黃連解毒湯對急性期腦梗死大鼠胃動力的影響※

任志珍 唐 明 王佳寧 修小惠 李 紅 丁 良 安朋朋△

(1.青島市市南區中山路街道河南路社區衛生服務中心中醫科，山東 青島 266000；2.山東省青島市中醫醫院(市海慈醫院)神經內科，山東 青島 266033；3.山東省青島市中醫醫院(市海慈醫院)急診科，山東 青島 266033；4.山東省青島市中醫醫院(市海慈醫院)檢驗科，山東 青島 266033；5.山東省青島市第三人民醫院中醫科，山東 青島 266041)

急性腦梗死起病急驟，預后差，是臨床上老年人的常見病、多發病、難治性疾病，嚴重危害人類健康[1]。隨著腦—腸軸的發現，人們對急性腦梗死并發腹脹、便秘、腹瀉等胃腸動力障礙的研究日益增多[2]。中醫學認為，毒損腦絡是急性腦梗死發生的重要病因病機，臨床也多采用清熱解毒通絡法治療腦梗死，并取得了確切療效[3-4]。毒邪貫穿于腦梗死疾病的始終，胃腸動力的損傷自然也會受到“毒”的影響。為進一步探討中醫藥治療急性腦梗死的作用機制，我們采用黃連解毒湯灌胃治療急性期腦梗死大鼠，動態觀察黃連解毒湯對大鼠胃動素(MTL)和胃電圖慢波振幅與頻率的影響，以期為臨床應用提供更有力的證據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 清潔級Wistar大鼠60只，雄性，10周齡，體質量(180±20)g，自由進食飲水，室內常規消毒，通風，溫度保持在20 ℃左右，由山東大學動物實驗中心提供，動物合格證號:0009265。

1.1.2 實驗藥物 黃連解毒湯(藥物組成：黃連、黃柏、黃芩、梔子，按照3∶2∶2∶3的比例煎煮，藥液煎煮濃縮至生藥2 g/mL，4 ℃冰箱保存備用，藥物由山東省青島市海慈醫院中藥三級實驗室提供)；枸櫞酸莫沙必利片(魯南貝特制藥有限公司，國藥準字H19990317，產品編號B14202018283，規格5mg/片)。

1.1.3 主要實驗儀器與試劑 DPC-GAMMA-C12型γ計數器(美國德普公司)；MTL放射免疫分析試劑盒(北京北方生物技術研究所有限公司)；RM6240多道生理信號采集處理系統(成都儀器廠)。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組及模型制備 將60只大鼠隨機分為正常對照組、假手術組、腦梗死組、枸櫞酸莫沙必利組、黃連解毒湯常規劑量組及黃連解毒湯高劑量組6組，每組各10只。腦梗死組、枸櫞酸莫沙必利組、黃連解毒湯常規劑量組及黃連解毒湯高劑量組采用線栓法制備大腦中動脈梗死模型(MCAo)[5]，假手術組大鼠僅暴露大腦中動脈而不凝閉，正常對照組不進行手術干預。

1.2.2 模型篩選標準 待大鼠清醒后采用Longa評分法[5]進行神經功能檢查。0分：正常，無神經功能缺損癥狀；1分：對側前爪不能完全伸展；2分：行走時向癱瘓側轉圈；3分：行走時大鼠向癱瘓側傾斜；4分：不能自發行走；5分：與缺血有關的死亡。將評分1～3分大鼠納入實驗，0、4、5分大鼠剔除。最后各組大鼠全部納入實驗。

1.2.3 給藥方法 造模結束后，按大鼠與人等效劑量換算公式，計算出黃連解毒湯常規劑量組和高劑量組的灌藥量分別為生藥5.39、10.78 g/kg，并分別將黃連解毒湯用0.9%氯化鈉注射液稀釋至2 mL灌胃，枸櫞酸莫沙必利組按0.05 mg/kg予枸櫞酸莫沙必利片灌胃，假手術組及腦梗死組予0.9%氯化鈉注射液2 mL灌胃，正常對照組不做任何處理。共灌胃7 d，末次灌胃后禁食24 h，不禁水。

1.3 觀察指標及方法

1.3.1 MTL 比較各組大鼠灌胃第4、7 d MTL水平情況。空腹采集下腔靜脈血4 mL，注入含7.5%乙二胺四乙酸(EDTA)二鈉40 μL和抑肽酶40 μL的試管中，混勻，4 ℃、3000 r/min離心10 min，取血漿，置-70 ℃保存待測。然后采用放射免疫分析法檢測MTL水平，相關操作按照說明書進行。

