磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物輔助改善記憶功能的作用

黃遠英，殷光玲

湯臣倍健股份有限公司（廣州 510663）

記憶力是指識記、保持、再認識和重現客觀事物所反映的內容和經驗的能力。輔助改善記憶功能是我國保健食品27個功能之一，適宜人群為“需要改善記憶者”，需要改善記憶者常指3類人群，即記憶力減退的中老年人、長期應用大腦的腦力勞動者及因考試升學等壓力需要高效理解記憶的廣大青少年[1]。

神經細胞膜中含有大量的磷脂酰絲氨酸，其對神經細胞的維持、修復及功能具有重要作用。研究表明，補充磷脂酰絲氨酸能減緩甚至逆轉癡呆或者與衰老相關的學習、情緒、記憶、注意力等的下降[2]。

銀杏葉制劑具有提高記憶功能的作用，其主要是通過促進大腦海馬膽堿的再攝取，減少M型膽堿受體和α2腎上腺素受體及遞質的丟失，從而發揮改善學習和記憶能力的功能[4]。

B族維生素缺乏會導致許多酶系統功能障礙，進而產生一系列神經化學和形態學變化，最終影響腦發育和腦功能[5]。B族維生素對于認知行為的影響，在很大程度上歸因于其調節了神經遞質的代謝，從而改變了神經系統的化學傳導過程。

試驗將磷脂酰絲氨酸、銀杏葉提取物、B族維生素、亞麻籽油等按一定比例進行復配，制得磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物，對小鼠進行輔助改善記憶功能試驗，為開發輔助改善記憶的功能食品提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

健康SPF級昆明種小鼠[長沙市天勤生物技術有限公司，生產許可證SCXK（湘）2009-0012]。

1.2 樣品

磷脂酰絲氨酸銀杏葉軟膠囊內容物，為黃褐色粘稠物，由湯臣倍健股份有限公司提供，日服用建議劑量1.2 g。

1.3 劑量選擇和受試物給予方式

試驗小鼠按隨機分組原則分為低劑量組[0.10 g/（kg·bw）]、中劑量組[0.20 g/（kg·bw）]、高劑量組[0.60 g/（kg·bw）]及對照組（低、中、高劑量分別相當于日服用建議劑量的5，10和30倍）。低、中、高劑量受試液配制時分別取2.00，4.00和12.00 g磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物，加植物油至200 mL，對照組予以等體積的植物油，每天灌胃1次，灌胃體積0.1 mL/（10 g·bw），連續30 d。

1.4 主要儀器與設備

MP150十六道生理記錄儀（美國BIOPAC公司）；DSI遙測系統（美國DSI公司）；ZB-200小鼠疲勞轉棒儀（成都泰盟儀器有限公司）；MORRIS水迷宮（中國醫學科學院藥物研究所）；ZZ-6小鼠自主活動測試儀（成都泰盟儀器有限公司）。

1.5 試驗方法

1.5.1 跳臺試驗

體重18～22 g的雄性小鼠，隨機分為3個劑量組和1個對照組，每組10只。連續灌胃 30 d 后進行跳臺試驗。將動物放入反應箱內適應3 min，立即通以36 V交流電刺激小鼠。將小鼠放在絕緣平臺上，記錄各小鼠第1次跳下平臺的潛伏期、5 min內每只小鼠受到電擊的次數（跳下平臺的錯誤次數）和各組跳下平臺的動物數，以此作為學習成績。24 h后重復測試，記錄第1次跳下平臺的潛伏期、3 min內跳下平臺的錯誤次數和各組跳下平臺的動物數。停止訓練5 d后進行消退試驗。

1.5.2 避暗試驗

動物選擇，試驗分組，給受試物的劑量、途徑、時間均同跳臺試驗。連續灌胃30 d后開始進行避暗試驗。記錄每只鼠從放入明室至進入暗室遭電擊所需的時間（潛伏期）、5 min內進入暗室的錯誤次數和各組進入暗室的動物數。24 h后同一時間，再進行測驗，記錄每鼠進入暗室的潛伏期、5 min內進入暗室的錯誤次數和各組進入暗室的動物數。停止訓練5 d后進行消退試驗。

1.5.3 水迷宮試驗

體重18～22 g的雄性小鼠，隨機分為3個劑量組和1個對照組，每組10只。連續灌胃30 d后進行跳臺試驗。訓練期間繼續給予受試物。每天訓練1次，連續5 d。第1 d訓練前將小鼠放在梯子附近，使其自動爬上3次，以后每次訓練前將小鼠放在梯子附近，使其自動爬上1次。第1天訓練時，用擋板在A處擋死，從A點開始訓練；第2天從B處開始，此路程訓練3 d，至80%的動物在2 min內到達終點；第5天從氣墊開始訓練；以5 d的總學習成績進行評價（即各組5 d到達終點的總時間、總錯誤次數和各組2 min內到達終點的動物數）。停止訓練5 d后進行消退試驗。

