食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白的表達與病理學特征的關系

劉曉麗 宋偉偉 吳梅珍

（莆田學院附屬醫院病理科，福建 莆田 350000）

食管癌是來源于食管上皮細胞的惡性腫瘤，我國食管癌的患病率和死亡率占全球55%左右；該病常用治療方法包括手術治療、內鏡下切除術、放化療等[1]。人體內的許多原癌基因可以成為腫瘤的治療靶點（EGFR、HER-2等），針對這些基因突變可以使用生物靶向藥物進行治療，故對原癌基因與食管鱗癌的關系進行深入研究，有助于食管鱗癌的診斷、治療和預后[1]。

L型氨基酸轉運載體-1（Large neutral amino acid transporter-1 ，LAT-1）是鈉離子非依賴型、主要轉運大分子的中性氨基酸，是非糖基化的膜蛋白質，在大腦、肝臟、骨髓等組織和癌細胞中大量表達[2]。受體酪氨酸激酶（Receptor Tyrosine Kinase，RTK）又稱為巨噬細胞刺激蛋白受體（Recepteur d’origine nanta，RON），它是MET原癌基因家族的一員，其唯一配體是巨噬細胞刺激蛋白（Macrophage Stimulation Protein，MSP），主要表達于上皮組織，在傳遞細胞內和細胞外信號方面發揮生物學作用[3]。

研究表明，RON的異常表達是導致胃腸道上皮細胞惡變的致病因素[3]。因此，本文主要探究食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白的表達與病理學特征的關系，為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2020年7月至2022年7月本院收治的食管鱗癌患者113例為研究對象。

納入標準：一般資料完整；所有病例經病理確診；符合食管鱗癌診斷標準[4]；本研究獲得醫學倫理委員會同意批準；患者同意參加本研究；排除標準：有嚴重造血系統疾病和傳染病者；合并心、肺、肝、腎等其他臟器并發癥者；合并惡性腫瘤和全身感染者；存在認知功能障礙和心理問題者。

113例食管鱗癌患者中，女55例，男58例，年齡42-75歲，平均年齡56.25±8.23歲；疾病程度：輕度非典型增生35例，中度非典型增生37例，重度非典型增生41例；組織分化程度：低分化49例，高分化64例；臨床分期：I期22例，II期42例，III期44例，IV期5例；有淋巴結轉移67例，無淋巴結轉移46例。

1.2 方法

1.2.1 LAT-1、RON表達的檢測

均采用免疫組織化學染色法對LAT-1、RON表達進行檢測。選取經HE染色證實的癌旁正常組織和食管鱗癌組織的石蠟塊。蠟塊標本行5 μ m連續切片，60℃烤片4 h，切片脫蠟和水化，加0.01 mol·L-1枸櫞酸緩沖液（pH6.4）于高壓鍋中，加熱至噴氣，持續兩min，室溫冷卻后，蒸餾水沖洗，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，用新鮮配置的3% 雙氧水室溫處理15 min，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，室溫封閉30 min，甩去多余液體，并用吸水紙吸干，滴加兔抗人LAT-1、RON多克

1.2.2 LAT-1、RON陽性表達的判定 隆抗體，覆蓋全部標本，將切片放入濕盒中孵育，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，滴加Envision試劑，覆蓋全部標本，37℃保溫箱內孵育1 h，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，室溫下顯色，復染，充分水洗，脫水透明，重型快干膠封片，在高倍顯微鏡下，PBS代替一抗作為陰性對照，陽性對照采用試劑公司提供的陽性切片（試劑盒均購自上海莼試生物技術有限公司，操作步驟按試劑盒說明書進行）。

陽性表達定位于細胞核和細胞質，在腫瘤細胞的細胞質和細胞膜上可見棕黃或棕褐色顆粒。100×光鏡下取腫瘤實質區，400×光鏡下隨機取5個視野。

按照據染色強度評分：陰性=0，弱陽性=1，中等陽性=2，強陽性=3。染色陽性細胞數分為：≤10%（陰性=0），11%-30%（弱陽性=1），31%-50%（中等陽性=2），＞50% （強陽性=3）。當兩者分數之和≥3時判定LAT-1、RON為陽性。

