●劉永紅 馮 臻 柏文科
(1.西安職業(yè)技術學院生物與醫(yī)藥學院 陜西 西安 710077;2.新疆兵團勘測設計院(集團)有限責任公司 新疆 烏魯木齊 830000;3.漢中市漢臺區(qū)蔬菜果品技術推廣中心 陜西 漢中 723000)
中藥顯微鑒定可對藥材切片、粉末、解離組織或含中藥材粉末的制劑組織、細胞等進行鑒別[1]。粉碎后的中藥材,藥材性狀特征大部分消失,肉眼難辨[2]。多種中藥粉末制成的散劑、片劑等可用顯微技術鑒定出其組分[3]。利用顯微鑒定既可鑒別不同藥材種類,還能通過各種藥材特征性細胞結構鑒定粉末中藥材的組成,還可鑒別混偽品、改變處方等,從而控制中藥質量[4]。本試驗研究了3 組相似藥材粉末的顯微鑒別特征,為粉末藥材的鑒定提供參考。
南五味子、檳榔;丁香、紅花;金銀花、洋金花。
1.2.1 粉末制備取藥材樣品,60℃烘箱烘干,研缽中研磨成粉,過20 目篩(0·85 mm),置于培養(yǎng)皿中,貼上標簽,備用。
1.2.2 試劑配制10%水合氯醛溶液的配制:稱取水合氯醛25 g,加適量水,攪拌,待水合氯醛完全溶解后,加水250 mL 定容,置于滴瓶中。稀甘油溶液的配制:量取甘油33 mL,加入蒸餾水10 mL,滴入1 滴苯酚,置于滴瓶中[5]。
1.2.3 顯微鑒定水合氯醛加熱制片:取少量藥材粉末,置潔凈的載玻片上,加水合氯醛試液適量,用食指與大拇指把持住載玻片,透化,加 1~2 滴稀甘油,加蓋潔凈的蓋玻片,用吸水紙吸取多余的試液。水制片:取少量藥材粉末,置潔凈的載玻片上,加 1 滴水,加蓋潔凈的蓋玻片,用吸水紙吸取多余的水。乙醇或水合氯醛不加熱制片:取少量藥材粉末,置潔凈的載玻片上,加1 滴乙醇或水合氯醛試液,加蓋潔凈的蓋玻片,用吸水紙吸取多余的試液[6]。
南五味子粉末暗紫色,檳榔粉末紅棕色,具有一定相似性。南五味子為木蘭科植物華中五味子(Kadsura longipedunculataFinet et Gagnep·)的干燥成熟果實,具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心等功效。檳榔為棕櫚科植物檳榔(Areca catechuL·)的干燥成熟種子,可殺蟲、破積、降氣行滯等。二者的顯微特征對比[7],見表1。

表1 南五味子與檳榔顯微鑒別特征
水合氯醛制片、乙醇制片和水制片觀察,南五味子和檳榔的顯微結構,見圖1和圖2。

圖1 南五味子粉末顯微結構

圖2 檳榔粉末顯微結構
南五味子和檳榔是果實類藥材,都含有石細胞和油細胞,但石細胞的形態(tài)不同,南五味子石細胞多為多角形,檳榔石細胞多扁平偏長;南五味子細胞中可以觀察到淀粉粒,檳榔中較多的是糊粉粒。南五味子表皮細胞有明顯的角質層紋,檳榔中可見較多胚乳碎片,可從這些細微特征分辨2 種藥材。
丁香粉末暗紅棕色,紅花粉末橙黃色。丁香為桃金娘科植物丁香(Eugenia caryophμllataThunb·)的干燥花蕾,具有溫中降逆、補腎助陽等功效。紅花來源于菊科植物紅花(Carthamus tinctoriusL·)的干燥管狀花,可活血通經,散瘀止痛。二者的顯微特征對比[7],見表2。

表2 丁香與紅花顯微鑒別特征
水合氯醛制片、乙醇制片和水制片觀察,丁香和紅花的顯微結構,見圖3和圖4。

圖3 丁香粉末顯微結構

圖4 紅花粉末顯微結構
丁香和紅花是花類藥材,都有花粉粒、草酸鈣結晶和分泌細胞,但形態(tài)不同。丁香花粉粒有些呈雙凸鏡形,而紅花花粉粒外壁有齒狀凸起。丁香油室大,多為碎片,紅花分泌細胞為長管狀。丁香為草酸鈣簇晶,紅花為草酸鈣方晶。此外,顯微鏡下可觀察到紅花花柱碎片分化成的單細胞毛。
金銀花和洋金花粉末都是類黃色。金銀花為忍冬科植物忍冬(Lonicera japonicaThunb·)及同屬植物干燥花蕾或帶初開的花,既能宣散風熱,還可清解血毒。洋金花為茄科植物白曼陀羅(Datura metelL·)、毛曼陀羅(Datura innoxiaMill·)的花,具有平喘止咳、麻醉止痛等功效。二者的顯微特征對比[7],見表3。

表3 金銀花與洋金花顯微鑒別特征
水合氯醛制片、乙醇制片和水制片觀察,金銀花和洋金花的顯微結構,見圖5和圖6。

圖5 金銀花粉末顯微結構

圖6 洋金花粉末顯微結構
洋金花和金銀花為花類藥材,粉末都是類黃白色,都有腺毛、非腺毛、花粉粒、草酸鈣結晶等。金銀花腺毛頭部倒圓錐形,相比洋金花的頭部大些;金銀花有厚壁和薄壁2 種非腺毛,洋金花有1 種非腺毛,頂端是鈍圓的;金銀花花粉粒表面具細密短刺及細顆粒狀雕紋,而洋金花花粉粒表面是條紋狀雕紋;金銀花為草酸鈣簇晶,洋金花為草酸鈣砂晶、方晶及簇晶。
《中國藥典》(2020 版)記載屬于自然粉末狀態(tài)的中藥有107 種,各有其性狀、物理、化學特性。僅憑性狀特點鑒別粉末類中藥易受到多種因素制約而失去準確性,理化鑒別用于礦物類粉末藥材更方便[8],顯微鑒別是針對外觀性狀難以區(qū)分的粉末中藥進行鑒定的重要方法之一,特別是植物類中藥細微的組織結構、細胞后含物等被放大而易于區(qū)別[9-11]。以金銀花和洋金花為例,兩者的粉末非常相似,但前者是藥食同源物品,后者有毒,《中國藥典》(2020 版)記載其顯微結構都含有腺毛、非腺毛、花粉粒、草酸鈣簇晶這4 種結構,普通光學顯微鏡下通過水合氯醛加熱片、不加熱片、水制片的多次觀察,發(fā)現二者同一構造有細微不同,如金銀花腺毛柄部相比洋金花的大;金銀花非腺毛比洋金花的長;洋金花細胞內結晶形態(tài)比較多,除了草酸鈣簇晶,還可觀察到較多的小砂晶,偶見方晶;此外,制片中還觀察到了淀粉粒,導管等結構,也是對金銀花和洋金花進行定性鑒別的依據之一。
顯微鑒別中,制片技術和顯微鏡系統(tǒng)是影響觀察結果的兩個重要因素[12]。粉末顆粒的大小,制片的厚薄,加熱時間的長短等因素都會影響顯微觀察結果。普通光學顯微鏡應用廣泛,但操作比較繁瑣,不同藥材的相同結構有時需要憑經驗判斷。更為先進的顯微成像技術、圖像處理技術將逐漸應用在顯微鑒別研究中[13]。