1.6 試驗數據統計

試驗數據用SPSS軟件對各試驗原始數據進行方差齊性檢驗，滿足“方差齊”要求的數據資料用多個試驗組和1個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理；對方差不齊的數據資料進行適當的變量轉換，待滿足“方差齊”要求后，用轉換所得的數據進行統計處理。

水迷宮試驗中到達終點的時間、總錯誤次數、跳臺試驗和避暗試驗中的潛伏期、錯誤次數屬計量資料，可用方差分析，但需先進行方差齊性檢驗，若方差齊，采用單因素方差分析進行總體比較，發現差異再用Dunnett法進行多個劑量組與1個對照組均數間的兩兩比較。若方差不齊則對原始數據進行適當的變量轉換，滿足方差齊性檢驗后，用轉換后的數據進行統計；若變量轉換后仍未達到方差齊性的目的，改用秩和檢驗進行統計，發現總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的Tamhane’s T2檢驗進行兩兩比較。水迷宮試驗中2 min內到達終點的動物數（百分率）、跳臺試驗中跳下平臺的動物數（百分率）、避暗試驗中進入暗室的動物數（百分率）為計數資料，用χ2檢驗，四格表總例數小于40，或總例數等于或大于40但出現理論數等于或小于1時，改用確切概率法。

1.7 結果判定

1.7.1 跳臺試驗

若受試樣品組與對照組比較，潛伏期明顯延長，錯誤次數或跳下平臺的動物數明顯少于對照組，差異有顯著性，以上三項指標中，任一項指標陽性，均可判定該項試驗陽性。

1.7.2 避暗試驗

若受試樣品組小鼠進入暗室的潛伏期明顯長于對照組，5 min內進入暗室的錯誤次數或5 min內進入暗室的動物數少于對照組，且差異有顯著性，以上三項指標中任一項指標陽性，均可判定該項試驗陽性。

1.7.3 水迷宮試驗

試驗組與對照組比，試驗組到達終點所用的時間或到達終點前的錯誤次數明顯少于對照組，或2 min內到達終點的動物數明顯多于對照組，且經統計學檢驗差異有顯著性。其中，任一項指標陽性，均可判定該項試驗陽性。

1.7.4 結果判定

跳臺試驗、避暗試驗、水迷宮試驗3項試驗中任2項試驗結果陽性。且重復試驗結果一致（所重復的同一項試驗2次結果均為陽性），可以判定磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物輔助改善記憶功能試驗結果陽性。

2 結果與分析

2.1 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠體重的影響

由表1～表3可見，經口連續灌胃給予小鼠不同劑量的磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物30 d，重復2次試驗，各劑量組小鼠體重與對照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表1 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠體重的影響（水迷宮試驗）

表2 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠體重的影響（避暗試驗）

表3 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠體重的影響（跳臺試驗）

2.2 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠水迷宮試驗的影響

2.2.1 水迷宮試驗

由表4可見，經口連續灌胃給予小鼠不同劑量的磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物30 d，重復2次試驗，第1次試驗結果表明，高劑量小鼠到達終點的時間、到達終點前的錯誤次數與對照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）；各劑量組小鼠2 min內到達終點的動物數與對照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。第2次試驗結果表明，高劑量小鼠到達終點的時間、到達終點前的錯誤次數與對照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）；各劑量組小鼠2 min內到達終點的動物數與對照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表4 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠水迷宮試驗

2.2.2 水迷宮消退試驗

由表5可見，重復2次水迷宮消退試驗，第1次試驗結果表明，高劑量組小鼠到達終點的時間與對照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）。第2次試驗結果表明，各劑量組小鼠到達終點的時間、到達終點前的錯誤次數、2 min內到達終點的動物數與對照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表5 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠水迷宮消退試驗

綜合評定，水迷宮試驗結果為陽性。

2.3 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠避暗試驗的影響

2.3.1 小鼠避暗試驗

由表6可見，經口連續灌胃給予小鼠不同劑量的磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物30 d，重復2次試驗，第1次試驗結果表明，高劑量小鼠測驗時進入暗室潛伏期、測驗錯誤次數與對照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）；第2次試驗結果表明，高劑量小鼠測驗時進入暗室潛伏期與對照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）。