1.3.2 胃電圖慢波振幅與頻率 比較各組大鼠灌胃第1、4、7 d胃電圖慢波振幅與頻率情況，并分析腦梗死組大鼠胃動力障礙變化趨勢。每次實驗前禁食18 h，自由飲水，灌胃60 min后，麻醉大鼠,固定于手術臺，腹部備皮，75%酒精脫脂2遍,待腹部皮膚自然干燥后,于大鼠劍突下腹正中線1 cm向左旁開1.5 cm處貼放胃體部紅色電極片,劍突下腹正中線1 cm向左旁開0.5 cm處貼放胃竇部綠色電極片,大鼠劍突下腹正中線1 cm向右旁開1.5 cm處貼放參考黑色電極,整個裝置用銅網屏蔽，導線連接RM6240多道生理信號采集處理系統，高通濾波為1 s，低通濾波100 Hz，放大率500 mV/div，室溫25 ℃左右，記錄30 min。

2 結果

2.1 各組大鼠灌胃第1、4、7 d胃電圖慢波振幅變化比較 與正常對照組和假手術組同期比較，腦梗死組大鼠第1、4、7 d胃電圖慢波振幅均降低(P<0.05)，而正常對照組與假手術組第1、4、7 d胃電圖慢波振幅組間比較差異均無統計學意義(P>0.05)。與腦梗死組同期比較，枸櫞酸莫沙必利組、黃連解毒湯常規劑量組及黃連解毒湯高劑量組第1、4、7 d胃電圖慢波振幅均升高(P<0.05)。與枸櫞酸莫沙必利組同期比較，黃連解毒湯高劑量組第1、4、7 d胃電圖慢波振幅均升高(P<0.05)，黃連解毒湯常規劑量組第1、4、7 d胃電圖慢波振幅與枸櫞酸莫沙必利組同期比較差異均無統計學意義(P>0.05)。與黃連解毒湯常規劑量組同期比較，黃連解毒湯高劑量組第1、4、7 d胃電圖慢波振幅均升高(P<0.05)。與腦梗死組第1 d比較，腦梗死組第4 d胃電圖慢波振幅進一步降低(P<0.05)，而第7 d胃電圖慢波振幅與第1 d比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組大鼠灌胃第1、4、7 d胃電圖慢波振幅變化比較

2.2 各組大鼠灌胃第1、4、7 d胃電圖慢波頻率變化比較 與正常對照組和假手術組同期比較，腦梗死組第1、4、7 d胃電圖慢波頻率均升高(P<0.05)，而正常對照組與假手術組第1、4、7 d胃電圖慢波頻率比較差異均無統計學意義(P>0.05)。與腦梗死組同期比較，枸櫞酸莫沙必利組、黃連解毒湯常規劑量組及黃連解毒湯高劑量組第4 d胃電圖慢波頻率均降低(P<0.05)，第1、7 d胃電圖慢波頻率與腦梗死組比較差異無統計學意義(P>0.05)。枸櫞酸莫沙必利組、黃連解毒湯常規劑量組與黃連解毒湯高劑量組第1、4、7 d胃電圖慢波頻率組間比較差異均無統計學意義(P>0.05)。與腦梗死組第1 d比較，腦梗死組第4 d胃電圖慢波頻率進一步升高(P<0.05)，而第7 d胃電圖慢波頻率與第1 d比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組大鼠造模后第1、4、7 d胃電圖慢波頻率變化比較

2.3 各組大鼠灌胃第4、7 d MTL水平變化比較 與正常對照組和假手術組同期比較，腦梗死組第4、7 d MTL水平均升高(P<0.05)，而正常對照組與假手術組第4、7 d MTL水平組間同期比較差異均無統計學意義(P>0.05)。與腦梗死組同期比較，枸櫞酸莫沙必利組、黃連解毒湯常規劑量組及黃連解毒湯高劑量組第4、7 d MTL水平均降低(P<0.05)。與枸櫞酸莫沙必利組同期比較，黃連解毒湯高劑量組第4 d MTL水平降低(P<0.05)，黃連解毒湯常規劑量組第4、7 d及黃連解毒湯高劑量組第7 d MTL水平與枸櫞酸莫沙必利組同期比較差異均無統計學意義(P>0.05)。與黃連解毒湯常規劑量組同期比較，黃連解毒湯高劑量組第4 d MTL水平降低(P<0.05)，第7 d MTL水平與黃連解毒湯常規劑量組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 各組大鼠灌胃第4、7 d MTL水平變化比較

