全自動免疫組織化學染色技術的應用效果分析

朱曉琳 尚 宇

（1 大連市中心醫院病理科，遼寧 大連 116000；2 大連醫科大學附屬第一醫院，遼寧 大連 116000）

對于病理技術而言，免疫組織化學染色技術屬于極為重要的一種染色方法，在病理工作期間其應用率呈現出顯著增加，并且在進行疾病診斷期間，表現出顯著價值[1]。免疫組織化學染色作為病理技術之一，近年來獲得快速發展，但具體操作期間往往因為溫度、濕度、人為因素、時間等系列因素影響呈現出不穩定結果的現象，從而使得結果對比工作難以順利展開，無法順利做到質量控制，所以針對病理技術員表現出的要求逐漸提升[2]。在進行傳統手工技術操作期間，往往因為一系列不確定因素影響使其在病理診斷中呈現出一系列的誤診現象，在此種情形下，全自動免疫組織化學染色方法的有效運用，以及呈現出運行體系獨特性特點，并且準備激光條碼掃描進行配備，能夠利用電腦操作系統對軟件程序進行有效控制，呈現出簡便安全染色操作特點，對于系列外界因素能夠充分避免，并且可將病理檢測結果準確度顯著提升，最終在提升免疫組織化學標準化程度以及對質量進行控制方面表現出顯著價值[3]。本次研究將我院2017年12月至2020年2月收治的100例常見腫瘤患者作為試驗對象；對患者展開包埋切片操作，完成后對應進行檢測方法的劃分，分別采用手工操作以及全自動免疫組化機合理展開免疫組化染色操作，旨在探析全自動免疫組織化學染色技術在常見腫瘤疾病診斷中的可行性，以實現疾病有效診治與預后。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將我院2017年12月至2020年2月收治的100例常見腫瘤患者作為試驗對象；采用福爾馬林（10%）針對標本展開固定操作，完成石蠟包埋以及切片操作后，分別采用手工操作以及全自動免疫組化機合理展開免疫組化染色操作。

1.2 方法 分別利用手工操作以及全自動免疫組化機展開免疫組化染色操作。于前期在組化機中有效編入每項抗體優化程序，對于此次試驗信息標簽進行有效打印，之后在對應玻片上方進行黏貼，完成一系列準備后，將全自動免疫組化機啟動，合理展開抗原修復、烤片、DAB顯色、抗體滴加以及蘇木素復染操作，對于上述系列操作均需要在染色劑上方展開。將切片取下后，合理展開脫水透明操作，針對中性樹膠合理展開封片操作。主要利用EnVision兩步法合理展開手工染色操作，具體為：針對石蠟實施切片，確保達到脫蠟至水目的，之后合理展開抗原修復（通過高壓鍋高溫完成）操作，于室溫條件下進行冷卻后，針對H2O2（3%）實施10 min室溫孵育，以有效消除內源性過氧化物酶活性，合理展開蒸餾水沖洗操作，之后合理展開浸泡、沖洗等一系列操作。

1.3 觀察指標

1.3.1 免疫組化分析結果統計 統計手工操作以及全自動免疫組化機的免疫組化分析結果，統計其陽性檢出率，對比兩組陽性檢出率。

1.3.2 免疫組化染色效果觀察 顯微鏡下觀察染色效果，由病理醫師和病理技術質控員評估手工操作以及全自動免疫組化機的免疫組化染色情況，評分0～10分，評分越高，則表示染色效果越高，對比兩組評分情況。

1.4 統計學方法 采用SPSS20.0 統計學軟件分析所有數據，以均數±標準差（）表示計量資料，采用t檢驗；以（%，n）表示計數資料，采用χ2檢驗，P＜0.05認為差異顯著，有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組化分析結果統計 于臨床合理完成染色封片操作后，隨機抽取兩組染片，于顯微鏡觀察下展開對應診斷操作發現，最終發現100例全自動免疫組化染色患者中，表現出背景著色患者4例，表現出陽性細胞患者98例，表現出邊緣著色患者2例；100例手工染色患者中，表現出背景著色患者32例，表現出陽性細胞患者80例，表現出邊緣著色患者48例。經統計后可知，全自動免疫組化機染色者，陽性細胞檢出率（98.00%，98/100）顯著高于手工操作染色者（48.00%，48/100），兩種方法之間呈現出顯著性差異（P＜0.05）。