表6 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠避暗試驗

2.3.2 小鼠避暗消退試驗

由表7可見，重復2次小鼠避暗消退試驗，第1次試驗結果表明，高劑量小鼠進入暗室潛伏期與對照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）；第2次試驗結果表明，各劑量組小鼠進入暗室潛伏期、錯誤次數、進入暗室動物數與對照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表7 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠避暗消退試驗

綜合評定，避暗試驗結果為陽性。

2.4 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠跳臺試驗的影響

2.4.1 小鼠跳臺試驗

由表8可見，經口連續灌胃給予小鼠不同劑量的磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物30 d，重復2次試驗，2次試驗結果表明，各劑量組小鼠訓練時與測驗時跳下平臺的潛伏期、訓練時與測驗時小鼠跳下平臺的錯誤次數、小鼠跳下平臺的動物只數和錯誤反應率與對照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表8 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠跳臺試驗

2.4.2 小鼠跳臺消退試驗

由表9可見，重復2次小鼠跳臺消退試驗，2次試驗結果表明，各劑量組小鼠跳下平臺的潛伏期、小鼠跳下平臺的錯誤次數、跳下平臺的動物只數與對照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表9 磷脂酰絲氨酸銀杏復合物對小鼠跳臺暗消退試驗

綜合評定，跳臺試驗結果為陰性。

3 小結

跳臺、避暗和水迷宮試驗都是通過觀察對記憶獲得、鞏固、再現的影響來觀察受試物對記憶各過程的影響效果[6]。分別經口給予小鼠0.10，0.20和0.60 g/（kg·bw）劑量的磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物30 d，對小鼠體重增長無不良影響。水迷宮試驗、避暗試驗前后2次試驗，結果均為陽性，表明能有效改善小鼠的學習記憶能力。按照《保健食品檢驗與評價技術規范》對輔助改善記憶功能保健食品的判定標準可知，磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物具有輔助改善記憶的作用。

4 結論與探討

老齡化是不可回避的社會問題，在我國一些省市，65歲以上的老齡人超過20%。預計到2025年，中國老年人口將突破3億人[7]。研究顯示高齡老年人認知能力隨年齡增長出現不同程度的減退[8]。2020年發表在《柳葉刀·公共衛生》上的一項全國性橫斷面研究顯示，我國60歲及以上人員輕度認知障礙（MCI）患病率達15.5%。據此推算，我國老年人群中MCI患者約3 877萬。因此，應大力研發社會需求量較高、改善老年人記憶減退的產品，以滿足時代和民眾對改善記憶的需求。

磷脂酰絲氨酸是細胞膜組分之一，它能影響細胞膜的流動性、通透性，并且能激活多種酶類的代謝和合成，具有改善神經細胞功能、調節神經脈沖傳導和增進大腦記憶功能。不僅對生理性認知能力、損傷人群的認知能力恢復具有顯著、積極的效應，并且在非損傷性認知能力下降的人群研究中被證明也具有提高認知力的作用[9]。陳頔等選取49～65歲退休人員作為研究對象，服用磷脂酰絲氨酸復合物30 d后，試食組試食前后各量表得分、總量表分和記憶商均明顯升高（P＜0.01）；試食后試食組與對照組比較，除指向記憶無明顯變化外，其他各項得分均明顯升高，總量表分和記憶商也顯著提高（P＜0.01）。陳紅輝等[3]在銀杏葉提取物改善學習記憶障礙的試驗研究中發現，銀杏葉提取物可改善癡呆鼠學習記憶功能障礙。MCI是指介于正常老化的記憶力減退和癡呆之間的認知障礙狀態。記憶功能損害（不同的記憶損害類型和損害程度）是MCI最主要或最突出的臨床表現，其余受損的認知領域還包括語言功能、注意力、執行功能、視空間功能等方面[10]。余忠海等[4]在為期1年的銀杏葉治療MCI患者試驗中發現，銀杏葉片具有提高MCI患者記憶商，改善MCI患者總體記憶功能的作用，尤其是在提高短時記憶和瞬時記憶方面表現更加顯著。

通過對老年人群維生素營養狀況測試分析發現，一些B族維生素的缺乏與老年人認知功能低下有關[5]。一研究觀察137位66～90歲老人的維生素營養狀況與認知功能之間的關系，結果發現攝入較多VB1、VB2、尼克酸和葉酸的老人具有較高的抽象思維能力。

磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物對改善老年人記憶減退方向具有理論基礎，通過動物試驗初步證明其具有輔助改善記憶的功能。磷脂酰絲氨酸銀杏葉復合物對老年人記憶減退的實際改善功效需要進一步的人體試驗研究驗證。