3 討論

大量臨床觀察發現，胃動力障礙是急性期腦梗死的常見并發癥之一，主要表現為惡心、嘔吐、脘腹脹滿、餐后腹脹、早飽、噯氣、腹瀉等，胃動力障礙的發生或加重，往往容易誘發腦梗死整體病情的發展惡化[6-8]。急性腦梗死患者的胃動力障礙多為繼發性，早期難以發現，甚至難以動態觀測，且其發病機制目前尚不十分明確，有研究認為其發生與丘腦、小腦、腦干梗死及梗死后血糖升高、神經功能缺損程度有關，但依然存在很多知識盲點和治療難點[9-10]。MTL是一種能刺激胃腸道平滑肌收縮的腦腸肽，能夠加快胃排空，進一步促進胃腸蠕動，尤其對消化間期移行復合運動有強烈效果[11]。本實驗還引入胃電圖動態評估急性腦梗死后胃動力變化情況，涉及的指標主要是慢波振幅和慢波頻率，慢波頻率主要反映胃的運動速度,慢波振幅則反映胃的收縮強弱[12]。本研究結果顯示，造模后腦梗死組大鼠較正常對照組和假手術組大鼠，第4、7 d MTL水平明顯升高(P<0.05)，第1、4、7 d胃電圖慢波振幅顯著降低(P<0.05)，頻率明顯升高(P<0.05)，其中第4 d時腦梗死組大鼠的胃電圖慢波振幅最低(P<0.05)、頻率最高(P<0.05)。說明腦梗死后大鼠并發了胃動力障礙，胃動力激素調控發生了紊亂，MTL水平升高，胃的蠕動增快，但收縮強度在下降，且在第4 d時胃動力障礙達到了最高峰。究其原因，考慮急性腦梗死后全身應激反應啟動，進一步影響了中樞神經系統及胃腸道神經系統，胃腸細胞分泌功能紊亂，MTL過度釋放，應激性增高[13]，同時胃竇、胃體蠕動節律及幅度紊亂，胃動力功能整體下降，傳輸能力受阻，胃黏膜防御能力降低，從而導致各種胃腸癥狀的發生[14]，且以第4 d為胃動力損傷恢復的轉折點。

急性腦梗死屬中醫學中風的范疇，毒損腦絡是中風發生的重要病因病機，也逐漸在廣大中醫學者中達成了共識[15]。毒邪貫穿于中風急性期始終，中風時所產生的毒性病理產物，不僅參與了腦神經損傷的病理過程，而且還是中風病情險惡、難以治愈的關鍵[16]。老年人本就脾胃氣陰不足，脾易失健運，加之毒邪蘊結胃腸,阻滯中焦氣機，脾升胃降失常，以致食滯不化，腑氣壅滯，或瘀血內阻，傳化不能，腑氣不通，從而可導致一系列脾胃系統癥狀[17]。經典古方黃連解毒湯是清熱解毒通絡的代表方劑，現代研究證實黃連解毒湯具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、調節纖溶系統、保護神經元、保護血管內皮細胞等多種藥理作用，近年來已經被廣泛應用于腦梗死的臨床治療中[18-20]。枸櫞酸莫沙必利是臨床上常用的促胃腸動力劑，可通過興奮胃腸道膽堿能中間神經元及肌間神經叢的5-羥色胺(5-HT)受體而促進胃腸蠕動[21]。本研究結果顯示，與腦梗死組比較，枸櫞酸莫沙必利組、黃連解毒湯常規劑量組及黃連解毒湯高劑量組第4、7 d MTL水平均降低(P<0.05)，第1、4、7 d胃電圖慢波振幅均升高(P<0.05)，第4 d胃電圖慢波頻率均降低(P<0.05)，其中枸櫞酸莫沙必利組與黃連解毒湯常規劑量組在各項指標改善方面比較差異均無統計學意義(P>0.05)，而黃連解毒湯高劑量組第4 d MTL水平低于上述2組(P<0.05)，第1、4、7 d胃電圖慢波振幅高于上述2組(P<0.05)。說明枸櫞酸莫沙必利片和黃連解毒湯對急性期腦梗死大鼠胃動力障礙均有改善作用，其中高劑量的黃連解毒湯治療效果最佳，對MTL水平胃電圖慢波振幅改善更明顯，常規劑量黃連解毒湯治療效果與枸櫞酸莫沙必利片相當。

綜上所述，黃連解毒湯對急性期腦梗死大鼠胃動力障礙具有明確的治療作用，可有效提升胃電圖慢波振幅，增強胃的收縮力量，同時可降低胃電圖慢波頻率，降低胃的蠕動速度，并可降低胃動素的水平，綜合調控腦梗死急性期胃動力的紊亂，讓胃動力趨向于正常運動水平，且其調節作用有一定的量效關系，高劑量療效優于常規劑量。黃連解毒湯治療急性期腦梗死胃動力障礙的有效性已逐步被證實，但其更多的作用機制和作用靶點還有待于進一步深入探究。