2.2 免疫組化染色效果比較 于全自動免疫組化機染色下，表現出較強的染色強度以及準確組織定位結果，呈現出較低假陰性率以及較高陽性率，能夠獲得清晰背景，僅2例表現出切片邊緣著色情況。對于手工染色而言，其雖然能夠做到準確組織定位，但是呈現出強弱不一染色強度的現象，表現出背景著色不清晰，呈現出非特異性染色的現象，表現出較多切片邊緣著色現象。組織標本染色完成封片后，全自動免疫組化機染色和手工染色的玻片標本鏡下對比顯示：與手工染色的組織標本相比，全自動免疫組化機染色的組織標本透光性較好，染色劑的組織穿透性強，染色信號放大，陽性細胞的表達清晰、染色程度較深，背景和非特異性染色淺，有效提高了鑒別診斷的敏感性；與手工染色的組織標本相比，全自動免疫組化機定位準確，未出現染色顏色深淺不一的現象。顯微鏡下評估染色效果顯示，全自動免疫組化機染色評分為（9.45±0.32）分，明顯高于手工操作染色者的（7.35±0.32）分，差異具有統計學意義（χ2=5.369，P＜0.05）。

3 討 論

近年來，免疫組織化學技術獲得快速發展，并且在各項技術獲得快速發展情形下，在染色方面由人工化逐漸向自動化發展。作為近年發展較快學科之一，呈現出較高靈敏度、較強特異性以及定位準確特點，其能夠將病理診斷準確性顯著提高，在基礎、臨床學科中可以有效滲透，對于疾病診斷、預后判斷以及治療指導等方面表現出顯著的價值。但是免疫組織化學技術作為多因素以及多步驟決定的試驗方法之一，具有諸多干擾因素，甚至可能呈現出不理想染色結果現象，導致出現判斷錯誤的情況。對于手工染色而言，即使其能夠做到準確定位，但是表現出背景不清晰以及染色強度強弱不一的特點，往往會表現出非特異性染色的現象，呈現出較多的切片邊緣著色情況[4]。與手工染色進行比較，全自動免疫組織化學染色表現出的優勢較多，并且能夠顯著提升染色效果，呈現出較強的染色強度，可獲得清晰背景，不會表現出切片邊緣著色的情況[5]。

對全自動免疫組化機染色獲得較好效果的原因進行分析，主要是其抗原修復強度、烤片溫度、作用時間以及每張切片試劑量均呈現出相對固定的特點，表現出較好的重復性[6]。通過機器噴射式清洗，對于清洗的徹底性以及均勻性可以做出充分保證，并且表現出手工誤差的概率較低，能夠將背景染色有效降低。此外，可以保證其覆蓋的完整性，充分避免試劑的揮發，保證最適液體量以及持續維持反應環境，從而避免呈現出切片邊緣著色以及干片的現象。而對于手工染色而言，其表現出較多影響因素，主要集中于組織易脫片、抗原修復時間過長以及修復時間過短等系列缺點，較易呈現出假陰性的現象[7-8]。

本次研究于臨床合理完成染色封片操作后，隨機抽取兩組染片，在顯微鏡觀察下展開對應診斷操作發現，全自動免疫組化機染色表現出較強的染色強度以及準確組織定位結果，呈現出較低假陰性率以及較高陽性率，能夠獲得清晰背景，未表現出切片邊緣著色情況[9]。而手工染色雖然能夠做到準確組織定位，但是呈現出強弱不一染色強度的現象，表現出不清晰背景，呈現出非特異性染色的現象，表現出較多切片邊緣著色現象。100例全自動免疫組化染色患者中，表現出背景著色患者4例，表現出陽性細胞患者98例，表現出邊緣著色患者2例；100例手工染色患者中，表現出背景著色患者32例，表現出陽性細胞患者80例，表現出邊緣著色患者48例，最終發現兩種方法之間呈現出顯著差異性。對比全自動免疫組化染色和手工染色結結果發現，在背景著色、邊緣著色方面差異顯著，二者對陽性細胞的檢出效果也存在較大差異，兩種方法之間呈現出顯著差異性。提示全自動免疫組化機染色在染色強度、準確組織定位、背景著色、邊緣著色方面明顯優于手工染色，原因可能是：全自動免疫組織化學染色抗原修復、烤片、DAB顯色、抗體滴加以及蘇木素復染等諸多過程均在染色機上完成，將切片取下后實施脫水以及透明，完成后合理展開中性樹膠封片。其與手工染色比較，可做到染色省力、省時，獲得上述理想效果，充分證明全自動免疫組織化學染色技術應用的可行性[10-11]。此外，觀察兩組染色效果，組織標本染色完成封片后，對比全自動免疫組化機染色和手工染片的玻片標本鏡下顯示效果發現，與手工染色的組織標本相比，全自動免疫組化機染色的組織標本，透光性較好，染色劑的組織穿透性強，染色信號放大，陽性細胞的表達清晰、染色程度較深，背景和非特異性染色淺，有效提高了鑒別診斷的敏感性；同時，全自動免疫組化機定位準確，未出現染色顏色深淺不一的現象，而手工染色處理者，非特異性背景染色不清晰，背景染色不佳，誤診風險較高，易出現假陽性病例；顯微鏡下評估染色效果也顯示，全自動免疫組化機染色評分為（9.45±0.32）分，而手工操作染色者評分為（7.35±0.32）分，差異具有統計學意義，提示可知全自動免疫組化機染色可獲得更好的組織標本染色效果較人工染色的染色質量更佳，有助于控制組織標本的染色質量水平[12]。

