g小麥試樣至干凈的離心管中；加入25 mL水，用振蕩器振蕩1 min左右，靜置1 min，用移液槍移取1 mL上清液至小離心管中，離心機離心40 s；移取100 μL上清液至小離心管中，加入1.0 mL嘔吐毒素緩沖液，渦旋混合，獲取上機待測液。

1.3 上機

1.3.1 高效液相色譜儀

儀器選擇二極管陣列檢測器，色譜柱：ODS （250 mm×4.6 mm ， 5 μm）；其余按照《食品安全國家標準 食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的測定》（GB 5009.111—2016）第二法[6]中12.5液相色譜參考條件設置。

1.3.2 真菌毒素檢測定量設備

檢查孵育器的溫度，確保其溫度為（45±1）℃；平放檢測條于孵育器中，撕開檢測條薄膜至指示線；用移液槍移取300 μL上機待測液至樣品室中，孵育器孵育5 min；結束孵育后，取出檢測條；選擇DON頻道MATRIX 00，按ENTER鍵讀取數值[7]。

2 結果與分析

2.1 不同小麥中嘔吐毒素的測定結果對比

按照1.2、1.3步驟處理2022年10家縣區新收獲的不同樣品進行檢測，從表1結果來看，真菌毒素檢測定量設備與高效液相色譜儀的結果差異不明顯，部分結果比較接近。就數據而言，真菌毒素檢測定量設備的結果相比高效液相色譜儀的結果略低，都具備參考性。

表1 10家縣區新收獲小麥樣品中嘔吐毒素的結果對比

2.2 相同小麥中嘔吐毒素的測定結果對比

按照1.2、1.3步驟分6次處理同一樣品并進行性檢測，對比結果見表2。由表2可以看出，相同小麥進行6次處理后檢測的數據中，兩種設備的平均值差異不大；但對比二者的RSD差距，高效液相色譜儀較真菌毒素檢測定量設備相比精密度更好，波動更小。

2.3 嘔吐毒素加標回收率實驗

在不含被測物質的空白小麥樣品中分別加入不同濃度的嘔吐毒素標準物質，按照1.2的步驟進行前處理，1.3的步驟上機操作，每個加標樣品測定6次，測定嘔吐毒素加標回收率，見表3。由表3可知，高效液相色譜儀3個加標樣品回收率均在《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）[8]規定的范圍內，而真菌毒素檢測定量設備在加標量500 μg·kg-1時回收率略有超標，同時，二者在濃度較低時的回收率結果均不如濃度高時回收率結果準確，可能是與稀釋過程操作有關。由此可見，高效液相色譜儀測定的結果回收率更好，穩定性更高。

表2 相同小麥測定嘔吐毒素的結果對比

表3 嘔吐毒素加標回收率對比

2.4 嘔吐毒素質控樣準確度實驗

按照1.2、1.3步驟處理小麥嘔吐毒素質控樣品，測定結果如表4。相比較而言，高效液相色譜儀測定結果數據與標準值更接近，數據準確度更高；而真菌毒素檢測定量設備的數據較標準值差距略大，準確度較差。

表4 嘔吐毒素質控樣準確度

3 結論

本文就高效液相相色譜儀、真菌毒素檢測定量設備的操作流程及結果進行分析。就操作流程看，真菌毒素檢測定量設備的樣品處理方法簡單方便，成本低、獲取結果迅速，用時較短；高效液相色譜儀前處理樣品復雜煩瑣、成本高、獲取結果用時較長。就結果分析對比看，真菌毒素檢測定量設備結果重復性較差且相對不穩定；高效液相色譜儀結果重復性好且穩定，也是國家標準中采用的方法。因此，在實驗中可以結合兩種方法，以真菌毒素檢測定量設備測的結果為參考，高效液相色譜儀為基礎，以達到實驗結果更為準確的目的。只有保證脫氧雪腐鐮刀菌烯醇檢測結的精確性，才能在以后糧食檢測中出具更準確、更有代表性的數據，才能保證居民餐桌上的糧食安全，為人們的身體健康提供 保障。