1.3 觀察指標

（1）對比食管鱗癌組織與癌旁組織間LAT-1、RON蛋白表達水平；（2）對比不同臨床特征食管鱗癌組織間LAT-1、RON蛋白表達情況；（3）分析食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白表達的相關性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 28.0統計學軟件分析數據，n（%）表示，χ2檢驗；相關性采用Spearnan秩相關性分析；以α=0.05為檢驗水準。

2 結果

2.1 食管鱗癌組織與癌旁組織的LAT-1、RON蛋白表達水平對比

LAT-1在癌旁組織中無陽性表達，但在食管鱗癌組織中有陽性表達；且食管鱗癌組織LAT-1、RON蛋白陽性率均顯著高于癌旁正常組織（P＜0.05）。見表1。

2.2 不同臨床特征食管鱗癌組織間LAT-1、RON蛋白表達情況

食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白表達在不同分化程度、臨床TNM分期及淋巴結轉移中表達均有差異（P＜0.05）。見表2。

表2 不同臨床特征LAT-1、RON蛋白表達情況比較[n(%)]

2.3 食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白表達相關性

Spearman相關分析結果顯示，在食管鱗癌組織中，LAT-1與RON蛋白表達呈正相關，隨著LAT-1水平上調，RON水平也與之一起上調（r=0.364，P＜0.05）。見表3。

表3 食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白表達相關性

3 討論

食管癌是常見的消化系統腫瘤之一，其發生是一個涉及多個基因異常表達的多因素、多階段、復雜的生物學過程[1]。原癌基因可以成為腫瘤的治療靶點，故對原癌基因與食管鱗癌的關系進行深入研究，有助于食管鱗癌診斷、治療和預后[1]。

L型氨基酸轉運載體-1（LAT-1）是非糖基化的膜蛋白質，在大腦、肝臟、骨髓等組織和癌細胞中大量表達[2,5]。巨噬細胞刺激蛋白受體（RON）是MET原癌基因家族的一員，其唯一配體是巨噬細胞刺激蛋白（Macrophage Stimulation Protein，MSP），在傳遞細胞內和細胞外信號方面發揮生物學作用[3]。有研究表明，RON的異常表達是導致胃腸道上皮細胞惡變的致病因素[6]。

本次研究結果中LAT-1在癌旁組織中無陽性表達，但在食管鱗癌組織中有陽性表達；且食管鱗癌組織LAT-1、RON蛋白陽性率均顯著高于癌旁正常組織。提示LAT-1、RON蛋白的異常表達在食管鱗癌惡性轉變的過程中起著重要作用。另一方面，食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白表達在不同分化程度、臨床TNM分期及淋巴結轉移中表達均有差異。說明LAT-1、RON蛋白的異常表達與食管鱗癌臨床病理特征顯著相關。有研究表明，LAT-1在腫瘤細胞中大量表達，可能是其提供給這些細胞快速增殖所需要的必需氨基酸，對惡性腫瘤的不斷增殖起著重要作用[7]。因此，我們猜測LAT-1的高表達可能是導致腫瘤細胞快速生長的原因之一。已有研究證實，RON在人類上皮性腫瘤中，如胃腺癌、食管鱗癌、頭頸部鱗癌及乳腺癌等，有不同程度的高表達，表達的陽性率波動于32%-58%之間，這取決于具體的腫瘤類型[8]。本次研究顯示，Spearman軼相關分析結果顯示在食管鱗癌組織中，LAT-1與RON蛋白表達呈正相關。提示LAT-1、RON蛋白表達水平的升高可顯著增加食管鱗癌的增殖能力，進一步促進了細胞增殖與分化、抑制凋亡，從而加速了食管鱗癌的發展進程，LAT-1、RON蛋白具有作為食管鱗癌治療特異性靶點的潛力，在食管鱗癌早期診斷、篩選癌前高危個體等方面具有重要的臨床價值。

綜上所述，LAT-1、RON蛋白與食管鱗癌臨床病理特征顯著相關，并能作為一種新的預后判斷指標和治療靶點，為臨床病情診斷及預后評估提供參考。