全自動免疫組化機染色效果佳，且染色效率顯著提升。病理檢驗科工作繁忙，病理檢驗任務繁重，全自動免疫組化機的應用，可有效提升工作效率，減輕病理醫師的工作負擔。全自動免疫組化及染色過程只需2 h，可將大批量的標本放置于儀器玻盤中，2 h即可完成所有病理標本染色處理操作[13]。當前，臨床常用的全自動免疫組化機，多具備3個玻片盤，每個玻片盤可承載多個玻片標本，3個玻片盤同時運行狀況下，可一次性完成30多個病理組織標本的染色工作。同時，現代全自動免疫組化機也可實施單排撥片標本檢測，靈活性較高，應用于急診檢測較為方便；對于檢測數量較少的時間段和醫療機構，使用全自動免疫組化機的單排玻片標本檢測，也可以節約能源，縮短檢測時間，臨床應用效果較為理想。全自動免疫組化機，可連接自動免疫組化儀，實現連續玻片上載功能。一臺自動免疫組化儀，可連接數個全自動免疫組化機，并自動運行玻片上載程序，可有效減輕檢驗人員的工作負擔，大大提升了檢測效率。全自動免疫組化機的檢測操作準確，與人工操作相比，可有效避免出現錯誤或者操作失誤，而自動運行撥片上載程序，也可避免撥片管理錯誤，有效提升了病理組織學檢驗準確性。利用全自動免疫組化機輔助制片，大大提升了病理醫師的制片效率，可為病理診斷及臨床診斷節約大量的時間，促進患者盡早治療，同時也有助于緩解醫療資源緊張的局勢[14]。

常規臨床病理制片中較容易出現組織脫落的情況，主要與操作不當、溫度控制不當等因素有關，同時受操作者的技術水平影響也較大。但是，全自動免疫組化機，可設定出最合理的操作步驟和溫度，精確控制每一個步驟和操作溫度，保證玻片標本病理組織處理的準確性，并可防止組織脫落，避免影響后續病理診斷工作。玻片標本的人工操作染色過程中，對于酸堿度的控制難度較大，敏銳地察覺酸堿度的異常，調整操作要求較高，對病理醫師的操作水平要求亦較高。但全自動免疫組化機可有效解決酸堿度調節的問題。當前，病理診斷中使用的全自動免疫組化機已經配備酸性修復液和堿性修復液，這兩種修復液可根據玻片標本處理的不同階段需求，設置酸性修復液和堿性修復液的釋放量，并監測機體pH值，進一步調整修復液釋放量，保證達到最合理的pH值狀態，確保病理玻片標本在酸堿度適宜的環境中完成染色等操作。另外，全自動免疫組化機實現了玻片標本試劑用量的定量滴加，并可調整玻片盤位置；試劑滴注前，玻盤調整角度，使玻片微微傾斜，促進試劑均勻分布于標本組織表面，以保證處理的有效性。全自動免疫組化機中不同廢液的收集與排放，存在單獨的途徑，不同廢液可單獨排放并儲存起來，便于后續進行正確處理[15]。

免疫組化技術是現代病理診斷的重要技術，在多種疾病診斷中發揮了重要作用，使其成為診斷的金標準，直接決定臨床診斷與治療方案的制訂，具有重要的臨床意義，因此必須保證免疫組化技術的準確性。近年來病理診斷技術發展迅速，免疫組化技術也獲得了較大提高，病理診斷工作量大幅度提升，常規病理醫師的手工操作，難以滿足臨床病理診斷的實際需求。因此，臨床領域積極引進了全自動免疫組化機，可實現全自動免疫組化染色操作，大大提升了免疫組化診斷的工作效率，具有省時、省力等優點。當前，我國的病理實驗室正積極面向國際化標準發展，全自動免疫組化機的使用，可實現病理診斷的標準化和可控化，有助于提升其質控水平，便于醫療機構構建標準化的病理實驗室。與人工操作相比，全自動免疫組化機染色，既提高了操作效率，又保證了操作準確性和染色有效性，具有科學合理的優勢。免疫組化分析過程中產生的廢液對環境污染較為嚴重，人工收集較為繁瑣，容易出現污染情況；全自動免疫組化機的廢液合理收集方式，可有效避免廢液污染，便于后續集中回收，有助于提高病理免疫組化分析的環境保護水平[16]。

綜上所述，同手工操作染色進行比較，全自動免疫組織化學染色技術能夠獲得顯著效果，對于染色標準化較易做到，對于手工染色呈現出人工完成取點可以充分避免，對于整個過程均可以做到自動完成，可使得人為影響因素顯著減少，對于質量標準化可以輕易達到，可凸顯全自動免疫組織化學染色技術的應用優勢。