羊布魯氏菌3種檢測方法效果對比試驗

●許進紅 董黎斗 尚建明 肖紅亮

（個舊市動物疫病預防控制中心 云南 個舊 661000）

布魯氏菌病（簡稱布病），是由布魯氏菌屬細菌致人畜共患的傳染病——變態反應性疾病，在世界范圍內威脅著人類健康和影響畜牧業發展。世界衛生組織將布病列為B 類重要傳染病，我國將其列為二類傳染病。羊布病主要由羊種布魯氏菌病感染，呈急性或慢性經過，也是人布病的主要傳染來源。布病的防控與凈化已被列入《國家中長期動物疫病防治規劃（2012～2020年）》，是動物疫病監測工作的重中之重，而檢測方法的選擇是布病防控與凈化的關鍵環節。一直以來，獸醫實驗室都在尋找一種快速、準確的實驗室檢測方法來確診布病[1]。

個舊市檢測布病主要采用的血清檢測方法為虎紅平板凝集試驗（RBT）、試管凝集試驗（SAT），2020年以來，開始使用競爭ELISA（cELISA）檢測。本試驗共對9 個鄉鎮（街道）378 份羊血清平行進行虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗、競爭ELISA 檢測，以期為3 種檢測方法在現場的使用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 檢測試驗血清來源及飼養情況

檢測試驗羊血清來源于春秋兩防中市內9 個鄉鎮（街道）40 戶養羊戶共378 份（其中春防羊血清186 份，秋防羊血清192 份），采樣羊群均未使用過布魯氏菌相關疫苗免疫注射，40 戶養羊戶中有1 戶反應羊有流產臨床癥狀，其他39 戶未發現。

1.2 檢測試劑

商品化布魯氏菌虎紅平板凝集試驗抗原、商品化布魯氏菌試管凝集抗原、商品化布魯氏菌試管凝集試驗陽性血清、商品化布魯氏菌試管凝集試驗陰性血清，布魯氏菌競爭ELISA 檢測試劑盒，以上試劑均購自青島立見診斷技術發展中心。現配含0·5%石炭酸的10%氯化鈉溶液稀釋液。

1.3 檢測儀器

移液器、一次性移液器吸頭、玻璃試管、試管架；超純水機、（37±1）℃溫箱、酶標儀等。

1.4 檢測方法

按照中國農業標準GB/T18646—2018 對378份羊血清采用布魯氏菌虎紅平板凝集試驗進行初篩，再采用試管凝集試驗復核；同時采用布魯氏菌cELISA 檢測試驗檢測378 份羊血清。

2 結果與分析

2.1 檢測陽性結果統計比較

檢測陽性結果血清號，如表1所示。在春防采樣的186 份羊血清中，用RBT 檢測有1 戶1 份陽性，SAT 也是1 戶1 份陽性；用cELISA 檢測，結果出現7 份陽性，涉及檢測戶數4 戶（包含RBT、SAT 復核的陽性戶）。秋防檢測羊血清192份，RBT 陽性17 份，涉及5 戶；SAT 復核后陽性及可疑16 份，涉及4 戶；用cELISA 檢測陽性17份，涉及3 戶（陽性涉及戶與RBT 及SAT 戶數一致）。

表1 不同檢測方法陽性血清統計情況

2.2 不同檢測方法陽性率結果統計及百分率差異顯著性檢驗

由表2可知，春秋防血清RBT 陽性率4·8%，SAT 陽性可疑率為4·5%；cELISA 檢測方法陽性率為6·3%。

表2 不同檢測方法陽性率結果統計

t檢驗計算，｜t｜=0·0717，查t0·05（∞）=1·96，說明RBT 、SAT、cELISA 檢測感染布病陽性率差異不顯著（P＞0·05）。

2.3 陽性結果一致性比較

將RBT 、SAT 檢測陽性結果數與cELISA陽性結果數進行對比，存在結果不一致的情況，RBT 與cELISA 陽性結果相比有假陽性或假陰性情況存在；SAT 與cELISA 陽性結果相比，有假陰性情況存在。

3 討論與結論

隨著個舊市山羊養殖業的快速發展，布病的監測、防控工作越來越重要，但布病的血清學診斷方法種類較多，沒有任何一種方法在操作簡便性、敏感性、特異性和成本等各方面均能夠令人滿意[2]。在實際操作中，cELISA 在3 種方法中被認為具有較高的靈敏度，并且結果采用酶標儀進行讀數，結果更加準確，適合大批量樣品檢測，但相比其他2 種方法檢測成本較高；RBT 操作簡便，反應時間短，試驗結果迅速表達，成本低，同時對操作者要求低，易學易上手，適合在現場應用，但由于采取肉眼判斷結果，以及受環境、溫度的影響，結果誤差較大，容易出現假陽性或判斷不清的情況；SAT 操作比較復雜，耗時長，不適合大批量檢測，主觀因素影響較大，單獨采用SAT 檢測假陰性率較高，易造成漏診[3]。實際監測篩查中，若出現漏檢情況，則為布魯氏菌的傳播提供可能性，若出現陰性畜的誤判，則會造成不必要的經濟損失。因此，鑒于3 種方法各有不同的特點，可根據不同需要選擇不同的檢測方法，在進行大規模常規檢疫或現場篩查時，為提高工作效率，降低工作量，同時提高檢測準確性，可以先采取特異性稍差但成本低、操作簡便快捷、敏感性較好的RBT 方法進行篩查，再采用特異性較好的cELISA 方法開展檢測[4]。通過本次檢測結果可知，在臨床工作中可以根據需要選擇不同的檢測方法開展檢測試驗：在有可疑的布病診斷處理中，樣本量較小又需要緊急診斷時，可以用布魯氏菌RBT 開展檢測；而在樣本量較大時，可以用cELSIA 檢測試驗開展工作。