雞大腸桿菌病診斷

趙永平

（四川省南充市高坪區動物疫病預防控制中心，四川 南充 637000）

雞大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的，表現為大腸桿菌性敗血癥、大腸桿菌性肉芽腫、氣囊病、蜂窩織炎、腫頭綜合征、腹膜炎、輸卵管炎、滑膜炎、全眼球炎和臍炎。

1 流行病學

幼齡雞對本病最易感，發病率可達30%～60%，病死率可達100%，其常發生于3～6周齡幼雛；成年蛋雞往往在開產階段發病，其生產性能受影響；種雞發生本病時影響種蛋孵化率、出雛率，造成死胚和毛蛋增多，健雛率降低。該病不僅能導致雞發育不良、生長遲緩、生產性能下降，還可造成死淘率增高等。

大腸桿菌耐藥菌株較多，耐藥譜較廣，個別菌株表現出極強的耐藥性。在臨床防治中，應選擇敏感藥物預防和治療本病。

2 臨床癥狀

病雞精神萎頓，不喜活動，食欲下降，羽毛松亂，兩翅下垂，閉目呆立，腹瀉，糞便呈灰白色或灰黃色，少數為黃棕色，肛門周圍被糞便污染，有的泄殖腔紅腫、外翻，發生臍炎，腹部膨脹。

患雞平衡失調，爪部干縮，呼吸困難，發啰音，部分雞在昏迷狀態中死亡，有的死前倒地，仰臥，兩腿向后伸張，拍打翅膀掙扎。病程稍長的出現眼球炎，其上下眼瞼嚴重腫脹，結膜發炎，角膜混濁，部分病雞失明。

3 剖檢變化

病死雞氣囊壁混濁、增厚，并有黃白色纖維絮狀物附著，部分雞氣囊腔內有干酪樣物；心包混濁、變厚，其上也附有白色纖維樣物，少數雞心包腔內有數量不等的淡黃色積液，心包膜與心外膜黏連；心臟表面有出血點；肝稍腫大、瘀血、質脆，邊緣呈黃色，表面有白色纖維素膜附著，易剝離；膽囊腫大；輸卵管明顯增粗，內積黃白色干酪樣滲出物，嚴重者輸卵管阻塞。

4 實驗室檢查

4.1 分離培養 取5 份病料接種于普通瓊脂平板、麥康凱培養基，置37 ℃培養24 h。通過分離培養分離出1 株大腸桿菌，5 個普通瓊脂培養基上的菌落均為直徑2～3 mm，中等大小，圓形，微突起，表面光滑、濕潤，半透明，邊緣整齊，在陽光下呈鉛灰色。麥康凱培養基上的菌落呈磚紅色，大小不一，表面光滑、濕潤、微隆起，從培養基側面觀察單個菌落可見紐扣樣結構，其中間部位凹陷，周圍突起。

分離菌在營養肉湯中培養24 h 后均勻混濁，管底有灰白色沉淀，沉淀振蕩后呈云霧狀散開并有糞臭味，液面管壁有菌環，符合大腸桿菌特征。

4.2 純培養 無菌選取普通瓊脂平板上的單個可疑菌落，劃線接種到麥康凱瓊脂上，37 ℃培養24 h 后，挑取麥康凱瓊脂平板上單個紅色的菌落再接種于麥康凱瓊脂平板上，37 ℃培養24 h，如此反復純化3 次，選擇純培養菌落接種到營養肉湯中，置4 ℃條件保存備用。

4.3 染色鏡檢 挑取純培養的單個菌落少許制片，革蘭氏染色，鏡檢。

4.3.1 制片過程 取玻片用95%的酒精棉揩擦后，在酒精燈燈焰上輕拖幾次；用滅菌接種環從營養肉湯中取3 環置于玻片中央，均勻涂布成適當大小的薄層后自然干燥；干燥后將涂抹面向上，玻片背面在酒精燈燈焰上來回通過數次，每次過焰后以不燙手為度，進行固定。

4.3.2 革蘭氏染色步驟 在干燥、固定好的抹片上滴加草酸銨結晶紫溶液，經2 min水洗，加革蘭氏碘溶液于抹片上媒染，作用3 min，加95%酒精于抹片上脫色，1 min 后水洗；加稀釋的石炭酸復紅復染30 s，水洗，吸干。

4.3.3 鏡檢 顯微鏡下見到染為紅色的桿菌，其兩端鈍圓，散在、成對或成叢存在，偶爾有3 個連在一起的，無芽孢。

4.4 生化鑒定 生化試驗表明所分離的菌株對葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇均產酸產氣，不發酵蔗糖，MR試驗陽性、VP試驗陰性、靛基質試驗陽性、枸櫞酸鹽利用試驗陰性、三糖鐵試驗陰性。試驗結果符合大腸桿菌的特性。

4.5 動物試驗 將18只37日齡健康雛雞隨機分為A、B 二組，每組9 只。A 組頸部皮下接種致病菌0.2 mL/只，B 組頸部皮下接種相同劑量的滅菌生理鹽水作對照。接種后的雛雞按正常標準隔離飼養，喂給不含藥物的飼料，每天上、下午各記錄一次雞的死亡情況及發病癥狀，對病死雞可刮取腸黏膜染色、涂片、鏡檢，并采集心血進行細菌分離、生化鑒定，直到接種后7 d為止，若A組中仍有雞存活，對其進行捕殺，觀察病變。10 d后對B組雞進行剖檢，觀察有無病變。

接種后A 組雞均發病，主要表現為精神沉郁，呼吸困難，喘氣，垂翅，豎毛，縮頸，飲食欲下降或廢絕，死亡高峰在發病12～24 h，病死雞病變主要見于心包、氣囊、肝，其心包積液，氣囊混濁和肝臟腫大、瘀血，典型病變出現于接種48 h后，可見死亡雞纖維素性心包炎、肝周炎，氣囊上有多量干酪樣滲出物。對照組雞均健活，捕殺時未見眼觀病變，心、肝等也未分離出細菌。

刮取接種后死亡雞的腸黏膜染色、涂片，進一步接種麥康凱培養基，并進行生化鑒定試驗，結果證實為大腸桿菌。

4.6 藥敏試驗 用無菌棉拭子蘸取致病菌液，在普通瓊脂培養基上均勻涂抹后，于室溫放置5 min。將藥敏紙片相隔一定距離均勻貼于平板上，于室溫放置15 min 后將平板倒置，于37 ℃溫箱中培養24 h，觀察記錄結果。

結果表明大腸桿菌對青霉素、強力霉素輕微耐藥，而對丁胺卡那霉素、磺胺嘧啶敏感。

5 防控措施

為減少細菌耐藥性產生，提高療效，應合理使用抗菌藥物。用藥時應嚴格根據適應癥，合理確定用藥劑量與療程，不要長期使用某幾種藥物，應采用聯合用藥、交叉用藥或輪換用藥等方法。

大腸桿菌病在雞群中的發生和流行除與天氣變化及大量濫用抗生素導致耐藥菌株產生有關外，飼養環境、養殖條件、雞場衛生狀況等也是引起發病的重要因素。減少或者杜絕大腸桿菌病發生需加強飼養管理、搞好環境衛生、嚴格消毒并堅持自繁自養、全進全出，不從有大腸桿菌病感染史的種雞場或孵化室購雞，確需購買的應進行大腸桿菌病監測，確定無病后方可購入。雞場應控制飼養密度，防止過分擁擠并保持空氣流通、新鮮，防止有害氣體蓄積，同時應定期消毒雞舍、用具及養殖環境。■