金桂花干花提取物的急性毒性及鎮痛、 抗炎作用的研究

龐元美 盧紅梅 王斌 覃培松 韋燕清 韋雪

（1.廣西警察學院，廣西 南寧 530028；2.廣西農業職業技術大學，廣西 南寧 530007）

金桂花（Osmanthus fragransvar. thunbergii Makino）屬木犀科木犀屬植物 ，廣泛栽種于南方地區，藥材資源非常豐富。為溫帶樹種，葉對生，葉面光滑，多呈橢圓或長橢圓形，花簇生，金黃色，味香持久。藥食同源，可觀賞、食用和藥用；花常用于制作點心，釀酒，茶水及香料等；有藥用價值的部分主要為桂花的花、果實及種子等。［1］古有記載：“治筋骨疼 痛，氣痛，散郁”和 “貼牙痛，取桂樹根上皮用”等。現代研究表明桂花有抗氧化、增強免疫、調節血脂、抗菌、抗癌、抗氧化及護肺等功效。［2-8］民間在風 火牙疼方面有用桂花根莖來治療。目前大多數的報道主要是對桂花的根莖葉進行了研究，有關桂花干花進行研究的報道極少。本研究采用最大耐受劑量、醋酸扭體法及耳廓腫脹法，探討金桂花干花提取物的急性毒性及鎮痛、抗炎作用，以期為金桂花的開發提供參考數據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

昆明種小鼠，SPF級別，每只體重18~22 g，雌雄兼用，購自廣西醫科大學實驗動物中心。

1.1.2 試劑

二甲苯（批號：2020年3月5日，天津市富寧精細化工）；無水乙醇（批號：170505，西隴科學）；冰醋酸（批號：20170221，廣東光華科技）。

1.1.3 藥材

金桂花干花提取物采摘自廣西境內；阿司匹林腸溶片（批號：191203，舒泰神生物制藥）；生理鹽水（四川科倫藥業）。

1.1.4 儀器

電子天平（FB203C，上海佑科儀器儀表）；電熱套（KDM型，山東鄄城華魯）；循環水式真空泵（SHZ-D（Ⅲ），上海驚精其儀）；Dura超純水儀（上海和泰儀器）；旋轉蒸發儀（RE-2000B，上海亞榮）；打孔器（直徑0.6 cm）。

1.2 實驗方法

1.2.1 金桂花干花提取物的制備

稱取金桂花干花500 g，用4 L、60%乙醇浸泡48 h。用旋轉蒸發儀回流提取2 h，過濾除去藥渣，合并提取液。提取液在50℃減壓回收乙醇，濃縮得浸膏113.12 g，4℃冰箱保存備用。

1.2.2 藥物給藥濃度的配制

金桂花干花提取物低劑量組、中劑量組及高劑量組分別1 g/kg、2 g/kg及4 g/kg，用生理鹽水配制成低、中及高三種不同的濃度，即分別為0.05 g/mL、 0.1 g/mL及0.2 g/mL。阿司匹林腸溶片去外層包衣后研成細粉，成年人用量0.75~1.5 g/次，體重 70 kg，再根據動物劑量換算方法計算，小鼠給藥劑量范圍為0.132~0.264 g/kg/次，本次實驗阿司匹林陽性對照組設計為0.15 g/kg，用生理鹽水配置成7.5 mg/mL。［9］

1.2.3 急性毒性實驗

預試驗結果顯示金桂花干花提取物毒性極低，故本實驗采用最大耐受劑量進行正式實驗［10］，取20 只健康小鼠，雌雄各半，按性別和體重隨機分為兩組，金桂花干花提取物給藥組和生理鹽水組，給藥組劑量為5 g/kg，配成0.25 g/mL濃度，兩組小鼠按0.2 mL/10 g灌胃給藥，連續觀察14天，每天觀察和記錄小鼠的活動、精神狀態、攝食量、體重變化、排泄物及死亡等方面情況。觀察期滿將存活的小鼠處死，解剖并用肉眼觀察各主要器官（心、肝、肺、腎及脾等）的情況。

1.2.4 醋酸扭體法實驗［11］

小鼠60只，隨機分為5組，每組12只，即生理鹽水組、阿司匹林陽性對照組，三組金桂花干花提取物不同給藥組（即低劑量組、中劑量組及高劑量組）。每天稱重小鼠一次，每只小鼠按體重灌胃給藥，0.2 mL/10 g給予相應的藥，生理鹽水組給予生理鹽水，連續7 d。末次給藥30 min后，用濃度為0.6%的新配制的醋酸溶液對小鼠進行腹腔注射，每只小鼠注射0.2 mL，記錄小鼠的扭體反應數量，記錄15 min，并計算小鼠的扭體抑制率，即疼痛抑制率。

疼痛抑制率（%）=（生理鹽水組平均扭體次 數—給藥組平均扭體次數）/生理鹽水組平均扭體次數×100%。

1.2.5 耳廓腫脹法實驗［12］

小鼠60只，隨機分為5組，每組12只，即生理鹽水組、阿司匹林陽性對照組，三組金桂花干花提取物不同給藥組（即低劑量組、中劑量組及高劑量組）。每天稱重一次，每只小鼠按體重灌胃給藥，0.2 mL/只給予相應的藥，生理鹽水組給予生理鹽水，按連續7 d。末次給藥1 h后，各組小鼠分別于左耳兩面均勻涂抹0.03 mL二甲苯，右耳不做處理，作為對照。1 h后頸椎脫臼處死小鼠，先用剪刀把左右耳剪下，用打孔器（直徑0.6 cm）在左右耳同一位置分別對各組小鼠打孔取耳片，每個耳片為圓形，稱量重量并記錄，計算腫脹度和腫脹抑制率。腫脹度等于每只小鼠左耳片與右耳片重量 相減。

