水稻立枯病原菌尖孢鐮孢菌致病力降低T-DNA突變體的篩選與插入位點(diǎn)鑒定

張俊華，楊松潤(rùn)，彭莉莉，王 亮，楊明秀，徐曉鳳，倪 哲，李培寧

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，哈爾濱 150030）

近年來(lái)，黑龍江省水稻播種面積逐年增加，但因氣溫變化大、播種密度大和管理防控措施不到位等情況，黑龍江省水稻立枯病發(fā)生嚴(yán)重，秧苗大面積死亡，嚴(yán)重影響水稻品質(zhì)與產(chǎn)量[1]。

尖孢鐮孢菌（FusariumoxysporumSchelcht）是引起水稻立枯病主要病原真菌。該菌可侵染100多種不同植物[2]，根據(jù)其植物寄主范圍，如雙子葉植物豆類、單子葉植物香蕉等，表現(xiàn)出復(fù)雜的致病特性和遺傳多樣性[3]，被列為世界第5大植物病原真菌[4]。尖孢鐮孢菌主要通過(guò)分泌細(xì)胞壁降解酶和毒素侵害宿主植物[5-6]。細(xì)胞壁降解酶負(fù)責(zé)降解細(xì)胞壁，促進(jìn)尖孢鐮孢菌侵入與增殖，其中降解產(chǎn)生的果膠阻塞宿主植物導(dǎo)管導(dǎo)致萎蔫[7]。毒素抑制宿主植物防御反應(yīng)，促進(jìn)病菌侵染[6]。Zhang等發(fā)現(xiàn)尖孢鐮孢菌具有譜系特異性染色體，宿主范圍廣泛[8]。由于尖孢鐮孢菌遺傳背景復(fù)雜，水稻立枯病防治主要集中在化學(xué)藥劑上，缺少高效防治方法。認(rèn)識(shí)水稻立枯病菌致病機(jī)制是減輕病害重要手段，是尋求水稻秧苗發(fā)病有效防治策略的重要突破口[9]。

根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation，ATMT）自1995年成功轉(zhuǎn)化釀酒酵母，至今已有100多種真菌轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建成功[10]。該方法可使T-DNA隨機(jī)插入真菌基因組，打斷不同位點(diǎn)基因，獲得大量突變體。具有操作簡(jiǎn)單、轉(zhuǎn)化效率高、單次插入概率高的優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于了解宿主與病原物相互作用機(jī)制[11]。目前，關(guān)于水稻立枯病菌多集中在生物學(xué)特性、致病力分化和遺傳多樣性分析等方面研究，未見水稻立枯病菌致病機(jī)理的報(bào)道[12]。……