腫脹抑制率（%）=（生理鹽水組腫脹度平均 數—給藥組腫脹度平均數）/生理鹽水組腫脹度平均數×100%。

1.2.6 統計學數據處理

采用Excel統計進行統計學處理，結果以（±s） 表示，采用t檢驗組間比較。

2 結果與分析

2.1 急性毒性實驗結果

與生理鹽水組比較，在14 d內觀察期間給藥組小鼠的活動、攝食量、尿液及糞便無異常，體重的增長正常，精神較好，無死亡現象。解剖結果顯示各主要器官均未發現有任何肉眼可見的異常。實驗結果見表1。

表1 金桂花干花提取物對小鼠體重變化的影響（ ±s）

表1 金桂花干花提取物對小鼠體重變化的影響（ ±s）

組別 劑量（g/kg） 小鼠數（只）性別 藥前體重（g）7天后體重增加值（g）14天后體重增加值（g）-生理鹽水組5 ♂ 20.38±1.1 5.57±0.9 5.33±1.4-5 ♀ 20.41±1.0 6.01±1.1 5.92±1.5給藥組 5 5 ♂ 20.12±0.9 5.39±0.8 5.02±1.3 5 5 ♀ 20.07±1.2 5.74±1.3 5.17±1.0

2.2 金桂花干花提取物對醋酸誘導小鼠疼痛反應的影響

與生理鹽水組比較，金桂花干花提取物低劑量組、中劑量組及高劑量組均能減少小鼠扭體反應次數，低劑量組和中劑量組有顯著性差異（P＜0.05），疼痛抑制率分別為31.10%和46.01%，高劑量組有非常顯著性差異（P＜0.01），疼痛抑制率較高，為50.35%，且隨著劑量的增大，疼痛抑制率逐漸增強。結果提示實驗藥物對醋酸誘導的小鼠疼痛反應具有較強抑制作用，且與劑量呈正相關。實驗結果見表2。

表2 金桂花干花提取物對小鼠的鎮痛作用（ ±s）

表2 金桂花干花提取物對小鼠的鎮痛作用（ ±s）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 劑量（g/kg） 小鼠數（只） 扭體反應數量（次） 鎮痛率（%）生理鹽水組 - 12 38.23±3.0 -阿司匹林組 0.15 12 20.12±2.6* 47.37低劑量組 1 12 26.34±2.7* 31.10中劑量組 2 12 20.64±3.2* 46.01高劑量組 4 12 18.98±1.8** 50.35

2.3 金桂花干花提取物對二甲苯誘導小鼠炎癥反應的影響

與空白對照組比較，金桂花干花提取物低劑量組、中劑量組及高劑量組均能減輕小鼠腫脹度，低劑量組和中劑量組有顯著性差異（P＜0.05），腫脹抑制率分別為35.33%和41.48%，高劑量組有非常顯著性差異（P＜0.01），腫脹抑制率較高，為62.80%，且劑量越大，腫脹抑制率越強。提示實驗藥物對小鼠炎癥反應具有較強抑制作用，且與劑量呈正相關系。實驗結果見表3。

表3 金桂花干花提取物對小鼠的抗炎作用（ ±s）

表3 金桂花干花提取物對小鼠的抗炎作用（ ±s）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 劑量（g/kg） 小鼠數（只） 平均腫脹度（mg） 腫脹抑制率（%）生理鹽水組 - 12 11.21±1.7 -阿司匹林組 0.15 12 6.34±2.1** 43.44低劑量組 1 12 7.25±1.5* 35.33中劑量組 2 12 6.56±2.7* 41.48高劑量組 4 12 4.17±2.0** 62.80

3 討論

非甾體抗炎藥的解熱、鎮痛、抗炎及抗風濕等方面的療效確切，至今已有100多年應用歷史，絕大多數藥物屬于非處方藥，在臨床治療中應用非常廣泛，但也是一類不良反應發生較多的藥物。［13］開發出效果好且不良反應較少的新型非甾體抗炎藥是研究方向。

急性毒性試驗中小鼠的活動、攝食量、尿液及糞便無異常，體重的增長正常，精神較好，無死亡現象，初步結果表明金桂花干花提取物未顯示出明顯急性毒性，基本無毒。醋酸扭體法和耳廓腫脹法實驗表明，金桂花干花提取物在低劑量組、中劑量組及高劑量組（1 g/kg、2 g/kg及4 g/kg）下均可較明顯減少醋酸誘導的小鼠扭體反應次數和減輕二甲苯誘導的小鼠耳廓腫脹度，提高疼痛抑制率和腫脹抑制率，提示其具有較強的鎮痛及抗炎作用，且作用與劑量呈正相關系。金桂花干花提取物的鎮痛抗炎作用與阿司匹林相比，顯示出更好的鎮痛及抗炎藥效活性。對于金桂花干花提取物尚未確定和闡明的活性成分及作用機制，值得做進一步研究及開發。